Name: تقييم خصوصية المضاد للسرطان المخدرات في المختبر (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: اكتشف تقييم خصوصية الأدوية المضادة للسرطان في المختبر باستخدام مزارع خلايا مختلطة من خلايا الورم والألياف. تتيح هذه الطريقة فصل استجابة خلايا الورم عن الخلايا غير السرطانية بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تحظى بتقدير السيدة ألستر، السيد Honrath والدكتور جيانغ للحصول على المساعدة الفنية المعلقة بينهما. يقدر أيضا هو الدكتور فولز وفريق البحث الدكتور Dandri إلى توفير إمكانية الوصول إلى جهاز PCR الرقمي الخاص بها.

1. إعداد الثقافة مزيج يحتوي على كل الخلايا السرطانية والخلايا غير السرطانية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الخلايا السرطانية من خط الخلية أنشئت MPNST S462 5. استخدام الخلايا الليفية مثل الخلايا غير السرطانية-6،7 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثقافة على حد سواء ورم الخلايا والخلايا الليفية في المتوسط ​​DMEM القياسية مع المصل 10٪ بقري جنيني (BSA)، 3 مم الجلوتامين، 0.1 مم 2-المركابتويثانول، 500 U / البنسلين مل، 500 غ / مل الستربتومايسين و1 ملم البيروفات الصوديوم عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO فبراير 5-7. في التقاء الفرعي، حصاد الخلايا مع 0.05٪ التربسين ونعدهم باستخدام عدادة الكريات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج 400 الخلايا السرطانية والخلايا 1600 غير ورم معا في كل بئر من لوحة ثقافة 96-جيدا في 0.2 مل المتوسطة. وبالنظر إلى النمو السريع للخلايا السرطانية خلال فترة العلاج 5 أيام، تم تعيين نسبة الأولية من الخلايا السرطانية بنسبة 25٪. انشاء 4 يعيد لكل تركيز الدواء. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 O / N. </li></ol> 2. دروز العلاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام nilotinib مثل اختبار المخدرات. إعداد الحلول الأسهم 0، 2، 4 و 20 ملي nilotinib في DMSO. تمييع كل منهم من 200 أضعاف في 5 مل DMEM المتوسطة، وإعطاء 2 أضعاف تتركز حلول المخدرات من 0، 10، 20 و 100 ميكرومتر 6.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة 0.1 مل المتوسطة من كل بئر وإضافة 0.1 مل من المتوسط ​​تحتوي على المخدرات. تركيزات النهائية هي 0، 5، 10 و 50 ميكرومتر. مواصلة احتضان الخلايا في المتوسط ​​تحتوي على المخدرات لمدة 5 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية العلاج، وفحص الخلايا المرفقة باستخدام مجهر مرحلة التباين والتقاط الصور. نضح المتوسطة بعيدا، وغسل الخلايا لاصقة على قيد الحياة مرة واحدة مع 0.2 مل برنامج تلفزيوني. </li></ol> 3. إعداد الحمض النووي لPCR الرقمية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا ليز باستخدام العامل البارع 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر محلول قلوي تحلل (25 ملم هيدروكسيد الصوديوم، 0.2 ملي EDTA) إلى كل بئر. اغلاق الآبار مع احباط. احتضان لوحة عند 95 درجة مئوية في الفرن أو على لوحة التسخين لمدة 30 دقيقة. تحقق تحت ميكرoscope للتأكد من أنه لا يوجد المزيد من الخلايا سليمة بقيت على السطح من الآبار. في حالة الخلايا لم ليز تماما، وزيادة الوقت التدفئة أو إضافة مواد التنظيف. تجميدها مرة واحدة في -20 درجة مئوية كما يعزز كسر الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر تحييد حل (40 ملي تريس، HC، ودرجة الحموضة 4.0) إلى كل بئر. نقل كافة لست] في الآبار U-شكل لوحة PCR وجاف في cycler على PCR في 95 درجة مئوية لمدة 10 إلى 30 دقيقة. إعادة تشكيل لست] مع 20 ميكرولتر من الماء المقطر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحلية باستخدام قطرة غسيل الكلى 9 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المرشحات الغشائية مع متوسط ​​حجم المسام 0.025 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعويم تصفية على الماء المقطر مع الجانب اللامع حتى في الآبار من لوحة ال 12 أيضا. الرطب مرشح لمدة 5 دقائق. إيلاء الاهتمام لتجنب فقاعات الهواء بين مرشح والمياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الماصة ولست] تشكيلها من كل عينة من الخطوة 3.1.4 بعناية على على كل من 4 مناطق من التصفية. تغطية لوحة وdialyze لمدة 30 إلى 60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمتص الماء بعيدا تحت التصفية دون التقليب أكثر من مرشح ولا إزعاج قطرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل المحللة قطرات في الآبار من PCR لوحة جديدة. تجفيف الحمض النووي قطرات عن طريق التسخين في درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 10-30 دقيقة في cycler على PCR. إعادة تشكيل لست] في 10 ميكرولتر المياه. </li></ol></li></ol> 4. PCR الرقمية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكونات المجمدة ذوبان مثل الحمض النووي، العازلة ومزيج فحص في RT، تدور لمدة 10 ثانية في القوة القصوى من أي أجهزة الطرد المركزي المتاحة (على سبيل المثال، VWR مصغرة الطرد المركزي) ومن ثم الاحتفاظ بها على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير خليط رئيسية تحتوي على جميع المكونات ما عدا الحمض النووي (الجدول 1). النظر في حجم القتلى وحساب خليط سيد حوالي 10٪ أكثر من المبلغ المطلوب. ملاحظة: استخدام الاشعال وتحقيقات المستخدمة في عدة التجارية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الخليط الماجستير، وتدور باستمرار لمدة 10 ثانية في القوة القصوى من أي أجهزة الطرد المركزي المتاحة (على سبيل المثال، VWR أجهزة الطرد المركزي صغير) والاستغناء عن 15 ميكرولتر على كلبئر من لوحة 96-PCR. إضافة كافة المحللة (التي تحتوي على الحمض النووي) من كل عينة إلى الآبار التي تحتوي على خليط الرئيسي. نقل 20 ميكرولتر من كل خليط التفاعل في بئر على الجانب عينة من خرطوشة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء عن 70 ميكرولتر من النفط قطرة مولد في كل بئر على الجانب النفط من لخرطوشة. إغلاق خرطوشة مع طوقا ووضع الإعداد كاملة إلى مولد قطرة. بدء جيل بالقطيرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 40 ميكرولتر قطيرة-حل في الآبار من 96-جيدا لوحة PCR. ختم لوحة مع احباط ووضع لوحة في cycler على PCR. ضبط درجة الحرارة غطاء في درجة حرارة 105 مئوية والطريق المنحدر المعدل 2 ° C / ثانية. تنفيذ PCR باستخدام الإعدادات في الجدول 2. وبعد PCR، ونقل لوحة في قارئ قطرة وبدء القراءة. بدلا من ذلك، تخزين لوحة عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 24 ساعة. </li></ol> 5. حساب نسبة الخلايا السرطانية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل البيانات PCR الرقمية وأداء محللة بيانات التلقائيهو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السيطرة على النتائج من كل فحص يدويا عن طريق التفتيش توزيع ذات بعد واحد و 2 الأبعاد من قطرات الإيجابية والسلبية، والتأكد من أنها يتم فصل جيدا وكانت خطوط العتبة في مواقف الحق. استبعاد النتائج التي لا تستوفي المعايير، على سبيل المثال، لا فصل واضح من قطرات الإيجابية والسلبية، من مزيد من التحليل. نسخ الناتجة نسبة NF1 / RPP30 في ورقة اكسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب نسبة الخلايا السرطانية على النحو التالي: 2 × (1- NF1 / RPP30). </li></ol> تغيير 6. الجرعة التي تعتمد على نسبة من الخلايا السرطانية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل-تركيز الدواء، وحساب المتوسط ​​والانحراف المعياري من 4 مكررات. رسم الوسائل والانحرافات المعيارية ضد تركيز الدواء. </li></ol>

