طريقة بسيطة لحجم تجميع الشواهد من الكتل بلازميدة قليلة القسيمات مستقرة من جزيئات الذهب في ظل الظروف المحيطة

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنتاج مجموعات قليلة القلة من جزيئات الذهب النانوية ، وهي: عالية الثبات ، وسهلة الاشتقاق ، ولها أقطار يتم التحكم فيها جيدا عن طريق تقليل حمض الكلوروريك مع ثيوسيانات الصوديوم. الجسيمات التي ننظر إليها اليوم هي جسيمات مثيرة للاهتمام لأن أحجامها يتم التحكم فيها بشكل جيد ، ونتيجة لذلك ، يمكن استخدامها للنظر في نفاذية الأغشية للجسيمات ذات الأحجام المختلفة. نظرا لأنها مستقرة جدا في المحاليل البيولوجية ، فهذه خاصية قوية جدا للجسيم.

الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها تسمح بتوليف دقيق التحكم في مجموعات قليلة الذهب عالية الجودة في ظل ظروف الطاولة ، ويمكن إجراؤها بسهولة باستخدام معدات المختبر القياسية وعدد محدود من الكواشف. بعد تحضير جميع الحلول اللازمة كما هو موضح في بروتوكول النص ، ابدأ في تخليق وقت التأخير لمجموعات قليلة الذهب عن طريق إضافة 7 مل من محلول البوراكس إلى زجاجة زجاجية نظيفة سعة 125 مليلتر تحتوي على 59.5 مل من الماء تحت التحريك. بعد ذلك ، أضف 2.8 مل من محلول كلوريد الذهب إلى الزجاجة ، والذي يبدأ وقت التأخير الذي يحدد حجم المجموعات القليلة

أضف 700 ميكرولتر من محلول ثيوسيانات الصوديوم إلى الزجاجة في نهاية فترة التأخير. استمر في التقليب طوال الليل لإكمال تخليق oligoclusters. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم إضافة محلول كلوريد الذهب وثيوسيانات الصوديوم بسرعة إلى جميع الكاشف بكميات أكبر من هذا المحلول ، باستخدام موزعات واسعة الفم.

للنمو الإضافي ، امزج 10 مل من مجموعات قليلة الذهب مع 60 مل من محلول كلوريد الذهب الهيدروكسيل. بعد ذلك ، أضف 900 ميكرولتر من محلول ثيوسيانات الصوديوم مع التحريك القوي. اتركي الخليط يقلب طوال الليل حتى يكتمل التفاعل.

قبل الاشتقاق ، أضف 70 مل من المجموعات قليلة الخام إلى مرشح طرد مركزي مقطوع 30 كيلودالتون ، وقم بالدوران لمدة 15 دقيقة عند 3 ، 000 مرة جم ، واسترجع شريط ree-tin عن طريق قلب المرشح ، والطرد المركزي لمدة 3 دقائق عند 500 مرة جم. ثم قم بقياس الحجم المسترد باستخدام ماصة دقيقة.

بعد ذلك ، أضف حجم GSH يساوي تسع الحجم المستعاد من oligoclusters. اترك التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة لا تزيد عن 10 دقائق. قم بتخفيف المجموعات قليلة المشتقة إلى 50 مل من محلول ملحي Dulbecco المخزن بالفوسفات لوقف التفاعل.

بعد ذلك ، قم بتطبيق المجموعات قليلة المشتقة على مرشح طرد مركزي مقطوع 30 كيلودالتون ، وقم بالدوران لمدة 15 دقيقة عند 3 ، 000 مرة جرام. أخيرا ، استرجع شريط ree-tin عن طريق قلب الفلتر ، والدوران لمدة ثلاث دقائق عند 500 مرة جرام. قم بتخزين الجلوتاثيون المشتقة من المجموعات قليلة عند أربع درجات مئوية.

