Name: زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: تعلم تقنية زرع وسادة الدهون المبيضية في الفئران لدراسة الأنسجة الظهارية الطبيعية والمحولة في الجهاز التناسلي الأنثوي. تتيح هذه الطريقة للباحثين استكشاف إمكانات التمايز والتجدد والتكاثر الورمي للخلايا.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونود أن نشكر الدكتور أندرو K. غودوين، المركز الطبي بجامعة كانساس، لتوفير الخلايا البشرية HIO118. ودعمت هذه الدراسات التي منح من برنامج الخلايا الجذعية نيويورك (NYSTEM، T028095) والمعاهد الوطنية لل/ معهد الصحة الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (P50HD076210) لAFN، والمنح من NYSTEM (C028125، C024174 و T028095)، المعاهد الوطنية لل/ معهد الصحة الوطني للسرطان (CA182413) وصندوق المبيض أبحاث السرطان (327516) لAYN.

<ol><li>Deome, K. B., Faulkin, L. J., Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li>
<li>Proia, D. A., Kuperwasser, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+human+mammary+tissues+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of human mammary tissues in a mouse model.</a> Nature protocols. 1, 206-214 (2006).</li>
<li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439, 84-88 (2006).</li>
<li>Stingl, J., Caldas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+heterogeneity+of+breast+carcinomas+and+the+cancer+stem+cell+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular heterogeneity of breast carcinomas and the cancer stem cell hypothesis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 791-799 (2007).</li>
<li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PIK3CA%28H1047R%29+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">PIK3CA(H1047R) induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525, 114-118 (2015).</li>
<li>Nikitin, A. Y., Nafus, M. G., Zhou, Z., Liao, C. -P., Roy-Burman, P. Prostate stem cells and cancer in animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNikitin%2C+AY+%22Stem+Cells+and+Cancer%22">Stem Cells and Cancer</a>. Bagley, R. G., Teicher, B. A. , Humana Press. New York, NY. 199-216 (2009).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160, 324-338 (2015).</li>
<li>Lu, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+stem+cell+populations+in+sweat+glands+and+ducts+reveals+roles+in+homeostasis+and+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of stem cell populations in sweat glands and ducts reveals roles in homeostasis and wound repair.</a> Cell. 150, 136-150 (2012).</li>
<li>Flesken-Nikitin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+surface+epithelium+at+the+junction+area+contains+a+cancer-prone+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ovarian surface epithelium at the junction area contains a cancer-prone stem cell niche.</a> Nature. 495, 241-245 (2013).</li>
<li>Orsulic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ovarian+cancer+by+defined+multiple+genetic+changes+in+a+mouse+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of ovarian cancer by defined multiple genetic changes in a mouse model system.</a> Cancer Cell. 1, 53-62 (2002).</li>
<li>Dawes, J., Liu, B., Mars, W., Michalopoulos, G., Khillan, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+ovarian+transplants+to+rescue+a+transgenic+line+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Multiple ovarian transplants to rescue a transgenic line of mice.</a> Lab Anim (NY). 39, 191-193 (2010).</li>
<li>Cordero, A. B., Kwon, Y., Hua, X., Godwin, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+therapeutic+treatments+in+an+orthotopic+mouse+model+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and therapeutic treatments in an orthotopic mouse model of ovarian cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li>
<li>Albihn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+capsular+material+by+equine+trophoblast+transplanted+into+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Production of capsular material by equine trophoblast transplanted into immunodeficient mice.</a> Reproduction. 125, 855-863 (2003).</li>
<li>Muthusamy, N., Vijayakumar, A., Cheng, G., Ghashghaei, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+knock-in+Foxj1%28CreERT2%3A%3AGFP%29+mouse+for+recombination+in+epithelial+cells+with+motile+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A knock-in Foxj1(CreERT2::GFP) mouse for recombination in epithelial cells with motile cilia.</a> Genesis. 52, 350-358 (2014).</li>
<li>Perets, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+the+fallopian+tube+secretory+epithelium+leads+to+high-grade+serous+ovarian+cancer+in+Brca%3BTp53%3BPten+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Transformation of the fallopian tube secretory epithelium leads to high-grade serous ovarian cancer in Brca;Tp53;Pten models.</a> Cancer Cell. 24, 751-765 (2013).</li>
<li>Capo-Chichi, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+alterations+of+the+extracellular+environment+of+ovarian+surface+epithelial+cells+in+premalignant+transformation%2C+tumorigenicity%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Dynamic alterations of the extracellular environment of ovarian surface epithelial cells in premalignant transformation, tumorigenicity, and metastasis.</a> Cancer. 95, 1802-1815 (2002).</li>
<li>Roland, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+surface+and+cyst+epithelial+basement+membranes+and+preneoplastic+morphologic+changes+in+prophylactic+oophorectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Loss of surface and cyst epithelial basement membranes and preneoplastic morphologic changes in prophylactic oophorectomies.</a> Cancer. 98, 2607-2623 (2003).</li>
<li>Flesken-Nikitin, A., Odai-Afotey, A. A., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+stem+cell+niche+in+the+pathogenesis+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Role of the stem cell niche in the pathogenesis of epithelial ovarian cancers.</a> Mol Cell Oncol. 1, 963435(2014).</li>
<li>Ng, A., Barker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovary+and+fimbrial+stem+cells%3A+biology%2C+niche+and+cancer+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Ovary and fimbrial stem cells: biology, niche and cancer origins.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16, 625-638 (2015).</li>
<li>Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in cancer.</a> Nature. 469, 314-322 (2011).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).</li>
<li>Williams, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+high-resolution+imaging+of+epithelial+ovarian+cancer+by+laparoscopic+nonlinear+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Strategies for high-resolution imaging of epithelial ovarian cancer by laparoscopic nonlinear microscopy.</a> Transl Oncol. 3, 181-194 (2010).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