<ol><li>Caponigro, G., Sellers, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+preclinical+testing+of+cancer+therapeutic+hypotheses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Advances in the preclinical testing of cancer therapeutic hypotheses.</a> Nat Rev Drug Discov. 10 (3), 179-187 (2011).</li>
<li>McMillin, D. W., Negri, J. M., Mitsiades, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+tumour-stromal+interactions+in+modifying+drug+response%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The role of tumour-stromal interactions in modifying drug response: challenges and opportunities.</a> Nat Rev Drug Discov. 12 (3), 217-228 (2013).</li>
<li>Wilding, J. L., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cell+lines+for+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer cell lines for drug discovery and development.</a> Cancer Res. 74 (9), 2377-2384 (2014).</li>
<li>Edwards, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+target+validation+using+patient-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Preclinical target validation using patient-derived cells.</a> Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 149-150 (2015).</li>
<li>Frahm, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+phenotypic+characterization+of+tumor+cells+derived+from+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+of+neurofibromatosis+type+1+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Genetic and phenotypic characterization of tumor cells derived from malignant peripheral nerve sheath tumors of neurofibromatosis type 1 patients.</a> Neurobiol Dis. 16 (1), 85-91 (2004).</li>
<li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+selectivity+of+nilotinib+on+NF1-associated+tumors+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Efficacy and selectivity of nilotinib on NF1-associated tumors in vitro.</a> J Neurooncol. 116 (2), 231-236 (2014).</li>
<li>Jiang, W., Mautner, V. F., Friedrich, R. E., Kluwe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+assessment+of+the+anticancer+drug+response+of+plexiform+neurofibroma+tissue+using+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Preclinical assessment of the anticancer drug response of plexiform neurofibroma tissue using primary cultures.</a> J Clin Neurol. 11 (2), 172-177 (2015).</li>
<li>Montero-Pau, J., Gomez, A., Munoz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+an+inexpensive+and+high-throughput+genomic+DNA+extraction+method+for+the+molecular+ecology+of+zooplanktonic+diapausing+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography-Methods%22%5BJournal%5D)">Application of an inexpensive and high-throughput genomic DNA extraction method for the molecular ecology of zooplanktonic diapausing eggs.</a> Limnology and Oceanography-Methods. 6, 218-222 (2008).</li>
<li>Saraswat, M., Grand, R. S., Patrick, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desalting+DNA+by+drop+dialysis+increases+library+size+upon+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Desalting DNA by drop dialysis increases library size upon transformation.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 77 (2), 402-404 (2013).</li>
<li>Iglesias-Bartolome, R., Martin, D., Gutkind, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+head+and+neck+cancer+oncogenome%3A+widespread+PI3K-mTOR+pathway+alterations+and+novel+molecular+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Exploiting the head and neck cancer oncogenome: widespread PI3K-mTOR pathway alterations and novel molecular targets.</a> Cancer Discov. 3, 722-725 (2013).</li>
</ol>