لتحليل المجموعات قليلة الخام عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام ، قم بخلطها بنسبة اثنين إلى واحد مع عازلة التحميل. بعد ذلك ، قم بتحميل 30 ميكرولترا من المجموعات قليلة المجموعات على هلام متدرج بولي أكريلاميد مسبقة الصب. قم بتشغيل الجل باستخدام محلول تريس جلايسين المؤقت لمدة 26 دقيقة عند 200 فولت.

بالنسبة للرحلان الكهربائي للهلام للمجموعات قليلة الاشتقاق ، قم أولا بتخفيفها بنسبة واحد إلى ثلاثة بالماء. بعد ذلك ، قم بتخفيف المجموعات بشكل أكبر بنسبة اثنين إلى واحد مع المخزن المؤقت للتحميل. قم بتحميل 10 ميكرولترات من خليط oligocluster على جل متدرج بولي أكريلاميد مسبقة الصب ، ثم قم بتشغيل الجل باستخدام محلول ثلاثي الجلايسين لمدة 26 دقيقة عند 200 فولت.

للتحليل عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال ، اغسل 20 ميكرولترا من المجموعات قليلة الكتل المركزة مع 0.5 مل من الماء ، وقم بتحميلها على مرشح طرد مركزي مقطوع 0.5 ملليلتر ، 30 كيلو دالتون. تدور في 14 ، 000 مرة جم لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، قم بإزالة المرشح من الأنبوب ، وأعد تعليق تاريخ ray-tah في 0.5 مل من الماء.

كرر الغسيل مرتين أخريين ، ثم خفف oligoclusters 500 مرة بالماء. بعد التوهج لتفريغ الشبكة المطلية بالكربون ، قم بإيداع 0.6 ميكرولتر من المجموعات قليلة المجموعات على الشبكة ، واتركها تجف في الهواء لمدة 10 دقائق. أخيرا ، تصور المجموعات قليلة باستخدام تكبير 100 ، 000 × عند 80 كيلو فولت في المجهر الإلكتروني الناقل.

تم تحليل حجم أوليغوكتلات الذهب ، التي تم تصنيعها باستخدام إجراءات التأخير والوقت الإضافي ، بواسطة الرحلان الكهربائي الهلامي. أظهرت الممرات من اثنين إلى أربعة من الجل أن حجم الكتلة يزداد مع إطالة وقت التأخير. تؤكد الممرات من خمسة إلى ثمانية أن حجم العناقيد يزداد أيضا مع كمية الذهب المهيدروكسيل المستخدمة أثناء إجراء الإضافة.

تم استخدام المجهر الإلكتروني للإرسال لتحديد أقطار جزيئات oligocluster. تم حساب الأقطار عن طريق أخذ قياسات من صور 50 نانومتر × 50 نانومتر من مناطق الشبكة التي تحتوي على الجسيمات. تم رسم العلاقة بين وقت التأخير بحجم الجسيمات والكميات الإضافية من الذهب المهيدروكسيل.

ثم تم تحويل هذه البيانات إلى معادلات تنبؤية لأقطار الجسيمات لكل إجراء. أنا متأكد من أنك تحدثت عن طريقة صنع عناقيد الذهب تعتمد على هيدروكسيل كلوريد الذهب في محلول قلوي. لذلك ، كلما زاد الهيدروكسيل ، قل احتمال توليد مجموعة من الذهب.

كتابي الجديد هنا هو أول كتاب مثير للاهتمام بالنسبة لي ، لأنها المرة الأولى التي أدرك فيها أن عنصر الوقت للتعرض للقلوية يمكن استخدامه للتحكم في حجم العناقيد. عند إجراؤها بشكل صحيح ، يمكن تصنيع أوليكلهروسات الذهب بأحجام تتراوح من ثلاثة إلى 70 نانومتر في أقل من يوم. الجسيمات النانوية الناتجة مستقرة في المخازن المؤقتة الفسيولوجية والبلازما ، مما يجعلها مناسبة للتجارب المرئية.

تتمتع مجموعات أوليغو الذهبية الموصوفة هنا بفائدة إضافية تتمثل في قدرتها على التركيز دون اشتقاق مسبق ، مما يسمح باستخدام اتساع عوامل التجذير بكميات أصغر.