أنشأنا المبيض منصة الدهون زرع الفحص الذي يسمح لتسليم دقيقة والكشف عن الخلايا والأنسجة الظهارية. لوحة الدهون إجراء زرع فحص المبيض هو أقل تحديا من الناحية الفنية من حقن intrabursal 10-12 ويسمح لأكثر تجانسا والموقع الدقيق للخلايا المزروعة بالمقارنة مع حقن داخل الصفاق 9. كما تناسب بشكل جيد بالنسبة زرع على المدى الطويل من جهاز بأكمله، مثل أنبوب الرحم. الأهم من ذلك، توفر لوحة الدهون المبيض المكروية مألوفة لظهائر من الجهاز التناسلي للأنثى. يجب أن تكون مناسبة بشكل خاص للدراسات الخصائص الجزيئية والخلوية من المبيض البشري والفأر وخلايا ظهارة الأنبوبي أثناء تجديد والتحول السرطاني. وعلى النقيض من الأجهزة الأخرى، وركزت بعض الدراسات على تحديد وتوصيف الخلايا الجذعية في ظهائر من ص الإناثالجهاز eproductive 18،19. مثل هذه الدراسات هي ذات أهمية خاصة، إذ يعتقد العديد من أنواع السرطان أن تنشأ من خلايا جذعية للبالغين 20. لا تزال حتى الان أصول الخلوية من سرطان المبيض الظهاري مثيرة للجدل للغاية (18). حساب سرطان المبيض الظهاري لمعظم سرطانات المبيض وهي في 5th مكان بين جميع الوفيات الناجمة عن السرطان من النساء في الولايات المتحدة 21. وبالتالي تطوير فحص مثلي مع العديد من المزايا على تقنيات زرع القائمة 9-12 يجب أن يسهل كثيرا من الدراسات في هذا المجال. ونظرا لموقع سطحي من لوحة الدهون المبيض، نظم التصوير الحيوانات الصغيرة يمكن استخدامها لمتابعة engraftments المسمى مع الفلورسنت قوي أو صحفيين إضاءة الحيوية. كما ينبغي أن يكون من الممكن تحديد الحد الأدنى الغازية عالية الدقة فحوصات التصوير الحية، مثل المجهر غير الخطية (22). ويمكن أيضا أن تبقى لوحة الدهون المبيض في الثقافات الجهاز، مما يسمحجي ثقافة ثلاثية الأبعاد من ظهائر العادية والأورام في ظل ظروف تلخص بشكل وثيق تنظيم الخلايا والمصفوفة خارج الخلية. ينبغي أن الدراسات المستقبلية معالجة هذه الاحتمالات الواعدة. يجب مراعاة العديد من الخطوات الهامة. توفير وسادة التدفئة والحفاظ على القوارض دافئة أثناء الجراحة يحسن كثيرا من معدل البقاء على قيد الحياة. العقم من أدوات التعامل مع لوحة الدهون يضمن أن يتم الاحتفاظ الأنظمة المغروسة عقيمة. في تجربتنا، والنتائج نزيف كبير في تخلف نمو الزرع. الأهم من ذلك، ينبغي بذل الدهون وسادة شق على وجه التحديد بسبب تمزيق لوحة الدهون أو ثقب من خلال أسباب النزيف. وينبغي أن تستخدم التخثر لوقف النزيف عند الضرورة. إذا engraftments لا تتطور، ينبغي النظر على تركيز أعلى من حقن الخلايا. والامتداد الناجحة الأولى يمكن ملاحظتها في أقرب وقت بعد أسبوع من زرع والأكثر engraftments يجب أن يكون واحدا مرئيةشهر بعد العملية. للزرع، والإبر مع أكبر قطر (23-25 ​​G) يمكن استخدامها لمنع القص من الخلايا الكبيرة (أكثر من 10 ميكرون في القطر). ومع ذلك، قد تكون هذه الإبر أكثر الصدمة إلى لوحة الدهون ويجب أن يتم اختبارها استخدامها مسبقا. لتجاربنا استخدمنا 6-8 الاسبوع القديمة المانحة والمتلقية الفئران. للأغراض الفئران الأصغر أو الأكبر سنا يمكن استخدامها. ومع ذلك، قد تحتاج إلى تعديل عدد من حقن الخلايا. فإن حجم أصغر من منصات الدهون المبيض في الجهات المانحة الأصغر سنا في حاجة أيضا إلى النظر فيها. كما هو الحال مع أي طرق، وهناك بعض القيود المفروضة على الماوس الدهون المبيض زرع وحة الفحص. على الرغم من أن الفئران المناعية المختصة مسانج يمكن استخدامها لالفئران الخلايا / الأنسجة الابتدائية، لدينا تقنية تتطلب مجموعة موردي المواد النووية أو الفئران SCID لزرع المواد البشرية. ومن المرجح ممكن من اجل انسنة لوحة الدهون لدعم نمو الخلايا الظهارية الإنسان. ومع ذلك، فإننا لم تختبر هذا النهج حتى الان. استخدام الحديد الأصغرالذكور قد يؤدي إلى انخفاض تكاليف تربية. ومع ذلك، ناضجة إناث الفئران البكر (عمر 8 إلى 10 أسابيع) لديها وسادة أكبر من الدهون، مما يتيح زرع العينات أكبر. وأخيرا، يجب تدريب العاملين في المختبرات في جراحة الحيوان لضمان التنفيذ في الوقت المناسب والناجح لهذا الإجراء.