الإجراء محمي بموجب براءة اختراع (10 2013 221 452 ، ألمانيا)

الخطوة الأساسية في هذه الأداة genetic- وخلية القاعدة لتقييم خصوصية المخدرات في المختبر هي تحديد نسبة الخلايا السرطانية باستخدام واحد أو أكثر من الخصائص الوراثية للورم معين. وعلى النقيض من ميزات المظهرية التقليدية 7، الميزات الوراثية هي محددة ومستقرة وسهلة لقياس. على سبيل المثال، فإن الطفرة أو عدد النسخ الاختلاف ورم محددة موجودة حصرا في الخلايا السرطانية ولكن ليس في الخلايا غير السرطانية. هذا وصمة عار وراثي يمكن أن يعتمد عليه وعلى وجه التحديد كميا، على سبيل المثال، وذلك باستخدام PCR الرقمي كما هو موضح في هذه الدراسة. لPCR الرقمي، نقاء عالية من الحمض النووي ليست ضرورية. ومع ذلك، تحلية وإزالة الجزيئات المثبطة هي اللازمة التي يمكن تحقيقها عن طريق على بعد غسيل الكلى انخفاض استخدام مرشح مناسب. وجنبا إلى جنب تحلل وانخفاض غسيل الكلى هو بسيط وسريع، لا يتطلب أي أدوات خاصة، وبالتالي يمكن أن تنفذ في أي مختبر القياسية. إذا كانت الخلايا لا برياك جيدا، يمكن اعتبار معالجة إضافية مثل تجميد الخلايا في -20 درجة مئوية، مضيفا المنظفات و / أو باستخدام البروتيني. في هذه الدراسة، تم استخدام الحذف متخالف من الجين NF1 كسمة ورم محددة لتقدير. وبالمثل، الحذف من الجينات أو مواضع أخرى يمكن أن تستخدم أيضا. وعلاوة على ذلك، والطفرات يمكن أن تستخدم أيضا لقياس الخلايا السرطانية. في هذه الحالة، لا بد من التحقق من صحة نطاق واسع لضمان خصوصيتها لكل منهما المقايسات PCR الرقمية لمتحولة والأليلات العادية. نسبة تعتمد على جرعة من الخلايا السرطانية توفر مؤشرا عن المخدرات خصوصية أو الانتقائية. وعلاوة على ذلك، فإنه يمكن أيضا استجابة استخراج الخلايا السرطانية من الاستجابة من مجموع الخلايا ثقافة مختلطة لدواء (الشكل 4). وتنص هذه الاستراتيجية استخراج حل للمشكلة فنية في استخدام الثقافات الأولية (التي تحتوي على كل ورم وليسخلايا ن الورم) لمكافحة المخدرات والاختبار. وgenetic- وخلية مقرها في أداة المختبر تبين في هذه الدراسة وبالتالي تكون هناك إمكانية التطبيق (1) في مجال مكافحة المخدرات اكتشاف حيث أنه يوفر منصة لتقييم خصوصية المخدرات أو الانتقائية في المختبر و (2) في رعاية مرضى السرطان شخصية حيث تمكن المخدرات اختبار في الثقافات الأولية، وبالتالي يمكن أن تسهم في المخدرات التحديد في مساعد العلاج الكيميائي 4. وعلاوة على ذلك، وآلية الدوائية للدواء يمكن دراستها باستخدام هذه الأداة، منذ بعض التعديل الوراثي أو تغيرات جينية متعددة يمكن اتباعها أثناء المخدرات العلاج. وثمة صعوبة في استخدام الثقافات الأولية الفردية هي عدم وجود ميزة وراثية عالمية لتقدير حجم الخلايا السرطانية. ومع ذلك، مع التقدم اليوم في تسلسل كامل الجينوم، من المعروف أن الجينات والمناطق الأكثر غيرت في كثير من الأحيان لعلاج الأورام شيوعا. على سبيل المثال، بين الرأس والعنقالأورام، 71٪، 23٪ و 22٪ لديهم طفرات في TP53، FAT1 والجينات CDKN2A، و 60٪، 34٪ و 26٪ لديهم الحذف في المناطق الجينات من CDKN2A، STK11 وPTEN، على التوالي 10. فحص 5-10 هذه الجينات و / أو المناطق عن طريق استهداف التسلسل أو / و PCR الرقمي وبالتالي من المحتمل تحديد واحد أو أكثر من التعديلات الوراثية التي يمكن استخدامها لتقدير حجم الخلايا السرطانية في الثقافة الأولية المشتقة. الحد آخر هو المبلغ في كثير من الأحيان غير كافية من الأورام مقطوعة لإقامة الثقافات الأولية. وعلى الرغم من ميزات مفيدة وإمكانية تطبيق واعدة للgenetic- وخلية مقرها في أداة المختبر، يجب أن تبقى حدودها في الاعتبار، وينبغي التأكيد في المختبر الطبيعة. على سبيل المثال، فإن الآثار التفاضلية أو السمية الخلوية للدواء على الخلايا السرطانية قد بدلا نظرا للاختلاف في أنواع الخلايا (الخلايا الليفية مقابل خلايا شوان) أو منأصول مختلفة (من مختلف الأفراد). ويمكن أيضا أن أوضح تأثير أقوى من الدواء على الخلايا السرطانية من على الخلايا غير السرطانية، من خلال حقيقة أن تنمو السابق أسرع من هذا الأخير. الأهم من ذلك، الخلايا في المختبر السلوك يختلف من الخلايا في جسم الإنسان، وبالتالي، نتائج التقييم في المختبر في كثير من الأحيان لا أو جزئيا فقط تعكس الحالة السريرية الحقيقي. لذلك، فعالية، سمية الخلايا وخصوصية المخدرات التي تم الحصول عليها عن الخلايا المستزرعة هي بالأحرى من طبيعة العلامات البيولوجية لكنها لا تملك مصداقية فعالية قياس preclinically من المضادات الحيوية. ومع ذلك، والانتقال من خطوط الخلايا على الثقافات المختلطة و / أو الثقافات الأولية هو خطوة إلى الأمام في تقييم المخدرات تأثير وخصوصية / الانتقائية في المختبر. مع جهود واسعة النطاق، في ظروف المختبر ويمكن الاطلاع التي تمكن ارتباط معقول في المختبر البيانات مع استجابات حقيقية للمرضى، على الأقل بالنسبة لبعض الأدوية.

