النهج ماوس جولة نافذة للالسامة وكيل التسليم: A السريع وتقنيات موثوقة لإحداث قوقعة تحلل الخلية

توجد طرق مختلفة لإدخال العوامل السامة للأذن إلى قوقعة النماذج الحيوانية. يتم تقديم بروتوكول جراحي لتوصيل العوامل السامة للأذن إلى مكانة النافذة المستديرة. الإجراء موثوق به ، ويخلق آفات مستهدفة داخل القوقعة الصناعية ، ويتجنب الضرر الميكانيكي للبنية الدقيقة. يمكن فحص الإصلاح الذاتي / التجديد الذاتي للقوقعة الصناعية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج لإصابة الأذن الداخلية من خلال توصيل العوامل السامة للأذن بشكل استراتيجي مباشرة إلى مكانة النافذة المستديرة لقوقعة الفأر. يتم تحقيق ذلك عن طريق تشريح الطبقة الدهنية تحت الجلد أولا وسحب جسم العضلات برفق للكشف عن السمحاق الفقاعي الطبلي. الخطوة الثانية هي فك غطاء البلاح عن طريق إزالة شظايا العظام تدريجيا حتى يتم الكشف عن مكانة النافذة المستديرة.

بعد ذلك ، يتم تجفيف السائل المرئي للأذن الوسطى ومكانة النافذة المستديرة تماما مما يسمح بالتصور الأمثل لمكانة النافذة المستديرة. تتمثل الخطوة الأخيرة في ملء مكانة النافذة المستديرة بالعامل السام للأذن المحدد دون تعطيل شريان دواسة STA ، متبوعا بالتكرار المناسب وفقا لمواصفات العامل. في النهاية ، يتم استخدام الإجراءات الوظيفية ، بما في ذلك استجابة جذع الدماغ السمعي والتقييم المورفولوجي لإظهار الحفظ الانتقائي أو الانحطاط للبنية الدقيقة للقوقعة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية ، تدبيرنا الحالي ، هي أن هذا الإجراء يسمح بالتعرض الممتاز لمكانة النافذة الخاطئة والذاكرة للوصول إلى الشيخوخة السامة الانتقائية يمكن تطبيقها مباشرة. تشمل مزايا هذه التقنية الحفاظ على الأذن الداخلية ، والهندسة المعمارية الدقيقة ، وتجنب السمية الجهازية ، وبداية التأثير السريعة ، والتنكس الانتقائي لأنواع معينة من خلايا القوقعة الصناعية والنتائج القابلة للتكرار. يمكن تطبيق هذه التقنية مع القليل من التعديلات بين أنواع القوارض الأخرى ، بما في ذلك الفئران وخنازير غينيا والجربوع.

الآن سأعرض الإجراء في مختبري. أجريت جميع جوانب البحوث على وفقا لإرشادات اللجنة المؤسسية المناسبة لرعاية واستخدامها. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية للفقرات الموضحة هنا بموجب إرشادات لجنة رعاية المؤسسية بجامعة ساوث كارولينا الطبية.

بعد تخدير وفقا للإجراءات المعتمدة ، قم بإعطاء مسكن ما قبل الجراحة 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام. يستخدم البوبرينورفين هنا. تأكد من أن قد وصل إلى مستوى التخدير الجراحي.

يجب ألا يكون هناك استجابة لقرص إصبع القدم ، ويجب أن يكون رد الفعل الكتابي غائبا في الفئران كما هو موضح هنا. Prera 0.2 مل من محلول مائي يحتوي على عامل السم للأذن المحدد في حقنة توبركولين سعة ملليلتر واحد مزودة بإبرة نصف بوصة مخففة قياس 28 ، تطرد أي هواء داخل المحقنة حيث يمكن للفقاعات أن تمنع التطبيق السليم للعامل. استخدم المقصات الكهربائية لإزالة الفراء في المنطقة ، الممتدة من التجعد الحقي ، إلى حزام الكتف بشكل لطيف.

مد إزالة الشعر من خط الوسط السهمي الظهري إلى زاوية الفك السفلي بشكل جانبي. استخدم ماكينة حلاقة يمكن التخلص منها لضمان حلاقة نظيفة. تعقيم جلد المنطقة المحضرة وفقا للبروتوكولات المؤسسية.