فحوصات لزراعة الأعضاء، والتي تنطوي على إدخال الخلايا والأنسجة في الجسم مواقع محددة في الفئران، تمثل نهجا أساسيا للدراسات تجديد الأنسجة والتسرطن. زرع مثلي الخلايا، وهذا هو، وضعهم في بيئة الأصلي، أهمية خاصة لتوصيف الخلايا الجذعية البالغة. واقترح وجود الخلايا الجذعية الثديية أول من زرع أجزاء الغدة الثديية الظهارية في منصات الدهون الثديية خالية من الغدة من الفئران 1. واستخدمت المقايسات Engraftment إلى الماوس أنسنة الدهون وسادة 2 إلى تلخيص تطور التجدد المحتملة وطبيعية من الخلايا الظهارية الثدي الأولي الإنسان. وعلاوة على ذلك، كانت التسلسلية والحد من عمليات زرع التخفيف من أنواع الخلايا متميزة ظاهريا في لوحة الدهون الثديية مسح حاسمة لاختبار قدرة التجديد الذاتي والتمايز multilineage من الخلايا الجذعية الثديية 3-5. المقايسات زرع في combinatأيون مع النسب الجيني تتبع بمثابة دليل على خلية المنشأ في التسرطن الثديية 5. وتستخدم عمليات زرع الكلى كبسولة عادة لاختبار خصائص الخلايا الجذعية البروستاتا المفترضة 6. كشفت زرع مثلي من الفأر العادي والأورام وorganoids البنكرياس البشري الجينات والممرات تغيير في سرطان تقدم 7. كما تم دعم أهمية البيئة المحلية من قبل مظاهرة للتجديد متنوع بعد engraftments من الغدد العرقية في مواقع مختلفة، مثل منصات الثديية الدهون، ومنصات الدهون الكتف، والخلفي الجلد 8. عادة ما تستخدم في التجويف البريتوني والجراب المبيض كأماكن لزرع مثلي من الخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي للأنثى 9-12. كل من هذه الأساليب لديها عدد من القيود. حقن داخل الصفاق من الخلايا يؤدي إلى زرع في مناطق مختلفة من التجويف البريتوني، وبالتالي كومplicating مراقبة نمو الخلايا. وعلاوة على ذلك، والاختلافات في المكروية، مثل مدى الأوعية الدموية، الغدد العرقية وتمثيل الخلايا المناعية، قد تكون كبيرة جدا في مناطق مختلفة من التجويف البريتوني. الجراب المبيض لديها حجم محدود للغاية، مما يسمح للحقن لا يزيد عن 10 ميكرولتر من السائل. وهذا يحد بشكل كبير من كمية الخلايا التي يمكن أن تدار. وعلاوة على ذلك، يمكن حقنها داخل الجراب المبيض يكون تماما تحديا تقنيا والإجراء يتطلب قدرا كبيرا من الوقت. لمعالجة هذه القيود، وقد استفدنا من خصائص منصة الدهون المبيض. الماوس المبيض منصة الدهون لديها حجم كبير، متاخمة لالمبيض وأنبوب الرحم، ويمكن الوصول إليها بسهولة عن طريق الجراحة. وقد أفيد أن الأرومة الغاذية الخيول يمكن زرعها في لوحة الماوس المبيض الدهون 13. لكن تفاصيل هذه الطريقة لم تكن وصفها. كما لم يذكر ما إذا كان هذا ليثود يمكن تطبيقها على خلايا وأنسجة البالغين. هنا، نحن تصف نهج يمكن الاعتماد عليها لزرع الماوس والخلايا البشرية من الجهاز التناسلي للأنثى، وتبين أن هذا الأسلوب ينطبق أيضا على زرع الأعضاء على المدى الطويل.