ترتبط التأثيرات العلاجية للأدوية المضادة للسرطان على الخلايا السرطانية بالعديد من التأثيرات السامة غير المرغوب فيها على الخلايا غير السرطانية. يصعب تقييم التأثيرات السامة في المختبر ، ويرجع ذلك إلى حد كبير إلى نقص الأدوات المناسبة1. ستوفر مزارع الخلايا التي تحتوي على كل من الخلايا السرطانية وغير السرطانية موردا محتملا في المختبر لتقييم خصوصية أو انتقائية الدواء مما قد يلقي الضوء على السمية السريرية. ومع ذلك ، فإن المقايسات التقليدية في المختبر مثل فحوصات التكاثر أو الجدوى تقيس تأثير الدواء على الخلايا الكلية ، ولكن لا يمكن تقسيم التأثير إلى جزء على الخلايا السرطانية والجزء على الخلايا غير السرطانية. على سبيل المثال ، يمكن أن يؤدي انخفاض بنسبة 50٪ في إجمالي عدد الخلايا في مزرعة مكونة من 50٪ من الخلايا السرطانية و 50٪ من الخلايا غير السرطانية إلى موت جميع الخلايا السرطانية ، أو موت جميع الخلايا غير السرطانية ، أو على الأرجح ، موت أجزاء من كليهما بنسب مختلفة. 
 أيضا بسبب هذه المشكلة التقنية ، غالبا ما تكون الثقافات الأولية التي تحتوي على الخلايا اللحمية السرطانية وغير السرطانية غير مناسبة لاختبار الأدوية. على الجانب الآخر ، بسبب هذا التغايرية الخلوية ، تشبه الثقافات الأولية أورامها الأصلية بشكل أفضل بكثير من الخلايا النسيلة في خطوط الخلاياالقائمة 2. والأهم من ذلك ، أن الثقافات الأولية خاصة بالمريض وقد تمكن من اختبار الأدوية الفردي2-4.
 وبالتالي فإن القضية الأساسية هي تطوير طريقة لتحديد نسبة الخلايا السرطانية في الثقافات المختلطة بما في ذلك الثقافات الأولية. لتحقيق هذا التحدي ، تم تصور حل جيني يعتمد على تحديد النسبة الكمية لميزة وراثية خاصة بالورم إلى تسلسل مرجعي عالمي. من هذه النسبة ، يمكن حساب نسبة الخلايا السرطانية في مزرعة مختلطة. 
توضح هذه الدراسة إجراء الأداة الجينية والقائمة على الخلايا لتقييم خصوصية الأدوية المضادة للسرطان بما في ذلك (1) تحضير مزرعة مختلطة من الخلايا السرطانية ذات الخط الثابت والخلايا الليفية غير السرطانية ، (2) معالجة الثقافة المختلطة بدواء اختبار ، (3) تحضير الحمض النووي لتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي ، (4) تحديد نسبة الحذف المتغاير الزيجوت الخاص بالورم إلى تسلسل مرجعي باستخدام مقايسة PCR رقمية مزدوجة المسبار ، (5) حساب نسب الخلايا السرطانية عند كل تركيز دواء و (6) رسم التغيير المعتمد على الجرعة لنسبة الخلايا السرطانية.

<table><tbody><tr><td>مرشح غشاء بقطر 25 مم</td><td>Merk-Millipore</td><td>VSWP 02500</td> لمقايسة ddPCR <td>لغسيل الكلى الإسقاط</td></tr><tr><td>ل NF1</td><td>BioRad</td><td>dHsaCP1000177</td><td></td></tr><tr><td>مقايسة ddPCR المسمى FAM ل RPP30</td><td>BioRad</td><td>dHsaCP2500350</td><td>HEX-labeled</td></tr><tr><td>QX200</td><td>BioRad</td><td>186-4001</td><td>تم استخدام الإصدار السابق QX في الدراسة ، والذي لم يعد متوفرا بعد الآن. البديل هو زيت قطرات QX200</td></tr><tr><td></td><td>BioRad</td><td>186-3005</td><td></td></tr><tr><td>Cartriges&nbsp;</td><td>BioRad</td><td>186-3004</td><td></td></tr><tr><td>جوانات</td><td>BioRad</td><td>186-3009</td><td></td></tr><tr><td>حامل Cartrige</td><td>BioRad</td><td>186-3051</td><td></td></tr><tr><td>رقائق بيرسيبل</td><td>BioRad</td><td>181-4040</td><td></td></tr></tbody></table>

