وطريقة لتقييم خصائص تعزيز من الايثانول في الفئران بدون ماء الحرمان، السكرين يتلاشى أو الوصول إلى تدريب موسع

الهدف العام من هذا البروتوكول هو البدء بسرعة في الاستجابة الفعالة للكحول في الفئران بطريقة ملائمة للمتمربين ، وعلى عكس الطرق القياسية ، لا تتطلب الحرمان من الماء ، أو تلاشي السكرين للسكرين. لذا فإن هذه الطريقة أداة مفيدة للغاية للإجابة على الأسئلة الرئيسية حول علم الأعصاب وعلم الأدوية العصبية لمكافأة الكحول في البحث عن الكحول في الفئران. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها لا تتطلب تلاشي السكرين للسمكروز لبدء استجابة الكحول في الفئران.

أولا ، القضاء على السقوط المحتمل لاستخدام المحليات في إجراء الإدارة الذاتية للإيثانول. لهذه التجربة ، احصل على فئران تزن 200 إلى 225 جراما. يتم استخدام ذكور Wistar هنا.

بإيوائها في أزواج أو منفردة ، اعتمادا على الأساس المنطقي للتجربة. حافظ على المستعمرة في دورة عكسية من 12 إلى 12 من الضوء والظلام مع التحكم في درجة الحرارة والرطوبة وإجراء التجارب خلال المرحلة المظلمة. قم بوزن أسبوعيا ، واسمح لها بالتأقلم لمدة أسبوع على الأقل قبل بدء التجربة.

لا تحد من وصول الفئران إلى الطعام والماء. ليس ضروريا للتكييف. قم بإجراء جميع التدريبات السلوكية في نفس الحجم من الغرفة العاملة مع شبكة الفيضانات ووعاء النفايات.

يجب تركيب الغرفة في حجرة ذات فتحات تهوية مخففة للصوت. يجب أن تحتوي كل غرفة على مصابيح تحفيز ومضخات حقنة ورافعتين قابلتين للسحب. يجب وضع المستويات بشكل جانبي على وعاء كوب سائل.

يجب أن تخضع كل غرفة للتحكم الآلي مع واجهة حاسوب. استخدم هذا البرنامج لإعداد برنامج التكييف الفعال حسب الحاجة. على سبيل المثال، قم بتنفيذ الأوامر التالية.

قم بتمديد رافعتين للاحتفال ببداية الجلسة والإشارة إلى توافر الكحول. اجعل ذراع الإيثانول ، عند الضغط عليه ، قم بتوصيل 100 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 20٪ إلى بئر الشرب المجاور ، ومهلة لمدة خمس ثوان. قم بالإشارة إلى المهلة عن طريق إضاءة ضوء إشارة فوق الرافعة.

الرافعة الأخرى ، عند الضغط عليها ، ليس لها عواقب مبرمجة ، وتعمل كعنصر تحكم في السلوك غير المحدد. حتى أثناء المهلات ، سجل كيفية استخدام الفئران للرافعات ، على الرغم من عدم وجود عواقب على الفئران. بعد 30 دقيقة ، اسحب الرافعتين للإشارة إلى نهاية الجلسة.

قم بتحميل محلول الإيثانول المصنوع من 95٪ من الإيثانول وماء الصنبور في حقنة. أخرج المحلول دون إدخال فقاعات هواء في خطوط الصنبور. قم بتأكيد تدفق الحل يدويا.

قم دائما باختبار الأجهزة يدويا. أيضا ، قم دائما بتجفيف وعاء المحلول قبل بدء أي جلسة. قبل بدء الجلسة ، قم بتحميل عناصر التحكم في البرنامج وتأكد من تشغيل كل شيء.

انقل الفئران إلى غرفة الاختبار في قفص النقل ، وقم بتعيين فأر واحد لكل غرفة. حافظ على غرفة الاختبار في نفس درجة الحرارة والرطوبة مثل الفيفاريوم. قم بتحميل الفئران في غرفها بطريقة متسقة وفي نفس الوقت من اليوم لكل جلسة.

ثم ابدأ تشغيل البرنامج لبدء الجلسة. بعد انتهاء الجلسة ، أعد الفئران إلى الحمام واستخدم مطهرا لتنظيف أقفاص التكييف الفعالة. قم بإجراء الجلسات يوميا ، من خمس إلى ست مرات في الأسبوع.