<table><tbody><tr><td>إبرة قياس 25</td><td>BD Becton Dickinson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>إبرة قياس 28 (حقنة تحت الجلد مع إبرة متصلة)</td> <td>كيندال</td><td>30339</td><td>رقم الجزء: 8881500014</td></tr><tr><td>عامل نمو الخلايا الليفية الأساسي -2</td> مصفوفة الغشاء <td>القاعدي Sigma-Aldrich</td><td>F9786</td><td></td></tr><tr><td>(Geltrex)</td> <td>Invitrogen</td><td>A1413202</td><td></td></tr> <tr><td>& beta ؛ -actin-DsRed الفئران</td><td>مختبر جاكسون</td><td>6051</td><td>B6. Cg-Tg (CAG-DsRed * MST) 1Nagy / J</td></tr> <tr><td>& -actin-EGFP الفئران</td><td>مختبر جاكسون</td><td>3291</td><td>C57BL / 6-Tg (CAG-eGFP) 1Osb / J</td></tr> <tr><td>& beta - mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7522</td><td></td></tr><tr><td>ألبومين البقر</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>الكلوروفورم</td><td>VWR</td><td>EM-CX1058-1</td><td></td></tr><tr>الخلايا الجذعية<td>الكولاجيناز / الهيالورونيداز</td><td> تقنيات</td><td>7912</td><td></td></tr><tr><td>قوارير مبردة</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>dispase II</td><td>Worthington</td><td>NPRO2</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F12 (HAM's) Corning</td><td></td> <td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI (Deoxyribonuclease I)</td> <td>تقنيات الخلايا الجذعية</td><td>7900</td><td></td></tr><tr><td>وسيط تضمين لعينات الأنسجة المجمدة (O. C. T.)</td><td>ساكورا فينيتك&nbsp;</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>عامل نمو البشرة</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>E4127</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول 200 دليل</td><td>Koptec</td><td>V1001</td><td>لإعداد 70٪ & nbsp ؛</td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني</td><td>سيجما</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>طرف مرشح 0.1-10 / 20 & مايكرو ؛ ل XL &nbsp ؛</td><td>الولايات المتحدة الأمريكية العلمية</td><td>1120-3810</td><td></td></tr><tr><td>FOXJ1 الجسم المضاد</td><td>eBioscience</td><td>E10109-1632</td><td>المستخدمة بتركيز 1: 1،000 (بدون كشف)</td></tr> <tr><td>الهيدروكورتيزون</td><td>Sigma</td><td>H0135</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Zoetis</td><td>4396H</td><td></td></tr><tr><td>فيلم مختبر (Parafilm M) يمكن</td> <td>الوطنية الأمريكية</td><td>PM-999</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Corning</td><td>25-005-Cl</td><td></td></tr><tr><td>الأنسولين - ترانسفيرين - سيلينيت الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>I884</td><td></td></tr><tr><td>إيزوفلوران ، 250 مل</td><td>سانتا كروز لصحة</td><td>sc-363629Rx</td><td></td></tr><tr><td>لوحة التثبيت المنخفضة 24 بئر</td><td>كوستار</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>MEM الأحماض الأمينية غير الأساسية</td><td>Corning</td><td>25-025-Cl</td><td></td></tr> قوالب <tr><td>الأنسجة المعدنية</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>62527-22</td><td></td></tr><tr><td>مجهر ، مقلوب</td><td>نيكون</td><td>Eclipse TS 100</td><td></td></tr><tr><td>المجهر ، ستيريو</td><td>نيكون</td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>إيماءة / SCID / جاما (NSG) الفئران</td><td>مختبر جاكسون</td><td>05557</td><td>إيماءة. Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ</td></tr><tr><td>محلول بارافورمالديهايد 16 ٪</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>البارافين (بارابلاست ، X-TRA) فيشر</td> <td>ثيرمو ساینتيك</td><td>23-021-401</td><td></td></tr><tr><td>الجسم المضاد PAX8</td><td>Proteintech</td><td>10336-1-AP</td><td>المستخدم عند التركيز 1: 1،000 (بدون كشف القناع) PBS</td></tr> <tr><td>(محلول ملحي مخزن بالفوسفات)</td><td>كورنينج</td><td>&nbsp; 21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين ستربتومايسين</td><td>كورنينج</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>فئران نقص المناعة المشترك الشديد (SCID / NCr) ، خلفية BALB / C) برنامج</td> <td>الإنتاج الحيواني NCI-Frederick</td><td>01S11</td><td></td></tr><tr><td>بيروفات الصوديوم</td><td>Corning</td><td>25-000-Cl</td><td></td></tr><tr><td>جل معالجة العينات (HISTOGEL)</td> <td>ريتشارد آلان العلمي</td><td>HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>السكروز</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>تريبسين-EDTA ، 25٪</td> <td>كورنينج</td><td>25-053-Cl</td><td></td></tr></tbody></table>

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

تعتبر فحوصات زرع العظام في الفئران لا تقدر بثمن لدراسات تجديد الخلايا وتحول الأورام. تشمل الأساليب الشائعة لزرع تقويم العظام لسطح المبيض وظهارة البوق إدارة الخلايا داخل الصفاق وداخل البورس. تشمل القيود الخاصة بهذه الطرق تحديد موقع الخلايا المحقونة بشكل سيئ وحجم المساحة المحدود. علاوة على ذلك ، فهي غير مناسبة بشكل كبير للحفاظ على الهيكل طويل الأمد للأعضاء المزروعة. لمواجهة هذه التحديات ، قمنا بتطوير نهج بديل يعتمد على إدخال الخلايا وشظايا الأنسجة في وسادة دهون الفأر. تقع وسادة دهون المبيض في الفأر في المنطقة المجاورة مباشرة للمبيض وأنبوب الرحم (المعروف أيضا باسم قناة البيض ، قناة فالوب) ، وتوفر بيئة مكروية مألوفة لخلايا وأنسجة هذه الأعضاء. في نهجنا ، يتم تطعيم الفأر والخلايا البشرية المسماة بالفلورة ، وشظايا أنبوب الرحم باستخدام جراحة شق ظهري طفيفة الصدمة. يمكن وضع الخلايا المزروعة ونتوءاتها بسهولة في وسادة دهون المبيض لأكثر من 40 يوما. يسمح الزرع طويل الأمد لأنبوب الرحم بأكمله بالحفاظ الصحيح على جميع مكونات الأنسجة الرئيسية ، ولا يؤدي إلى آثار جانبية ضارة ، مثل التليف والالتهابات. يجب أن يكون نهجنا قابلا للتطبيق بشكل فريد للإجابة على الأسئلة البيولوجية المهمة مثل التمايز والقدرة التجديدية والأورام لمجموعات خلايا معينة. علاوة على ذلك ، يجب أن يكون مناسبا لدراسات العوامل البيئية الدقيقة في التطور الطبيعي والسرطان.

