Name: الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: تعلم تقنية الكلية المعزولة المروية في الفئران لدراسة وظائف الكلى خارج الجسم وآليات الإصابة الكلوية الحادة. هذه الطريقة تتيح فهم وظائف الأعضاء المعزولة بدون تأثيرات جهازية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أن يشكروا هانز يواكيم شوريك على النصيحة العلمية التي لا تقدر بثمن. يود المؤلفان أن يشكروا مونيك كاريل وميشيل هايدماير على المساعدة الفنية الممتازة ، وديفيد بنتون ريباس ونور الدين فاريس على القراءة النقدية للمخطوطة وكارستن فاغنر ويورج بيبر للجسم المضاد NaPi-2a. تم دعم هذا العمل من قبل المركز الوطني السويسري للكفاءة في البحث "Kidney.CH" وبمنحة مشروع (310030_143929/1) من المؤسسة الوطنية السويسرية للعلوم.

أجريت جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وصفها في هذه المخطوطة وفقا للقانون السويسري والموافقة عليها من قبل الإدارة البيطرية للكانتون زيورخ، سويسرا. 1. إعداد العازلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حلول 1-4 والحل الهرمون المضاد لإدرار البول (ADH) (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة غسيل الكلى (الجدول 1). ملاحظة: هذا هو عازلة تستخدم المخزن المؤقت لغسيل الكلى خلال نضح. وفي وقت لاحق، سوف تضعف كريات الدم الحمراء في هذا المخزن المؤقت لتشكيل الإرواء النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كرات الدم الحمراء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 250 مل من تركيز كريات الدم الحمراء البشرية (مادة اختبار تم الحصول عليها من بنك الدم المحلي) إلى 500 مل مع العازلة غسيل الكلى. أجهزة الطرد المركزي في 2000 x ج لمدة 8 دقائق. إزالة المنطقة العازلة، والحرص على عدم إزالة أي خلايا الدم الحمراء. تكرار 3X. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد (ألبومين المصل البقري، BSA) الزلال العازلة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 200 مل من dialysiالصورة العازلة، حل 44 غرام من جيش صرب البوسنة باستخدام بقضيب. تصفية حل مع ورقة الترشيح. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإرواء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية كريات الدم الحمراء من الخطوة 1.3.1 من خلال ورق الترشيح في المخزن المؤقت BSA. ملء تصل إلى الحجم الكلي 800 مل مع العازلة غسيل الكلى. ملاحظة: هذا هو الإرواء النهائي. يجب أن يكون الهيماتوكريت الآن بين 8 و 12٪. سائل الإرواء يمكن تخزينها لمدة تصل إلى 12 ساعة عند 4 درجات مئوية. </li></ol></li></ol> 2. المبادرة للغسيل والأوكسجين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على حمام ماء المحيطة الخزان أكبر العازلة، أصغر خزان العازلة، وغرفة رطبة (جلب، غرفة صغيرة مزدوجة الجدران إلى 37 درجة مئوية، و 100٪ الرطوبة عقد في وقت لاحق الكلى) إلى 37 درجة مئوية (الشكل 2) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء خزان مؤقت أكبر مع العازلة غسيل الكلى وخزان أصغر مع الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 5٪ CO 2/95٪ O 2 تدفق الغاز إلى المخزن المؤقت لغسيل الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على غسيل الكلى المستمر للسائل الإرواء ضد المخزن المؤقت لغسيل الكلى. احرص على استخدام أنابيب غسيل الكلى المنخفضة للتدفق. انتقل إلى الخطوة 3. </li></ol><img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig2.jpg" /> الشكل 2: رسم تخطيطي للحلبة الإرواء. يظهر مخطط المكونات الرئيسية لدائرة نضح واتجاه تدفق العازلة. وتحفظ كل مكونات محاطة الأزرق الداكن عند 37 درجة مئوية مع حمام ماء / الحرارة. 1: فقاعات غسيل الكلى عازلة لا يقل عن 3 أضعاف حجم المخزن المؤقت نضح مستمر مع 95٪ O 2/5٪ CO 2. 2: يتم مدال غسيل الكلى العازلة والعازلة نضح باستمرار ضد بعضها البعض في أنبوب غسيل الكلى عن طريق مضخة الأسطوانة. 3: ونتيجة لهذا غسيل الكلى، وإثراء المخزن المؤقت نضح مع 9٪ O يتم الاحتفاظ 05/02٪ CO 2 والكهارل مستويات througho المستمرالتحرير الارواء. 4: مضخة بكرة يفجر المنطقة العازلة نضح نحو الكلى. 5: windkessel يزيل موجات تحوي وبمثابة فخ فقاعة. 6: الضغط على (متصلة إلى 4. (مضخة بكرة) للحفاظ على الضغط المستمر مع السماح للتدفق بالتناوب بحرية). 7: طوال التروية، يبقى الكلى في غرفة رطبة للرطوبة الهواء 100٪ و 37 درجة مئوية درجة حرارة الكلى. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 3. الجراحي إجراء الجزء 1 (رسم تخطيطي لجميع الأربطة، انظر الشكل 3) ملاحظة: إجراء جميع الحروف المركبة باستخدام 5-0 موضوع الجراحي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس عن طريق الحقن داخل الصفاق (10 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم، و 20 ملغ / مل الكيتامين و 1 ملغ / مل زيلازين يذوب في 0.9٪ كلوريد الصوديوم). تأكيد عمق كاف من anesthتقييم الأثر البيئي من خلال اختبار لغياب ردود الفعل الخلفي القدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الماوس في موقف ضعيف في غرفة رطبة. حماية العينين مع مرهم التعليم والتدريب المهني. وضع حقنة 1 مل تحت العمود الفقري لرفع السفن قطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية فتح البطن وسيطة من قمة العانة لافتتاح القص أولا الجلد، ثم عضلات البطن، مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأمعاء ووضعه على الجانب الأيسر من جانبي الماوس من البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير المثانة من النسيج الضام، واستكشاف كل من الحالب ومجرى البول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الحالب الأيسر (ضمد الأول). أغلقه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول مجرى البول (ضمد الثاني). أغلقه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع &quot;اسو&quot; رباط حول المثانة كاملة (ضمد الثالث). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق المثانة 1 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية فتح مع 2 سم PE 50 الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الثالث حول الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الحالب الأيسر والقاصي مجرى البول من الأربطة. هؤلاء الاشخاصالآن تعلق دير إلى الحالب الأيمن فقط وتتحرك بحرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الشريان الأورطي البطني من النسيج الضام والدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البطن ضمد منتصف الشريان الأورطي (IV رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الشريان الأبهر أسفل الحجاب الحاجز بين الشريان المساريقي العلوي والجذع الاضطرابات الهضمية (V رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول الشريان المساريقي العلوي (السادس رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط الأبهر دون الحق مباشرة وفوق الشريان الكلوي الأيسر (رباط السابع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رباط حول حزمة الذيلية الوريد (الوريد) (الثامن رباط). انتقل إلى الخطوة 4. </li></ol><img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig3.jpg" /> الشكل 3: رسم تخطيطي للالحروف المركبة وضعها خلال جراحة. عرض من البطن مفتوحة بعد فتح البطن. تم نقل الأمعاء إلى اليسار. L و R يشير إلى الكلى اليسار واليمين. التظهر خطوط سوداء مجال ربطة منها. توضع الأربطة أولا ثم أغلقت، في تسلسل معين في النص. يصادف العاشر موقع شق لإقناء؛ إدخال القنية الشريان الأورطي. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 4. الاشعال من حلبة الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تشغيل المضخة الدوارة وملء الأنبوب مع الإرواء. الحرص على تفريغ جميع فقاعات الهواء منه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل الجهاز windkessel إلى حوالي منتصف مستوى مع الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة محول الضغط على 0 ملم زئبق عندما يتم تعبئة جميع الأنابيب وتدفق هو 0. الحفاظ على إبرة نضح على مستوى الكلى خلال هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إبقاء تدفق على مستوى الحد الأدنى ثابت (0.6 مل / دقيقة) وانتقل إلى الخطوة 5. </li></ol> 5. الجراحي إجراء الجزء 2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المشبك بين ضمد الرابع والمتفرعة من رينا اليسارل الشريان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في الذيلية الأبهر من ضمد الرابع، مع الحرص على عدم قطع الجدار الظهري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمدد فتح في الشريان الأورطي مع الموسع السفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الشريان الأورطي مع إبرة (2 سم، وسحبت PE 50)، ودفع الطرف فقط إلى المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع غيض من cranially الإبرة حتى يصل تقاطع الصحيح الشريان الكلوي والشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد السابع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الرابع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الصدر مع مقص من قبل تشريح الحجاب الحاجز. مع خفض واحد، فصل الشريان الأبهر، الوريد الأجوف والقلب والأعصاب الخضري. مع هذه الخطوة، هو التضحية الحيوانية عن طريق استنزاف السريع تحت التخدير العميق المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء السيطرة على ضغط مضخة نضح. الحفاظ على الضغط المتوسط ​​بين 80 و 100 مم زئبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار خامسا رباط </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد السادس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد الثامن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحرة الكلية اليمنى من TISSU الضامه وتضمينها في داخل كبسولة الدهنية مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان الأورطي قريب إلى ضمد V. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان المساريقي العلوي إلى أقصى حد لضمد السادس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حزمة السفينة الداعمة الكلى بها، مع الحرص على عدم قطع في الأوعية أنفسهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الكبد في اتصال الكلى. رعاية لتحرير الكلى، ولكن ترك جزء صغير من تمسكا الكبد لذلك، بحيث يتم الحفاظ على الوريد الأجوف مفتوحة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ حزمة الكلى من الماوس. إزالة الماوس من غرفة رطبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع &quot;اسو&quot; رباط حول ربط الكبد والكلى (التاسع رباط). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الوريد الأجوف مع خط وريدي (2 سم PE 50). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انهيار ضمد التاسع. تدفق الوريدي من خلال خط وريدي يجب أن تبدأ على الفور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق غرفة رطبة. </li></ol> 6. تحليل المصب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال ساعة التالية، تراقب باستمرار تدفق الدم وintravasculضغط ع 15. جمع تدفق الوريدي، والتي يمكن استخدامها لتحليل، على سبيل المثال، الكلوي الإفراج الرينين 7. جمع البول لتحليل تركيز بالكهرباء والكبيبي معدل الترشيح 14. بعد 1 ساعة من نضح والكلى يمكن المفاجئة المجمدة لالنشاف الغربية أو أن تكون ثابتة للتصوير النهج 16. </li></ol>

<ol><li>Carrel, A., Lindbergh, C. A. The culture of whole organs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarrel%2C+A+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22">Science (New York, N.Y.)</a>. 81 (2112), 621-623 (1935).</li>
<li>Skutul, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkutul%2C+K+%22%C3%9Cber+Durchstr%C3%B6mungsapparate+Pfl%C3%BCger%27s+Archiv%22">Über Durchströmungsapparate Pflüger's Archiv</a>. 123 (4-6), 249-273 (1908).</li>
<li>Nizet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+kidney%3A+possibilities%2C+limitations+and+results%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused kidney: possibilities, limitations and results.</a> Kidney Int. 7 (1), 1-11 (1975).</li>
<li>Weiss, C., Passow, H., Rothstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoregulation+of+flow+in+isolated+rat+kidney+in+the+absence+of+red+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Autoregulation of flow in isolated rat kidney in the absence of red cells.</a> Am J Physiol. 196 (5), 1115-1118 (1959).</li>
<li>Schurek, H. J., Kriz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+and+functional+evidence+for+oxygen+deficiency+in+the+isolated+perfused+rat+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Morphologic and functional evidence for oxygen deficiency in the isolated perfused rat kidney.</a> Lab Invest. 53 (2), 145-155 (1985).</li>
<li>Stolte, H., Schurek, H. J., Alt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+albumin+filtration%3A+a+comparison+of+micropuncture+studies+in+the+isolated+perfused+rat+kidney+with+in+vivo+experimental+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular albumin filtration: a comparison of micropuncture studies in the isolated perfused rat kidney with in vivo experimental conditions.</a> Kidney Int. 16 (3), 377-384 (1979).</li>
<li>Schweda, F., Wagner, C., Krämer, B. K., Schnermann, J., Kurtz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserved+macula+densa-dependent+renin+secretion+in+A1+adenosine+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22AJP+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Preserved macula densa-dependent renin secretion in A1 adenosine receptor knockout mice.</a> AJP Renal Physiol. 284 (4), F770-F777 (2003).</li>