بعد كل جلسة ، احسب متوسط عدد مكابس الرافعة النشطة ومكابس الرافعة غير النشطة ومكافآت الكحول. سيكون الأداء قد استقر عندما لا تختلف المكافآت على مدى ثلاث جلسات متتالية بأكثر من 15٪ يمكن بعد ذلك التلاعب بالفئران على خط أساس مستقر. أحد التلاعب المحتمل للفئران على خط الأساس المستقر هو تقييم دوافعهم لمكافآت الإيثانول.

للقيام بذلك ، أخضعهم لجدول نسبة تصاعدي. قم ببرمجة الغرف لتوصيل حجم واحد من الكحول في البداية بضغطة رافعة واحدة ، ولكن قم بزيادة عدد مكابس الرافعة المطلوبة بعد كل معزز للكحول. سيصل كل إلى نقطة انهيار ، بما يتوافق مع عدد المكابس التي تم إجراؤها لآخر معزز تم الحصول عليه.

تم تقييم هذا النموذج لصلاحيته التنبؤية باستخدام دواء مدمني الكحول المعتمد ، النالتريكسون. في الواقع ، تم تحديد الصلاحية التنبؤية ، وبالتالي يمكن استخدام النموذج لتقييم الأدوية المرشحة الجديدة. في البداية ، قم بحقن الفئران بالمحلول الملحي قبل 30 دقيقة من كل جلسة لتعويدهم على الحقن.

قم بتحليل نتائج الجلسات والمضي قدما عندما يختلف عدد المكافآت بين الجلستين الأخيرتين بنسبة 15٪ أو أقل. بعد ذلك ، قم بتوصيل النالتريكسون في محلول ملحي مع تعديل الرقم الهيدروجيني إلى محايد. ترتيب الاختبار عشوائيا بين مجموعات العلاج المختلفة والضوابط غير المعالجة.

بين إعطاءات الدواء ، دع كل فأر يمر بجلستين عاديتين دون علاج ، ويتعرض فقط للمحلول الملحي. يعمل هذا كفترة الغسيل ، ويعيد ضبط الفئران. كرر الاختبارات حتى يتلقى كل فأر مكيف في النهاية كل مستوى علاج مرة واحدة ، والعلاج الضابط مرة واحدة.

بعد تحليل البيانات ، يمكن اختيار الجرعة الأكثر فعالية لاستخدامها على أثناء اختبار النسبة التدريجية. باستخدام البروتوكول الموصوف ، تم تدريب 239 فأرا من ثماني مجموعات مختلفة على الإدارة الذاتية لمكافأة الكحول دون الحرمان من الماء أو تلاشي السكرين السكرين. بدأت الفئران الضغط على الرافعة بسرعة ، وحصلت على أكثر من 10 مكافآت في الجلسة الأولى.

في النهاية ، حصلت الفئران على معدلات استجابة مستقرة ، وحصلت على حوالي 24 مكافأة على مدار كل جلسة نصف ساعة. تم اختبار دواء معتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية ، نالتريكسون ، بثلاثة تركيزات. كما هو متوقع ، أنتج العلاج بالنالتريكسون انخفاضا يعتمد على الجرعة في الإدارة الذاتية للكحول ، مما يوفر التحقق الدوائي المهم لهذا البروتوكول.

كما هو متوقع أيضا ، قلل النالتريكسون من دافع الفئران للكحول بموجب جدول نسبة تدريجي ، كما يتضح من الانخفاض في مقياس نقطة التوقف. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية بدء الاستجابة الفعالة للإيثانول بسرعة في الفئران دون استخدام الحرمان من الماء أو إجراء تلاشي السكرين للسكر. باستخدام هذا البروتوكول ، تكتسب الفئران معدلات إدارة ذاتية مستقرة في غضون أسبوعين تقريبا ، مما يؤدي إلى تركيزات الكحول في الدم ذات الصلة من الناحية الدوائية.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم الحفاظ على الحالة اليومية متسقة قدر الإمكان. ومن الأهمية بمكان أيضا أن يتم توصيل الإيثانول بشكل صحيح إلى الوعاء من أول استجابة معززة، لأن أي عطل قد يغير أو يؤخر اكتساب الإدارة الذاتية للإيثانول. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء تجارب أخرى لدراسة الأساس العصبي للبحث عن الكحول وتناوله.