Transfecting RAW264.7 Cells with a Luciferase Reporter Gene

Sylvia T. Cheung; Soroush Shakibakho; Eva Y. So; Alice L-F Mui

doi:10.3791/52807

بنقل العدوى إلى خلايا RAW264.7 مع luciferase المراسل مراسل جين

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Transfecting RAW264.7 Cells with a Luciferase Reporter Gene

بنقل العدوى إلى خلايا RAW264.7 مع luciferase المراسل مراسل جين

Full Text

21,735 Views

12:58 min

June 18, 2015

DOI: 10.3791/52807-v

Sylvia T. Cheung^1,2,3, Soroush Shakibakho^1,2, Eva Y. So^1,2, Alice L-F Mui^1,2,3

¹Immunity and Infection Research Centre,Vancouver Costal Health Research Institute, ²Department of Surgery,University of British Columbia, ³Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of British Columbia

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

تعداء في خط خلية البلاعم ، RAW264.7 ، صعب بسبب الاستجابة الطبيعية للخلية ضد المواد الغريبة. وصفنا هنا إجراء لطيفا ولكنه قوي لنقل جينات مراسل لوسيفيراز إلى خلايا RAW264.7.

الهدف العام من هذا الإجراء هو نقل تقارير Luciferase إلى 2 6 4 0.7 خلايا خام دون تنشيط الخلايا. يتم تحقيق ذلك عن طريق حصاد 2 6 4 0.7 خلية خام أولا من صفيحة مخزون عن طريق سحب العينات اللطيف وخلايا البذر في صفيحة معالجة بزراعة أنسجة 24 بئر. الخطوة الثانية هي نقل تقرير يراعقة لوسيفيراز البلازميد وقام التحكم بتشغيل بلازميد لوسيفيراز في الخلايا.

يجب أن تكون هذه البلازميدات خالية من السموم الداخلية. بعد ذلك ، يتم تحفيز الخلايا بالعلاجات المرغوبة متبوعا بتحلل الخلايا ونقلها إلى صفيحة بيضاء 96 بئر ذات قاع واضح. الخطوة الأخيرة هي فحص نشاط اليراع لوسيفيراز ثم تشغيل نشاط لوسيفيراز لحساب اليراع إلى النسبة.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos