تعديل لColliculo-مهادية قشرية ماوس الدماغ شريحة، دمج الطباعة 3-D من مكونات الغرفة ومتعدد المقاييس التصوير الضوئي

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير شريحة قشرية Calot Thal بأربعة هياكل سمعية رئيسية ، القولون السفلي ، والمهاد السمعي ، والجزء السمعي من النواة الشبكية المهادية ، والقشرة السمعية. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة الدماغ أولا من الفأر. الخطوة الثانية هي منع الدماغ استعدادا للتقطيع.

بعد ذلك ، قم بقطع الدماغ للحصول على شرائح تحتوي على اتصال قشري Calot thal. الخطوة الأخيرة هي استخدام تصوير البروتين الفلافو لتقييم الاتصال. في النهاية ، يمكن استخدام شريحة الدماغ التي تحتوي على الاتصال القشري الشروي في مجموعة متنوعة من التجارب لفهم معالجة المعلومات بشكل أفضل في المناطق السمعية في منتصف الدماغ والأربعة ، يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات منع الدماغ قبل التقطيع لأنها تتطلب قطعا مزدوجا معقدا ، وهو أمر أساسي للحصول على توقعات سليمة.

وسيتم توضيح هذه التقنية BJ Slater, طالب دراسات عليا في مختبري, لإعداد مرحلة القطع للتقطيع, قطع قطعة صغيرة من 3٪ مثقب من حوالي سنتيمتر مكعب واحد لاستخدامها كدعم للدماغ, وقطعة أخرى من 1.5 سم × 1.5 ملليمتر × ثلاثة ملليمترات لاستخدامها كنتوء لدعم القولون السفلي. بعد ذلك ، قم بلصق الدعامة على المسرح باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate ، ثم قم بلصق النتوء على الجانب الأيمن من الدعامة بحيث تشكل زاوية 80 درجة على شريحة مميزة بخطرين عند 90 درجة وخط قطري عند 17 درجة من أعلى اليسار إلى أسفل اليمين ضع الجانب الظهري للدماغ لأعلى عند النقطة المتقاطعة للخطين. باستخدام شفرة حلاقة ، قم بإزالة ملليمترين إلى أربعة ملليمترات من الطرف المنقاري للدماغ لإنشاء سطح مستو.

بعد ذلك ، ضع جانب الدماغ لأعلى على السطح المستو الذي تم إنشاؤه حديثا. قم بمحاذاة السطح الظهري للدماغ بخط أفقي وخط الوسط للدماغ بخط عمودي محدد على الشريحة. ثم قم بمحاذاة شفرة الحلاقة بخط 17 درجة.

قم بإمالة ماكينة الحلاقة بزاوية 30 درجة وقم بإزالة ما يقرب من ثلاثة ملليمترات من القشرة اليمنى في قطع قطري مزدوج لتركيب الدماغ على مرحلة الاهتزاز. ضع قطعة صغيرة من ورق الترشيح على الجانب البطني من الدماغ بحيث يكون البعد الطويل عموديا على خط الوسط. ضع بعناية كمية صغيرة من مادة لاصقة cyanoacrylate على المنطقة أمام الدعامة وعلى يسار النتوء.

بعد ذلك ، ضع جانب الدماغ المقطوع قطريا المزدوج على الغراء بحيث يتم دعم الجزء اللطيف من الدماغ والدماغ الخلفي على النتوء ، ويكون الجانب الأيمن من الدماغ مقابل الدعامة. في هذا الإجراء ، ضع مرحلة القطع بسرعة في الاهتزاز ، وقم ببناء مرحلة بمحلول القطع. بعد ذلك ، قم بمحاذاة الشفرة مع الجزء العلوي من الدماغ.

قم بإزالة واحد إلى 1.5 ملم من أعلى الدماغ. ثم قم بتقطيع وإزالة المزيد من الشرائح من 300 إلى 500 ميكرومتر أثناء التحرك بشكل أعمق. عندما يكون القولون السفلي والجسم الإنسي ونواة تكنولوجيا المعلومات والاتصالات الجانبية مرئية ، يجب أن يظهر التلفيف المسنن على شكل C ويجب أن يكون الهيكل محاذاة.

احصل على حوالي شريحتين بحجم 600 ميكرومتر. هذه هي الشرائح القشرية الكاروتالية. بعد ذلك ، انقلها إلى غرفة الاحتجاز 32 درجة مئوية.

للحصول على صورة التألق الذاتي Flavoprotein ، اجمع الصور بأربعة هرتز لمدة 105 ثانية. قم بإضاءة الأنسجة بالضوء الأزرق من 470 إلى 490 نانومتر والتقطها فوق 515 نانومتر ، مما يضمن أن الصورة ليست مظلمة جدا أو منفوخة. ثم استخدم التحفيز الكهربائي لتنشيط الأنسجة للحصول على صورة الكالسيوم.

اجمع الصور بمعدل 10 هرتز لمدة 25 ثانية. قم بإضاءة الأنسجة بضوء 365 نانومتر والتقط التألق فوق 510 نانومتر. مرة أخرى ، تأكد من أن الصورة ليست مظلمة جدا ولا منفوخة.

ثم استخدم التحفيز الكهربائي لتنشيط الخلايا. توضح هذه الصورة تأكيد الاتصال القشري الشروفي في شريحة الدماغ بواسطة التألق الذاتي للبروتين الفلافو. تم تصوير التحفيز الكهربائي المعطى عند 0.05 هرتز إلى القولون السفلي عند أربعة هرتز وأربعة أ تمت معالجته لإظهار القوة في هذا التحفيز.

يتم تنشيط التردد ، المهاد السمعي ، المهاد ، الشبكي ، النواة ، والقشرة السمعية بشكل متشابك. هنا شريحة غير متصلة. شوهد التحفيز الكهربائي للقولون السفلي مع التنشيط فقط في المهاد السمعي.

لم يتم التقاط المسار بأكمله على الأرجح بسبب خروج أحد التخفيضات قليلا من الطائرة. مع إسقاطات علم القشرية. تظهر هذه الصورة التنشيط غير النمطي للقشرة السمعية.

التحفيز الكهربائي للقولون السفلي إلى تنشيط القشرة السمعية بدون إشارة مرئية. في المهاد السمعي ، من المحتمل أن المهاد لا يزال نشطا ، لكنه لم يكن على سطح الصورة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الحصول على شريحة قشرية مهادية AAL ، وتقييم اتصالها.