تقييم خصوصية المضاد للسرطان المخدرات<em&gt; في المختبر</em

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

ويتجلى إجراء لتقييم خصوصية الأدوية المضادة للسرطان في المختبر باستخدام الثقافات تحتوي على كل ورم وغير ورم الخلايا. العنصر الرئيسي هو تحديد كمية من التعديل الوراثي للورم محددة فيما يتعلق تسلسل عالمي باستخدام ثنائي التحقيق الرقمي فحص PCR وحساب لاحق من نسبة الخلايا السرطانية. ويتم فحص الخروج على الثقافة التي تحتوي على الخلايا السرطانية وجود خط أنشئت وارتفعت في الخلايا غير السرطانية. يتم التعامل مع ثقافة مختلطة مع المخدرات اختبار بتركيزات مختلفة. بعد العلاج، ويتم إعداد الحمض النووي مباشرة من خلايا لاصقة على قيد الحياة في الآبار لوحات 96-جيدا باستخدام طريقة بسيطة وغير مكلفة، وتعرض لثنائي التحقيق الرقمي فحص PCR لقياس التغيير الجيني للورم معين وتسلسل عالمي المرجعية . في مظاهرة الحالية، يتم استخدام الحذف متخالف من الجين NF1 مثل التعديل الوراثي للورم معين وجين RPP30 كما الجين المرجعية. باستخدام نسبة NF1 / RPP30، تم احتساب نسبة الخلايا السرطانية. منذ التغيير تعتمد على الجرعة من نسبة الخلايا السرطانية يوفر دلالة في المختبر لخصوصية المخدرات، وهذا في الفحص المختبري وراثية وخلية القاعدة المرجح أن يكون إمكانيات التطبيق في اكتشاف الأدوية. وعلاوة على ذلك، لرعاية مرضى السرطان، شخصية، يمكن أن تسهم هذه الأداة genetic- وخلية القاعدة إلى تحسين العلاج الكيميائي عن طريق اختبار فعالية وخصوصية المخدرات مرشح باستخدام الثقافات الأولية من ورم على حدة.

نوعية الحمض النووي أعدت باستخدام العامل البارع المشترك / قطرة غسيل الكلى كافية لPCR الرقمي مرضيا (الشكل 1B). ل2000 الليفية، تقريبا تم الحصول عليها 3000 ± 500 قطرات إيجابية، الموافق 75٪ من المتوقع 4000 نسخ (نسختين في خلية واحدة). في هذه الدراسة، كانت الخلايا السرطانية من خط أنشئت MPNST S462 التي هي معروفة لديهم حذف متغاير الزيجوت من الجين NF1 5. تم الكشف عن هذا التخفيض جرعة الجين 50٪ بشكل واضح من قبل المزدوج فحص PCR الرقمي (الشكل 1B). على النقيض من ذلك، تم قياس نسختين من هذا الجين في الخلايا الليفية. هذا الاختلاف الجيني بين الخلايا السرطانية وغير السرطانية، يمكن حساب نسبة الخلايا السرطانية في الثقافات المختلطة (الشكل 2). عن طريق قياس الجرعة الجينات النسبية NF1 إلى RPP30، نسبة الخلايا السرطانية في ثقافة مختلطة يمكن تحديدفي كل-تركيز الدواء (الشكل 3). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53752/53752fig1.jpg" /> الشكل 1. الرقمية PCR. (A) التوضيح من حيث المبدأ. (ب) فحص ثنائي التحقيق يكشف عن انخفاض كمية من الجينات المستهدفة (NF1) في الخلايا السرطانية MPNST S462 فيما يتعلق الجين المرجعية (RPP30). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53752/53752fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/53752/53752fig2.jpg" /> وتباينت الشكل 2. نسبة محسوبة من خلايا ورم الخلايا السرطانية وغير السرطانية الخلايا في نسب مختلفة، والمصنف في كل بئر من لوحة 96. بعد التعلق O / الطرافة N، كانت هي lysed الخلاياتعرضوا ح العامل البارع / قطرة-غسيل الكلى ولست] المحلاة إلى PCR الرقمي الذي أعطى نسبة NF1 / RPP30. تم احتساب قاعدة على هذه النسبة نسبة الخلايا السرطانية في كل بئر. يعني وحسبت الانحراف المعياري من نسبة الخلايا السرطانية من 4 يعيد في كل نسبة انشاء. تم التخطيط نسب محسوبة من الخلايا السرطانية (العمودي) على نسب الإعداد (المحور السيني). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53752/53752fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53752/53752fig3.jpg" /> الشكل 3. تعتمد على الجرعة تغيير نسبة الخلايا السرطانية. (A) الجرعة التي تعتمد على الحد من خلايا حيوية واضحة. (ب) نسبة من الخلايا السرطانية (يعني والانحراف المعياري من 4 مكررات) تحسب من<html> نسبة NF1: RPP30، انخفضت في نطاق 0-10 ميكرومتر. على أعلى جرعة 50 ميكرومتر، تركت بعض الخلايا الحيوية، على الأرجح بسبب التأثير السام لجميع الخلايا. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53752/53752fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/53752/53752fig4.jpg" /> ويمكن قياس الرقم 4. فصل استجابة الخلايا السرطانية من ذلك الخلايا غير السرطانية (أ) الجدوى و / أو انتشار مجموع الخلايا باستخدام المقايسات التقليدية؛ نسبة الخلايا السرطانية يمكن تحديد باستخدام الإجراء هو موضح في الدراسة الحالية. (ب) باستخدام المعلمتين، استجابة من مجموع الخلايا في ثقافة مختلطة لدواء يمكن تقسيمها إلى استجابة الخلايا السرطانية واستجابة الخلايا غير السرطانية.كوم / ملفات / ftp_upload / 53752 / 53752fig4large.jpg &quot;الهدف =&quot; _ فارغة &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><colgroup><col /><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"></td><td style="width:171px;"> 1 رد الفعل </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"> 2 × ddPCR SUPERMIX </td><td style="width:171px;"> 12 </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"> مزيج فحص لNF1 </td><td style="width:171px;"> 1.2 </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"> مزيج فحص لRPP30 </td><td style="width:171px;"> 1.2 </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"> HaeIII </td><td style="width:171px;"> 0.6 </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:147px;"> حاصل الجمع </td><td style="width:171px;"> 15 </td><td style="width:99px;"> خليط ماستر </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:147px;"> الحمض النووي </td><td style="width:171px;"> 9 </td><td style="width:99px;"></td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:147px;"> مجموع </td><td style="width:171px;"> 24 </td><td style="width:99px;"> خليط PCR النهائي </td></tr></tbody></table> الجدول 1 إعداد المزدوج ddPCR رد الفعل <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> خطوة </td><td> عمل </td><td> درجة الحرارة </td><td> مرة </td><td> دورات </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Polymمحو تفعيل </td><td> 95 ° C </td><td> 10 دقائق </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> تمسخ الحمض النووي </td><td> 94 ° C </td><td> 30 ثانية </td><td rowspan="2"> 40 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> الصلب / exetension </td><td> 60 ° C </td><td> 1 دقيقة </td></tr><tr><td> 4 </td><td> البلمرة التعطيل </td><td> 98 ° C </td><td> 10 دقائق </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> عقد (اختياري) </td><td> 4 ° C </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 2 إعدادات cycler على PCR