هنا يتم تطبيق البيتادين بالتناوب مع الإيثانول موضعيا بطريقة دائرية لمدة دقيقتين. ضع وسادة تدفئة صغيرة تحت الجسم للحفاظ على درجة حرارة جسم. عند 36 إلى 38 درجة مئوية ، قم بتأمين رأس عبر جهاز حامل الرأس.

شد المشبك الصغير برفق على ظهر أنف لتثبيته في مكانه. تأكد من أن حامل الرأس متصل بشكل صارم بمركز ذراع مفصلي على شكل حرف U. قم بتأمين قضيب بعرض سنتيمتر واحد على الذراع الأيسر لاستخدامه كمسند رأس على الجانب الأيسر للسماح بالوصول إلى الجانب الأيمن.

بمجرد تثبيته بإحكام في حامل الرأس ، قم بتدوير الماوس إلى وضع الاستلقاء الجانبي الأيسر. ضع الجسم بعناية على سطح التشغيل المسطح للتأكد من أنه سيكون مستقرا طوال العملية وتجنب التراجع عن الضغط الالتوائي على فقرات عنق الرحم. ضع مجهر تشغيل قادر على تكبير فوركس 10 × و 20 × فوق المجال الجراحي.

تأكد من أن المجهر يمكنه الحفاظ على موضعه بطريقة بدون استخدام اليدين بحيث يمكن استخدام كلتا يديه للجراحة أثناء العمل تحت التكبير المجهري. استخدم مقصا حادا أو شفرة مشرط لإنشاء شق ما بعد الأذن من واحد إلى 1.5 سم تقريبا من ستة إلى ثمانية ملليمترات في التجعد الرأسي الأذني. تجنب القطع بعمق للحفاظ على هياكل الأوعية الدموية الأساسية.

تشريح حاد من خلال طبقة الدهون تحت الجلد. في حالة التشريح في الاتجاه البطني إلى الإنسي ، احرص على تجنب الوريد الوداجي الخارجي. في حالة حدوث نزيف ، استخدم الجيلاتين القابل للامتصاص أو الإسفنج أو حبيبات القطن لوقف التدفق.

بمجرد تقسيم الطبقة الدهنية بشكل صحيح ، قم بتعريض عضلات عنق الرحم. من المعالم المهمة فرع عصبي صغير من العصب القحفي 11 يلتف حول الحافة الخلفية للخشينة C CTO. لتمديد رولي نحو الصيوان ، استخدم ضام ذاتي الاحتفاظ لسحب جسم عضلة التهاب الخشاء CTO برفق في الاتجاه الخلفي.

قسم اللفافة الشفافة برفق ، وتغليف جسم العضلات. قم أيضا بسحب الوريد النكفي والوريد الوداجي الخارجي برفق في الاتجاه المعاكس. مع التراجع الجيد لجسم عضلة CTO Masto ، تظهر القبة اللامعة للسمحاق الفقاعي الطبلي في جانب التدليل من الفقاعات ، وإدخال عضلة عنق الرحم الأعمق.

سوف يظهر التهاب الخشاء القصي. ضع ضام ذاتي الاحتفاظ لفصل الخشاء CTO باستخدام تقنية اليدين ، واستخدم بلطف الإنفاذ الحراري ثنائي القطب لتقسيم السمحاق الثوري وفضح العظم الأساسي. ثم استخدم ملقطا أو معالجا للأذون لرفع السمحاق برفق ودفعه في اتجاه محيطي لكشف قبة الثور بالكامل.

استخدم الآن مثقابا يدويا للأسنان يعمل بالحزام بطرف مدبب بطول واحد أو ملليمترين لحفر ثقب تجريبي بسعة ملليمترين بعناية من خلال عظم البلاع. حفر بين هامش القبة والخط غير الشفاف الواضح الممتد عبر الجانب المنقاري للبولة. بعد ذلك ، قم بحفر حفرة تجريبية ثانية بعناية في مكان قريب لتسهيل un تسقيف عظم البلة باستخدام زوج من ملقط طرف المجوهرات ، قم بفك غطاء عظم البول في الاتجاه الظهري والتدلل.