الخلايا والأنسجة التجريبية يمكن زرعها بدقة في لوحة الدهون المبيض تحت المجهر تشريح (الشكل 1). وتشمل الأمثلة الماوس الأساسي خلايا ظهارة الأنبوبي المستمدة من الفئران معربا عن بتواجد مطلق EGFP (الشكل 2A) أو عن dsRed (الشكل 2B) والإنسان خلد سطح المبيض خلايا ظهارة HIO118 16،17 الخلايا المسمى مع mCherry وEGFP lentiviruses (الشكل 2C - F). هذا النهج هو أيضا ينطبق على زرع على المدى الطويل من الأجهزة، مثل أنبوب الماوس الرحم (الشكل 3). وفقا لتلطيخ المناعى، سواء مهدبة (FOXJ1 إيجابية 14)، ويتم الاحتفاظ إفرازية (PAX8 إيجابي 15) الخلايا في ظهارة الأنبوبي للأنسجة المزروعة (الشكل 3D و E). <imgبديل = &quot;الشكل 1&quot; SRC = &quot;/ ملفات / ftp_upload / 54444 / 54444fig1.jpg&quot; /&gt; الشكل 1: المبيض الدهون وسادة زراعة (A) منطقة مكشوف من زرع (السهم). (ب) يتم إجراء شق من 28 إبرة G (السهم). (C) UT / الطابق السفلي غشاء مصفوفة خليط engraftment بواسطة ماصة (السهم). (D) UT المغروسة (السهم، أحمر، UT من-β أكتين عن dsRed الفئران). FP، وسادة من الدهون. اوف والمبيض. UT، أنبوب الرحم. شريط مقياس = 2 مم. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54444/54444fig2.jpg" /> الشكل 2: الكشف عن زرع ماوس الابتدائية الخلايا الطلائية توبال والإنسان مخلد المبيض سطح الظهارة خلايا (A، B) خارج<html> زوائد من الماوس الأساسي خلايا ظهارة الأنبوبي (الأسهم) من الفئران β-الأكتين-EGFP (A، خضراء) وβ أكتين عن dsRed (B، الأحمر) بعد 8 أيام زرع في الماوس مسانج. (C، D) Engraftments الخلايا المختلطة HIO118 (السهام) المسمى إما Lenti-EGFP (الأخضر) أو Lenti-mCherry (أحمر) بعد 10 يوما زرع في الفئران مجموعة موردي المواد النووية. (د) منطقة الموسع من (C، السهم). (E، F) وضعت الكسب غير المشروع بعد 43 يوما زرع الخلايا نفسها كما هو الحال في C، D على الماوس SCID (السهام). م، F، مضان. E، مشرق الميدان، FP، وسادة من الدهون. اوف والمبيض. UT، أنبوب الرحم. (A، B، DF) شريط مقياس = 500 ميكرون. (C) مقياس بار = 1600 ميكرون. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> إعلان / 54444 / 54444fig3.jpg &quot;/&gt; الرقم 3: توصيف زرع الرحم أنبوب. (A) أنبوب الرحم الكامل (السهم) من β-الأكتين-عن dsRed الماوس بعد 6 أيام زرع في لوحة الدهون المبيض (السهم، أحمر). (ب) قسم المجمدة الفلورسنت لوحة الدهون مع زرع هو مبين في (A). الأحمر، عن dsRed. الأزرق، 4، 6 diamidino-2-phenylindole (دابي) counterstaining النووي. (ج) أنبوب الرحم الكسب غير المشروع (السهم) بعد 40 يوما من زرع في مجموعة موردي المواد النووية الماوس المتلقي (السهم). قسم البارافين. ملاحظة الحفاظ على الصحيح من جميع مكونات أنبوب الرحم من حيث المبدأ، وعدم وجود التليف المصاحب زرع والالتهابات. الهيماتوكسيلين وتلطيخ يوزين. (D، E) كشف علامات ظهارة الأنبوبي المقترنة مربع الجينات 8 (PAX8) وForkhead مربع J1 (FOXJ1؛ اللون البني النووي، النصال) في خلايا الكسب غير المشروع (سهام) هو مبين في ( <sترونج&gt; C). النظام المناعي. Counterstaining مع الأخضر الميثيل. FP، وسادة من الدهون. اوف والمبيض. UT، أنبوب الرحم. (A) شريط مقياس = 1000 ميكرون. (ب) شريط مقياس = 200 ميكرون. (CE) مقياس بار = 100 ميكرون. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مكون </td><td> 1X DMEM F12 (لحم الخنزير) المتوسطة </td></tr><tr><td> L-الجلوتامين </td><td> 2 مم </td></tr><tr><td> pruvate الصوديوم </td><td> 1 ملم </td></tr><tr><td> عامل نمو البشرة </td><td> 10 نانوغرام مل -1 </td></tr><tr><td> الأساسية عامل نمو الخلايا الليفية 2 </td><td> 10 نانوغرام مل -1 </td></tr><tr><td> الهيدروكورتيزون </td><td> 500 نانوغرام مل -1 </td></tr><tr><td> الأنسولين </td><td> 5 ميكروغرام مل -1 </td></tr><tr><td> هيئة تنظيم الاتصالاتnsferrin </td><td> 5 ميكروغرام مل -1 </td></tr><tr><td> سيلينيت الصوديوم </td><td> 5 نانوغرام مل -1 </td></tr><tr><td> الزلال البقري </td><td> 0.10٪ </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين </td><td> 100 وحدة مل -1 / 100 ميكروغرام مل -1 </td></tr><tr><td> النسر متوسطة (MEM) الأحماض الأمينية غير الأساسية الأساسية الدنيا </td><td> 0.1 ملم </td></tr><tr><td> بيتا المركابتويثانول </td><td> 10 -4 M </td></tr></tbody></table> تذاب ماوس توبال Epithelim النمو المتوسطة (M-TE-GM) مكونات المدرجة في العمود الأيسر في 1X DMEM F12 متوسطة (لحم الخنزير) في تركيزات المشار إليها، العمود الأيمن: الجدول 1. تكوين المتوسط ​​النهائي هو المصل مجانا.