والهدف من هذا البروتوكول هو تقييم خصوصية الأدوية المضادة للسرطان في المختبر باستخدام الثقافات المختلطة التي تحتوي على خلايا الورم على حد سواء وغير السرطانية.

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم التغير في النسبة المئوية للخلايا الورمية المعتمد على الجرعة في مزرعة تحتوي على خلايا ورمية وغير ورمية معاً. توفر هذه الطريقة أداة قائمة على الوراثة لتقييم التأثير والخصوصية للأدوية المضادة للسرطان في المختبر. ولها إمكانات تطبيقية في اكتشاف الأدوية وفي الرعاية الشخصية لمرضى السرطان.تتمثل الميزة الرئيسية لهذه الطريقة في أنه عند اختبار دواء مضاد للسرطان في مزرعة تحتوي على خلايا ورمية وخلايا غير ورمية، يمكن فصل استجابة الخلايا الورمية عن استجابة الخلايا غير الورمية. ستقوم إينا، وهي فنية من مختبري، بتوضيح هذا الإجراء. ابدأ هذا الإجراء بزراعة كل من الخلايا الورمية والأرومات الليفية في وسط DMA القياسي عند 37 °C و 5% carbon dioxide طوال الليل.عندما تصل الخلايا إلى مرحلة ما قبل الاندماج، يتم حصادها باستخدام 0.05% trypsin وعدّها باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer). بعد ذلك، يتم خلط 400 خلية ورمية و 1,600 خلية غير ورمية معاً في كل بئر من أطباق زراعة ذات 96 بئراً مع 0.2 mL من الوسط الغذائي، وتجهيز أربع مكررات لكل تركيز من الدواء. تُحضن الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5% carbon dioxide طوال الليل.بعد ذلك، يتم تحضير المحاليل الأصلية من Nilotinib في DMSO بتركيزات 0 و2 و4 و20 mM. يتم تخفيف كل منها بمعدل 200 ضعف في 5 mL من وسط DMA، مما يعطي محاليل دواء بتركيز مضاعف قدره 0 و10 و20 و100 uM. ثم، يتم سحب 0.1 mL من الوسط من كل بئر.أضف 0.1 mL من الوسط الذي يحتوي على الدواء واستمر في تحضين الخلايا لمدة خمسة أيام. وفي نهاية العلاج، افحص الخلايا الملتصقة باستخدام مجهر تباين الأطوار والتقط صوراً لها. اشفط الوسط واغسل الخلايا الملتصقة الناجية مرة واحدة باستخدام 0.2 mL من PBS.لتحلل الخلايا باستخدام طريقة HotSHOT، أضف 50 uL من محلول التحلل القلوي إلى كل بئر. قم بتغطية الآبار بورق الألمنيوم. ثم قم بحضن الطبق عند 95 degrees Celsius في فرن أو على لوح تسخين لمدة 30 دقيقة.بعد مرور 30 دقيقة، افحص العينات تحت المجهر للتأكد من عدم بقاء أي خلايا سليمة على سطح الآبار. في حال عدم تحلل الخلايا بشكل كامل، قم بزيادة وقت التسخين أو أضف مادة منظفة. كما أن تجميدها لمرة واحدة عند 20 Celsius degrees يعزز من عملية تكسير الخلايا.بعد ذلك، أضف 50 uL من محلول التعادل إلى كل بئر، ثم انقل جميع المستخلصات إلى آبار على شكل حرف U في لوحة PCR وجففها في جهاز دورة PCR عند 95 درجة مئوية لمدة تتراوح من 10 إلى 30 دقيقة. بعد ذلك، أعد تشكيل المستخلصات باستخدام 20 uL من الماء المقطر. لإزالة الأملاح من DNA باستخدام الديلزة بالقطرة، قم بتقسيم مرشح غشائي بقطر 25 mm إلى أربع مناطق وقم بترقيم هذه المناطق.قم بتعويم المرشحات فوق الماء المقطر بحيث يكون الجانب اللامع للأعلى في بئر من لوحة ذات 12 بئراً. ثم قم بإضافة 20 uL من محلول التحلل المعاد تشكيله بحذر فوق المرشح. غطِّ اللوحة وقم بإجراء الديلزة لمدة تتراوح من 30 إلى 60 دقيقة.بعد ذلك، اسحب الماء الموجود أسفل المرشح دون قلبه أو تحريك القطرات. انقل قطرات المستخلص إلى ثقوب لوحة PCR جديدة. بعد ذلك، جفف قطرات DNA عن طريق تسخين اللوحة عند 95 درجة Celsius لمدة تتراوح من 10 إلى 30 دقيقة في جهاز PCR cycler.