احرص على عدم ثقب شريان كهرباء لبنان الذي يقع أسفل غطاء الثور مباشرة. قلل من كمية العظام التي تمت إزالتها لمنع دخول السوائل المفرطة إلى الأذن الوسطى قبل تطبيق العامل. استخدم الفتيل الورقي لإزالة كل السوائل المرئية في الأذن الوسطى ومكانة النافذة المستديرة حتى يصبح العظم الجاف مرئيا.

هذه الخطوة حاسمة لنجاح البروتوكول. أثناء عرض المنطقة تحت أقصى قدر من التكبير ، استخدم إبرة من العيار الدقيق على حقنة توبركولين سعة مليلتر واحد لتطبيق قطرة واحدة من عامل الأذن السامة مباشرة على مكانة النافذة المستديرة التي تملأها بالكامل. اسمح للوكيل بالراحة في مكانة النافذة المستديرة لمدة 10 دقائق.

في المراحل المبكرة ، راقب عن كثب استبدال انعكاس ضوئي صغير في قاعدة المكانة الجافة بغضروف مفصلي سائل باهت وضبابي. هذا يدل على أن المكان المناسب يمتلئ بشكل صحيح. عندما تنقضي 10 دقائق ، قم بإخراج العامل تماما واستبدله بتطبيق جديد لنفس العامل.

عدد التطبيقات على العامل المستخدم. يتراوح وقت التعرض عادة بين 30 إلى 60 دقيقة. بعد التطبيق النهائي ، اترك الثور غير مغطى واستخدم الملقط لإغلاق الأنسجة الرخوة فوق موقع الجراحة.

استخدم أربعة خياطة أحادية غير قابلة للامتصاص لإغلاق الجلد فوق موقع الجراحة. اسمح للحيوان بالتعافي من التخدير في قفص منزلي نظيف ، والذي يجب أن يكون مجهزا بالفراش والطعام الطري. راقب يوميا حتى التضحية وحصاد أنسجة القوقعة الصناعية البالغين C-B-A-C-A-J.

تعرضت الفئران من كلا الجنسين للعامل السام للأذن Hept ethanol. انتشار النافذة المحيطة. لوحظت زيادات كبيرة في عتبات BR في الفئران المعالجة بسباعي السباع من اليوم الأول بعد الجراحة إلى اليوم 14 من الضابطة التي تلقت جراحة زائفة مع توصيل محلول ملحي بدلا من hept.

لم يظهر الإيثانول تحولات عتبة كبيرة عند أي تردد تم اختباره. كان التلوين المناعي ضد قناة البوتاسيوم المصححة داخليا الموضحة باللون الأخضر بمثابة طريقة غير مباشرة لتصور تلف واستعادة هياكل القوقعة الصناعية. انخفضت شدة التلوين بشكل ملحوظ داخل تيريا فايس.

في اليوم الأول بعد الجراحة ، شوهد أيضا دليل على اضطراب السلامة النووية وتكثيف الكروموسومات ، وهو نموذجي لموت الخلايا المبرمج الخلوي على تلطيخ مضاد نووي موضح باللون الأحمر. عندما تم قياس شدة تلطيخ قناة البوتاسيوم في مناطق الطبقات المعالجة ، أظهرت الآذان الخاضعة الأولية متبوعا بتحول كبير إلى الوراء نحو شدة التحكم بعد سبعة أيام من التعرض للهب مع استمرار الانتعاش بعد ذلك. بمجرد إتقان ، يمكن إجراء هذا الإجراء في غضون 30 إلى 60 دقيقة إذا تم تنفيذه بشكل صحيح.

من المهم أن تتذكر أن التعرض الإضافي أو التجديد قد يساعد في تجنب التخفيف غير المرغوب فيه للعامل السام التلقائي عن طريق تكثيف الدم أو السائل الخلالي. ومع ذلك ، يجب توخي الحذر مع هذا النهج لأنه يميل إلى زيادة خطر إصابة الشريان الأرزي عن غير قصد أو إدخال سائل خلالي إلى مكانة النافذة المستديرة. تسمح هذه التقنية طفيفة التوغل بدراسة مفصلة للعمليات الكيميائية الحيوية الدقيقة وكانت بمثابة تعزيز لأبحاثنا التي تهدف إلى فهم إمكانات تجديد القوقعة الصناعية في الجسم الحي.