نحن تصف المبيض وسادة بدعة زرع فحص مناسبة للدراسات ظهائر العادية وتحويلها من الجهاز التناسلي للأنثى. لوحة الماوس الدهون تسمح زرع أجزاء الأنسجة كبيرة، يمكن الوصول إليها بسهولة لإجراء عملية جراحية والتصوير، وتوفر البيئة المحلية الأكثر ملاءمة لأنسجة من أصل مولر.

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

الهدف العام من مقايسة زراعة الوسادة الدهنية المبيضيّة هذه هو تسهيل دراسة الظهاريات الطبيعية والتحولية في الجهاز التناسلي الأنثوي ضمن البيئة الأصلية الأكثر ملاءمة. ويمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة جوهرية في هذا المجال، مثل القدرة التمايزية والتجديدية والورمية لمجموعات خلوية محددة في الجهاز التناسلي الأنثوي. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في أن الوسادة الدهنية المبيضيّة للفأر تسمح بزراعة الخلايا وقطع كبيرة من الأنسجة.يتميز هذا الموقع بسهولة الوصول إليه لإجراء الجراحات والتصوير. وغالبًا ما تُستخدم التجويف البريتوني والجراب المبيضي كمواقع للزراعة الموضعية للخلايا الظهارية للجهاز التناسلي الأنثوي. وتتسم هذه الطرق بعدد من القيود.بعد القتل الرحيم للفئران من سلالة beta-actin EGFP أو beta-actin DS red وفقاً للبروتوكول المذكور، ضع كل فأر على قطعة قماش ممتصة بحيث يكون الجانب البطني للأعلى. افتح الجلد عن طريق إجراء شق جانبي في خط المنتصف، ثم اسحب الجلد فوق وتحت الشق باتجاه رأس وذيل الفأر باستخدام أطراف الأصابع. وباستخدام ملقط غير مسنن، أمسك الصفاق واستخدم مقصاً دقيقاً لفتح تجويف الجسم.بعد ذلك، ادفع لفائف الأمعاء برفق جانباً وحدد موقع الأعضاء التناسلية. وباستخدام ملقط دقيق، ارفع أحد قرني الرحم واقطع على مسافة 0.5 سنتيمتر فوق النقطة التي ينفصل عندها قرنا الرحم. ثم، وأثناء الإمساك بقرن الرحم، قم بتشريح وإزالة الأنسجة الضامة المرتبطة بقرن الرحم، وقناة الرحم، والمبيض، والوسادة الدهنية المبيضية.ضع المسلك التناسلي المُشرّح في طبق يحتوي على ستة ملليلتر من PBS المعقم، ثم انتقل إلى المسلك التناسلي الثاني قبل البدء في استزراع خلايا الظهارة الأنبوبية الأولية، أو خلايا TE، وفقاً للبروتوكول المكتوب. بعد تشريح قنوات الرحم الفردية من قرون الرحم لفئران beta-actin DS red العذراء التي تتراوح أعمارها بين ستة إلى ثمانية أسابيع في PBS وفقاً للبروتوكول المكتوب، قم بنقل قنوات الرحم المنفردة تحت مجهر تشريحي إلى قطرة PBS بحجم 200 ميكرولتر. وباستخدام الملاقط وإبر عيار 28، قم بفك التفاف قنوات الرحم برفق عن طريق إزالة الميسوسالبينكس (المسراق)، وهو جزء من الرباط العريض الذي يدعم أجزاء قناة الرحم.ضع أنابيب الرحم الفردية، منزوعة الالتفاف جزئيًا، في قطرة حجمها 200 µL من محلول PBS المبرد بالثلج حتى يتم كشف وسادة الدهون المبيضية للمستقبل وتجهيزها لاستقبال الطعم. انقل الحيوان إلى كابينة السلامة الحيوية لإجراء عملية نقل وسادة الدهون. بعد تخدير فأر متماثل جينيًا وفقًا للبروتوكول النصي، استخدم مقصات حلاقة رقم 40 لحلاقة منطقة تعادل ضعف حجم المنطقة الجراحية.استخدم بوفيدون أيودين، يليه إيثانول 70%، لإجراء عملية تعقيم جراحي ثلاث مرات. بعد ذلك، انقل الحيوان تحت مجهر تشريحي. ثم، وباستخدام مشرط، قم بعمل شق في الموضع الظهري الإنسي مباشرة فوق الوسادة الدهنية للمبيض وكشف القناة التناسلية.بعد ذلك، قم بتغطية المنطقة بغطاء معقم. تالياً، وباستخدام ملقط دقيق غير حاد، اسحب وسادة الدهون المبيضية بعناية عبر الشق باتجاه الخط الناصف، مع تقليل الضرر الذي قد يلحق بالأعصاب والأوعية الدموية الرئيسية. ولمنع تأخر نمو الطعوم، يجب أن يكون شق وسادة الدهون دقيقاً قدر الإمكان، لأن تمزق وسادة الدهون أو ثقبها بالكامل يؤدي إلى حدوث نزيف.