بعد ذلك، قم بإعادة تشكيل المستخلصات في 10 uL من الماء. ثم قم بتحضير المزيج الرئيسي الذي يحتوي على جميع المكونات باستثناء DNA لتفاعل PCR الرقمي ذو المسبار المزدوج. قم برج المزيج الرئيسي بالدوامة (Vortex) ثم قم بطرده مركزياً لمدة 10 ثوانٍ بأقصى قوة في جهاز الطرد المركزي، ووزع 15 uL من المزيج في كل بئر من طبق PCR ذو 96 بئراً.أضف ناتج تحلل كل عينة إلى الآبار التي تحتوي على المزيج الرئيسي. انقل 20 uL من كل مزيج تفاعل إلى البئر الموجود في جانب العينة من الخرطوشة في درجة حرارة الغرفة. ثم، وزع 70 uL من زيت مولد القطيرات في كل بئر في جانب الزيت من الخرطوشة.أغلق الخرطوشة باستخدام حاشية وضع التركيب بأكمله في مولد قطيرات قبل البدء في عملية توليد القطيرات. بعد ذلك، انقل 40 uL من محلول القطيرات إلى كل بئر من آبار لوحة PCR ذات 96 بئراً. أحكم إغلاق اللوحة باستخدام رقاقة قصديرية وضع اللوحة في جهاز دورات PCR.بعد ذلك، اضبط درجة حرارة الغطاء عند 105 °C ومعدل التسخين عند 2 °C في الثانية. عند الانتهاء، انقل اللوحة إلى قارئ القطرات وابدأ القراءة. بدلاً من ذلك، يمكن تخزين اللوحة عند 4 °C لمدة تصل إلى 24 ساعة.قم الآن بتحميل بيانات الـ PCR الرقمي وأجرِ تحليلاً تلقائياً. افحص العينات يدوياً للتأكد من أن القطيرات الموجبة والسالبة منفصلة بشكل جيد. استبعد العينات التي لا تظهر فيها فواصل واضحة بين القطيرات الموجبة والسالبة من التحليلات اللاحقة.انسخ النسبة الناتجة من NF1 إلى RPP30 في ورقة عمل Excel. بعد ذلك، احسب نسبة الخلايا الورمية. لكل تركيز دوائي، احسب المتوسط والانحراف المعياري من المكررات الأربعة، ثم قم برسم المتوسطات والانحرافات المعيارية مقابل تركيزات الدواء.يظهر هنا الانخفاض المعتمد على الجرعة في عدد الخلايا الحيوية المرئية. وقد انخفضت نسبة الخلايا الورمية، المحسوبة من نسبة NF1 إلى RPP30، في النطاق من 0 إلى 10 uM. وعند أعلى جرعة بلغت 50 uM، تبقت خلايا حيوية قليلة، وذلك على الأرجح بسبب تأثير سام على جميع الخلايا.يمكن قياس حيوية وتكاثر إجمالي الخلايا باستخدام المقاييس التقليدية، ولكن يمكن تحديد نسبة الخلايا الورمية باستخدام الإجراء الموضح في هذه الدراسة. وباستخدام هذين المعيارين، يمكن تقسيم استجابة الخلايا الإجمالية لعقار ما في مزرعة مختلطة إلى استجابة الخلايا الورمية واستجابة الخلايا غير الورمية. يمكن إتمام إجراء الاختبار بالكامل في غضون أسبوع واحد، بما في ذلك فترة المعالجة التي تستمر لخمسة أيام.عند محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر أن النسبة بين الجين المستهدف وجين العكس تختلف. نحن نلاحظ نطاقاً ضيقاً جداً يتراوح بين 0 و1، ولذلك فإن الدقة أمر أساسي. كما يجب تقليل التباين بين العينات وفي عملية المناولة قدر الإمكان.باتباع هذا الإجراء، يمكن أيضاً استخدام المزارع الأولية التي تحتوي على خلايا ورمية وخلايا غير ورمية لاختبار تأثير وخصوصية الأدوية المضادة للسرطان. علاوة على ذلك، يمكن تقييم تأثير الدواء بشكل محدد على مجموعة فرعية معينة من الخلايا ذات التغير الجيني المحدد. آمل أن يساعدكم هذا الفيديو في فهم كيفية استخدام السمة الجينية لتحديد نسبة الخلايا الورمية في عينة ما أو في مزرعة تحتوي على كل من الخلايا الورمية والخلايا غير الورمية.

assessing-specificity-of-anticancer-drugs-in-vitro

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يتم التعبير عن مستقبلات التيروزين كيناز ectopically في العديد من أنواع السرطان وتم تحديدها كأهداف العلاجية في سرطان الدم الحاد. يصف هذا المخطوط استراتيجية فعالة لتقييم ما قبل السريرية من مثبطات كيناز التيروزين لعلاج سرطان الدم الحاد.

