الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تحليل وظيفة الكلى المعزولة في كلية الفأر خارج الجسم الحي. باستثناء تأثير ضغط الدم أو الهرمونات أو الجهاز العصبي اللاإرادي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية لعلم الكفر.

إعطاء الدواخل لوظيفة الأعضاء المعزولة والعمل كأداة أنيقة لدراسة إصابة الكلى الحادة. الميزة الرئيسية ل IPK هي أن وظيفة الأعضاء تتم دراستها في حالة عدم وجود تأثيرات جهازية. بعد تحضير الفأر للجراحة ، باستخدام المقص ، قم بإجراء شق البطن المتوسط من قمة العانة إلى القص.

افتح الجلد أولا ، ثم عضلات البطن. بعد ذلك ، قم بإزالة الأمعاء ووضعها على الجانب الأيسر من الفأر ، بشكل جانبي من البطن. الآن ، حرر المثانة من النسيج الضام وفضح كل من الحالب والإحليل.

لهذه الإجراءات ، ضع جميع الأربطة باستخدام 5-0 خيوط. أول رباط يتم وضعه حول الحالب الأيسر. أغلق هذا بإحكام بعقدة جراحية مزدوجة.

بعد ذلك ، ضع رباط حول مجرى البول باستخدام نفس التقنية. ثم ضع رباط لاسو حول المثانة بأكملها ، لكن اتركه غير مقيد. مع وضع الغرز الثلاث الأولى في مكانها ، استخدم مقص العين لعمل شق بطول ملليمتر واحد في المثانة.

في هذا الشق ، ضع قنية مصنوعة من سنتيمترين من أنابيب PE-50. الآن أغلق الرباط الذي يغلق المثانة ، ويؤمن القنية. مع قنية المثانة ، قم الآن بقطع الحالب الأيسر ومجرى البول البعيد عن الأربطة.

يجب الآن ربط المثانة فقط بالحالب الأيمن ويجب أن تتحرك بحرية. بعد ذلك ، قم بإزالة الأنسجة الضامة والدهون المحيطة بالشريان الأورطي البطني. ثم ضع الأربطة حول نقطة منتصف الشريان الأورطي المكشوف وأسفل الحجاب الحاجز مباشرة بين الشريان المساريقي العلوي والجذع البطني.

حافظ على كل من هذه فضفاضة أيضا. بعد ذلك ، ضع رباط حول الشريان المساريقي العلوي. الآن ، ضع رباط ثالث حول الشريان الأورطي مباشرة أسفل الشريان الكلوي الأيمن وفوق الشريان الكلوي الأيسر.

هذا هو الرباط رقم سبعة. أخيرا ، ضع رباط حول عبوة الوريد الذيلي. الآن ضع مشبكا بين الرباط رقم سبعة وتفرع الشريان الكلوي الأيسر.

بعد ذلك ، قم بعمل شق صغير في الشريان الأورطي ، ذيلية إلى الرباط السابع ، مع الحرص على عدم قطع الجدار الظهري وتمديد الفتحة باستخدام موسع للأوعية. في الفتحة ، أدخل قنية PE-50 مسحوبة بطول سنتيمترين ، وادفع الطرف إلى المشبك. ثم افتح المشبك.

بعد ذلك ، ادفع طرف الإبرة في الجمجمة حتى تصل إلى تقاطع الشريان الكلوي الأيمن والشريان الأورطي. الآن أغلق الرباط السابع ، ثم أغلق الرباط عند منتصف الشريان الأورطي البطني. استمر في فتح الصدر بالمقص عن طريق تشريح الحجاب

ثم ، بقطع واحد ، افصل الشريان الأورطي والوريد الأجوف والقلب والأعصاب الخضرية. الآن ، ابدأ التحكم في ضغط مضخة التروية وحافظ على متوسط الضغط بين 80 و 100 ملم من الزئبق. الآن ، أغلق الأربطة الثلاثة المتبقية غير المربوطة حول عبوة الشريان الأورطي والوريد الذيلي.

باستخدام المقص ، حرر الكلية اليمنى من النسيج الضام المحيط وحررها من الكبسولة الدهنية. اقطع الشريان الأورطي بالقرب من الرباط بين الشريان المساريقي العلوي والجذع البطني. بعد ذلك ، قم بقطع الشريان المساريقي العلوي بعيدا عن الرباط حول الشريان المساريقي العلوي.

الآن ، قم بإزالة حزمة الأوعية الدموية الداعمة للكلى ، مع الحرص على عدم قطع الأوعية الدموية نفسها. بعد ذلك ، قم بقطع الكبد عند الاتصال بالكلى ، لكن اترك جزءا صغيرا من الكبد متصلا به ، بحيث يظل الوريد الأجوف مفتوحا بسببه. الخطوة التالية هي إزالة حزمة الكلى من الماوس.

الآن ، اترك الكلية في الغرفة وقم بإزالة الفأر. عند الاتصال بين الكبد والكلى ، ضع رباط لاسو. ثم قم بتقشير الوريد الأجوف بخط وريدي وأغلق رباط اللاسو.

يجب أن تجلس الكلية الآن بثبات في الصندوق. يجب أن يبدأ التدفق الوريدي عبر الخط الوريدي على الفور. سيبدأ تدفق البول بعد حوالي ثلاث دقائق.

يجب أن يبدأ التمعج في الحالب على الفور ويظل مستقرا لمدة ساعة واحدة على الأقل. أغلق الصندوق. اكتمل التحضير الآن ويجب أن يظل قابلا للتطبيق لمدة ساعة على الأقل.

بعد استخدام الطريقة الموصوفة على C57 Black 6 الفئران ، تم اختبار صلاحية الأنسجة لأربع كلى بعد ساعة من التروية المستمرة. تم الحفاظ على الضغط عند 100 ملم مستمر من الزئبق. ظل تدفق الانحيم ومقاومة الأوعية الدموية ثابتا في جميع الكلى الأربع.

تم تقييم معدل الترشيح الكبيبي باستخدام إزالة الأنسولين FITC التي تهدف إلى الزيادة بمرور الوقت ولكن ليس بشكل كبير. تم تقييم الإفراز الجزئي للصوديوم والبوتاسيوم بعد 55 دقيقة من التروية. زادت هذه المعلمات مقارنة بالوضع في الجسم الحي.

بعد 55 دقيقة ، لم ترتفع مولالية المبولة فوق الأسمولية للتدفق الوريدي. ثم تم إصلاح الكلى وتقييم البنية التحتية باستخدام TEM. ظهرت الكبيبات في أجزاء S1 من الأنابيب القريبة دون تغيير إلى حد كبير.

أظهرت بعض ، وليس كل أجزاء S2 ، S3 من الأنابيب القريبة في الأطراف الصاعدة السميكة التي لم تكن قريبة من حزم الأوعية الدموية علامات تلف الأعضاء. عند الفحص الدقيق ، لم تظهر على الأنابيب الملتوية البعيدة وقنوات التجميع علامات النخر. بشكل عام ، عكست الكلى ما تم الإبلاغ عنه عن الكلى المعزولة للفئران.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق التحليل مثل التصوير أو الحقائق متبوعة بتحليل البروتين أو الحمض النووي الريبي على الأنسجة للحصول على مزيد من الرؤى.