يجب استخدام المواد المجلطة لوقف النزيف حسب الضرورة. استخدم إبرة مشطوفة قياس 28.gauge لإجراء شق بعمق 2 إلى 4 مليمتر في الوسادة الدهنية للمبيض على ارتفاع 3 إلى 4 مليمتر فوق المبيض، مع التأكد من أن الإبرة تخترق حوالي نصف سمك الوسادة الدهنية فقط. وفي حالات زراعة الخلايا، املأ محقنة بإبرة قياس 30.gauge بكمية 10 إلى 20 µL من خليط المصفوفة الغشائية القاعدية للخلايا واحقمها في شق الوسادة الدهنية.لإجراء عملية نقل قناة الرحم، استخدم ملقطاً دقيقاً لالتقاط قناة الرحم ووضعها في 10 إلى 20 µL من مصفوفة الغشاء القاعدي المحفوظة على الثلج. بعد ذلك، وباستخدام رأس ترشيح مدرج XL بسعة 0.1 إلى 10 إلى 20 µL، اسحب النسيج مع معلق مصفوفة الغشاء القاعدي وأفرغهما في شق الوسادة الدهنية. انتظر لمدة خمس دقائق حتى تتصلب مصفوفة الغشاء القاعدي، ثم أعد الجهاز التناسلي إلى التجويف البريتوني.باستخدام غرزتين من الخيوط الجراحية، أغلق العضلات، واستخدم مشابك جروح صغيرة أو خيوط جراحية لإغلاق الجلد. بعد عملية الزرع، اترك الحيوان ليتعافى وفقاً للبروتوكول المذكور. لجمع الطعوم وحفظها، قم بتحضير محلول بارافورمالدهيد (paraformaldehyde) بتركيز 4%، أو PFA، عن طريق خلط 26 milliliters من الماء المقطر مرتين مع 4 milliliters من 10X PBS و 10 milliliters من محلول 16%PFA.بعد تشريح وسادة الدهون المبيضيّة المطعّمة، والمبيض، وقناة الرحم، والرحم في كتلة واحدة، ضع الأنسجة فوراً في 2 mL من 4%PFA وثبتها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. ومن الحيوان نفسه، قم بتثبيت ومعالجة وسادة الدهون المبيضيّة المقابلة غير المطعّمة كعينة تحكم بطريقة مماثلة. بعد التثبيت، اغسل الأنسجة بمحلول PBS ثلاث مرات لمدة خمس دقائق في كل مرة، ثم حضنها في محلول PBS عند درجة حرارة 4 °C طوال الليل.قم بإجراء التصوير الكامل والعلم النسيجي وفقاً للبروتوكول المكتوب. في هذه التجربة، تم نقل أنبوب رحم من فأر beta-actin DS red وزراعته في وسادة الدهون المبيضية كما هو موضح في هذه الصورة الفلورية. تظهر هنا نموات من الخلايا الظهارية الأنبوبية الأولية للفأر من فئران beta-actin EGFP وفئران beta-actin DS red بعد ثمانية أيام من الزرع في فأر متماثل جينياً.تظهر هذه الصورة عمليات تطعيم لخلايا HI0118 المختلطة والموسومة إما بـ Lenti-eGFP أو Lenti-mCherry بعد 10 أيام من الزرع في فأر NSG. وفي هذه اللوحات، تشير الأسهم إلى طعم عمره 43 يوماً ناتج عن زرع خلايا HI0118 المختلطة في فأر SCID. وتظهر هذه الصورة الفلورية قناة رحم كاملة من فأر beta-actin DS red بعد ستة أيام من الزرع في الوسادة الدهنية المبيضية.يظهر في هذا اللوح مقطع مجمد من الوسادة الدهنية الفلورية مصبوغ بصبغة معاكسة باستخدام DAPI. وتُظهر طعمة قناة الرحم هذه بعد 40 يوماً من الزرع في فأر مستقبل من نوع NSG حفظاً كاملاً لمكونات قناة الرحم مع عدم وجود تليف أو التهابات. وأخيراً، صُبغت المقاطع للكشف عن واسمات الخلايا الظهارية للقناة Pax8 و FOXJ1، مع استخدام ميثيل الأخضر كصبغة معاكسة لإثبات الحفاظ على الخلايا المهدبة والإفرازية على التوالي.بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون 20 إلى 30 دقيقة إذا تم تطبيقها بشكل صحيح. وأثناء محاولة إجراء هذا الإجراء، من المهم تحضير الصفائح الجراحية والكواشف والأدوات مسبقاً. وعقب هذا الإجراء، يمكن أن تساعد طرق أخرى، مثل التصوير الحي داخل الجسم وحقن الأدوية المضادة للسرطان، في الإجابة على أسئلة إضافية مثل تكوين السرطان وتأثيرات العلاج المضاد للسرطان.تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات بيولوجيا التكاثر وسرطان المبيض لاستكشاف الوظائف الطبيعية للخلايا الجذعية وتطور السرطان في أنسجة الجهاز التناسلي الأنثوي. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكتسب فهماً جيداً لكيفية عزل الخلايا وأنسجة قناة الرحم ومن ثم زرعها في الوسادة الدهنية. لا تنسَ أن العمل مع الحيوانات في ظروف معقمة أثناء الجراحة الحية أمر بالغ الأهمية لضمان تحقيق نتيجة ناجحة.يؤدي توفير وسادة تدفئة للحفاظ على دفء القوارض إلى تحسين معدل البقاء على قيد الحياة بشكل كبير.