تقييم ما قبل السريرية من التيروزين كيناز مثبطات لعلاج اللوكيميا الحادة

ووصف طريقة لتوليف التيتانيوم والفاناديوم وكلاء المضادة للسرطان الحساسة الهواء، جنبا إلى جنب مع تقييم النشاط السامة للخلايا نحو خط الخلايا السرطانية البشرية التي MTT الفحص.

المضادة للسرطان المعادن مجمعات: التجميعي والتقييم السمسة قبل الفحص الإنتقالي العسكري

هنا ، يتم استخدام المراقبة في الوقت الفعلي لعملية التمثيل الغذائي للخلايا السرطانية ، جنبا إلى جنب مع نموذج الغشاء المشيمي آلانتوي لجنين الدجاج في الجسم الحي (CAM) للورم الخبيث ، لتقييم الأهداف / العوامل الجديدة المضادة للسرطان لقدرتها على توعية الخلايا السرطانية بالعلاج الكيميائي الضار بالحمض النووي.

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

نحن هنا وصف بروتوكول يهدف إلى التعرف على تأثير الربط الشاذة على مقاومة الأدوية في الأورام الصلبة والأورام الخبيثة الدموية. لتحقيق هذا الهدف، قمنا بتحليل الشخصية transcriptomic نماذج الوالدين والمقاومة في المختبر من خلال الحمض النووي الريبي يليها، وأنشأ طريقة تقوم QRT-PCR للتحقق من صحة الجينات المرشحة.

باستخدام الحمض النووي الريبي لكشف التسلسل رواية لصق المتغيرات ذات الصلة لمقاومة المخدرات في<em&gt; في المختبر</em&gt; نماذج السرطان

وهنا، نقدم الفحص السريري من السرطان كومارينس استخدام الثقافة 3D والزرد.

التقييم السريري بيواكتيفيتي OT48 الكومارين السرطان الماغنيسيوم وفحوصات تشكيل مستعمرة، وتكثيفها الزرد

ويصف هذا البروتوكول كيفية تقييم التآزر بين جسم السرطان والأدوية أنتينيوبلاستيك في نماذج السريرية باستخدام معادلة مؤشر الجمع بين تشو وتالالاي.

التقوية لكفاءة جسم السرطان بالعقاقير أنتينيوبلاستيك: الكشف عن التآزر جسم-المخدرات باستخدام معادلة الجمع بين مؤشر

هنا، يمكننا وصف أسلوب ثقافة المشارك في المختبر إلى بشكل متكرر التحدي المستهدفة لورم خلايا تي، الذي يسمح بتحليل النشاط انتيتومور تي خلية المظهرية والوظيفية.

في ريتشالينجي خلية الورم المختبر للتقييم التنبؤي من مستضد تشيميريك مستقبلات خلية تي انتيتومور الدالة

تم تطوير نظام فحص عالي الإنتاجية في المختبر لتقييم الأدوية المضادة للسرطان باستخدام الأجهزة العضوية السرطانية المشتقة من المريض (PDOs) ، على غرار أنسجة السرطان ولكنها غير مناسبة لأنظمة المقايسة عالية الإنتاجية في المختبر مع لوحات 96-well و 384-well.

عالية الإنتاجية في المختبر المقايسة باستخدام الجهازيات الورم المستمدة من المريض

الخطوة الضرورية في تطوير أبتامير مضاد للسرطان هي اختبار ارتباطه بالهدف. نعرض مقايسة قائمة على التدفق الخلوي لدراسة هذا الارتباط ، مع التأكيد على أهمية تضمين أبتامير التحكم السلبي والخلايا السرطانية الإيجابية أو السلبية لهذا البروتين المعين.

مقايسة ربط بروتين سطح الخلية القائمة على قياس التدفق الخلوي لتقييم انتقائية وخصوصية أبتامير مضاد للسرطان

يقدم هذا البروتوكول تقنية آلية عالية الإنتاجية قائمة على الصور لتحديد المركبات التي تعدل قتل خلايا سرطان الثدي بوساطة الخلايا القاتلة الطبيعية في وجود جسم مضاد علاجي مضاد ل HER-2.

فحص عالي المحتوى لتحديد المركبات المعدلة للسمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة

هنا ، نقدم طريقة لتحديد المركبات التي تعدل آلية ADCC ، وهي آلية مهمة لقتل الخلايا السرطانية للأجسام المضادة للأورام. يتم قياس التأثير السام للخلايا القاتلة الطبيعية في كرويات خلايا سرطان الثدي في وجود تراستوزوماب. يحدد تحليل الصور الخلايا القاتلة والمستهدفة الحية والميتة في الأجسام الكروية.

قياس السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة في نموذج كروي للورم: تطبيق لاكتشاف الأدوية

اكتشف تقييم خصوصية الأدوية المضادة للسرطان في المختبر باستخدام مزارع خلايا مختلطة من خلايا الورم والألياف. تتيح هذه الطريقة فصل استجابة خلايا الورم عن الخلايا غير السرطانية بدقة عالية.

تقييم خصوصية المضاد للسرطان المخدرات

استكشف المزيد من الفيديوهات