transplantation-into-the-mouse-ovarian-fat-pad

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

النماذج الحيوانية مثلي من تكرار الاصابة بسرطان المبيض أفضل الأمراض التي تصيب البشر ، وبالتالي تعزيز فهمنا لتطور السرطان واستجابة الورم للعلاج. نموذج الفأر حقنة من intrabursal luciferase ، معربا عن الخلايا السرطانية في المبيض. إدارة العلاج خلال أنبوب تغذية عن طريق الفم. ويتم رصد نمو الورم عن...

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

نموذج مثلي من سرطان المبيض في الفئران مصلي مناعيا ل في الجسم الحي التصوير الورم ورصد الاستجابات المناعية ورم

في هذا الفيديو ، نوضح فحصا لزرع الخلايا التجريبية وشظايا الأنسجة في وسادة دهون مبيض الفأر. يمكن استخدام هذه الطريقة لمراقبة تجديد الخلايا وتحويل الورم عبر تقنيات غير جراحية.

فحص زرع وسادة دهون المبيض: تقنية In Vivo لإدخال الخلايا في وسادة دهون المبيض في نماذج الفئران

يصف هذا الفيديو بروتوكول إنشاء نموذج تجريبي للفئران لدراسة تطور الورم والورم الخبيث البريتوني. يتم إنشاء نموذج سرطان المبيض هذا عن طريق التلقيح التقويمي لخلايا سرطان المبيض الظهارية البشرية في مبيض أنثى الفأر.

التلقيح التقويمي لخلايا سرطان المبيض في مبيض الفئران: إجراء لإنشاء نموذج فأر سرطان المبيض لدراسة الانتشار البريتوني للخلايا

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لحصاد المبيض السليم من نموذج الفأر.

حصاد المبيض السليم من الفأر: إجراء جراحي لعزل المبيض الكامل من نموذج الفئران

الموصوفة هنا أورثوتوبيك بروتوكولات زرع المبيض لتعديل تأثير المبيض على فسيولوجيا الماوس المتلقية. هذه العملية الجراحية يتم استخدامه لفضح الفئران الإناث إلى أنواع مختلفة من التأثير المبيض وقد تشمل عمليات الزرع هيتيروتشرونيك وزرع المبايض التي خضعت للعلاجات المختلفة السابقين فيفو .

أورثوتوبيك زرع المبيض إجراءات للتحقيق في تأثير الشيخوخة المبيض في الفئران الإناث مدى الحياة والصحة

لبعض المرضى، الخيار الوحيد للحفاظ على خصوبة تجميد أنسجة المبيض. ولسوء الحظ، تأخر عودة التوعي يقوض سلامة الحبيبي. نقدم هنا، بروتوكولا للمشترك وزراعة أنسجة المبيض البشرية مع خلايا بطانية لنضح استخدامها كاستراتيجية تستند إلى خلية الجمع بين تسارع بتسليم paracrine مباشرة من الجزيئات النشطة بيولوجيا.

زرع أنسجة المبيض البشرية مع خلايا بطانية هندسيا المشارك: التعجيل الجمع بين استراتيجية تستند إلى خلية التروية مع التسليم المباشر باراكريني

هنا ، نقدم طريقة لإجراء حقن المنوية المستديرة (ROSI) في الفئران ، وهي تقنية ذات تطبيقات سريرية واعدة وفائدة للتحقيق في الآليات الكامنة وراء التطور الجنيني.

حقن الفأر المستدير Spermatid

يوضح هذا البروتوكول بالتفصيل تطوير نماذج الفئران المصلية عالية الجودة لسرطان المبيض المصلي (HGSOC) في المختبر وفي الجسم الحي. من اشتقاق عضيات قناة فالوب الفئران ، وتعديلها الجيني لتلخيص علم الوراثة البشرية HGSOC ، وإدخالها في الجراب المبيضي للفئران المتجانسة لتطور الأورام في الجسم الحي .

تطوير الخطوط العضوية المشتقة من الفئران من الخلايا الظهارية لقناة فالوب لنمذجة سرطان المبيض المصلي عالي الجودة

الدهون تطلع سادة هو المفضل ، نهج التكلفة مينيملي ، ومنخفضة بالمقارنة مع الطرق الأخرى للكشف عن اميلويد لتشخيص الداء النشواني النظامية. هذه المقالة الفيديو يوضح الخطوط العريضة لتنفيذ الإجرائية الدهون تطلع سادة مع معالجة مناسبة من العينة لنتائج التشخيص الأمثل.

الأداء ومعالجة FNA من الدهون الأمامية لوحة اميلويد

تعلم تقنية زرع وسادة الدهون المبيضية في الفئران لدراسة الأنسجة الظهارية الطبيعية والمحولة في الجهاز التناسلي الأنثوي. تتيح هذه الطريقة للباحثين استكشاف إمكانات التمايز والتجدد والتكاثر الورمي للخلايا.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

استكشف المزيد من الفيديوهات