<li>Moers, C., Smits, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+perfusion+or+cold+storage+in+deceased-donor+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Machine perfusion or cold storage in deceased-donor kidney transplantation.</a> N Engl J Med. 360 (1), 7-19 (2009).</li>
<li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion%3A+the+first+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li>
<li>Worner, M., Poore, S., Tilkorn, D., Lokmic, Z., Penington, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low-cost%2C+small+volume+circuit+for+autologous+blood+normothermic+perfusion+of+rabbit+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Art+Org%22%5BJournal%5D)">A low-cost, small volume circuit for autologous blood normothermic perfusion of rabbit organs.</a> Art Org. 38 (4), 352-361 (2014).</li>
<li>Kaths, J. M., Spetzler, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normothermic+Ex+Vivo+Kidney+Perfusion+for+the+Preservation+of+Kidney+Grafts+prior+to+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation.</a> J Vis Exp. (101), e52909(2015).</li>
<li>Song, J. J., Guyette, J. P., Gilpin, S. E., Gonzalez, G., Vacanti, J. P., Ott, H. C. Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSong%2C+JJ+%22Nature+Med%22">Nature Med</a>. 19 (5), 646-651 (2013).</li>
<li>Hall, A. M., Crawford, C., Unwin, R. J., Duchen, M. R., Peppiatt-Wildman, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+imaging+of+the+functioning+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22JASN%22%5BJournal%5D)">Multiphoton imaging of the functioning kidney.</a> JASN. 22 (7), 1297-1304 (2011).</li>
<li>Lindell, S. L., Williams, N., Brusilovsky, I., Mangino, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+IPK%3A+A+Powerful+Tool+to+Partially+Characterize+Renal+Reperfusion+and+Preservation+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Transplant+J%22%5BJournal%5D)">Mouse IPK: A Powerful Tool to Partially Characterize Renal Reperfusion and Preservation Injury.</a> Open Transplant J. 5, 15-22 (2011).</li>
<li>Wagner, C., De Wit, C., Kurtz, L., Grünberger, C., Kurtz, A., Schweda, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin40+is+essential+for+the+pressure+control+of+renin+synthesis+and+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Connexin40 is essential for the pressure control of renin synthesis and secretion.</a> Circ Res. 100 (4), 556-563 (2007).</li>
<li>Czogalla, J., Vohra, T., Penton, D., Kirschmann, M., Craigie, E., Loffing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mineralocorticoid+receptor+%28MR%29+regulates+ENaC+but+not+NCC+in+mice+with+random+MR+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Pfl%C3%BCger%27s+Archiv%22%5BJournal%5D)">The mineralocorticoid receptor (MR) regulates ENaC but not NCC in mice with random MR deletion.</a> Pflüger's Archiv. , (2016).</li>
<li>Poosti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision-cut+kidney+slices+%28PCKS%29+to+study+development+of+renal+fibrosis+and+efficacy+of+drug+targeting+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Precision-cut kidney slices (PCKS) to study development of renal fibrosis and efficacy of drug targeting ex vivo.</a> Dis Model Mech. 8 (10), 1227-1236 (2015).</li>
<li>Rahgozar, M., Guan, Z., Matthias, A., Gobé, G. C., Endre, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+facilitates+autoregulation+in+the+perfused+mouse+kidney%3A+An+optimized+in+vitro+model+for+assessment+of+renal+vascular+and+tubular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II facilitates autoregulation in the perfused mouse kidney: An optimized in vitro model for assessment of renal vascular and tubular function.</a> Nephrology. 9 (5), 288-296 (2004).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين مصالح مالية متنافسة ولا شيء آخر للإفصاح عنه.

الماوس معزولة الكلى perfused هو أداة لدراسة وظائف الكلى في بيئة تسيطر عليها خارج الجسم لمدة 1 ساعة، سد الفجوة بين التجارب المجراة على الحيوانات سليمة، والتي قد تكون معيبة بسبب تأثير العوامل النظامية عديدة، وفي التجارب المختبرية في شرائح كليون معزولة أو الخلايا المستزرعة، التي تهمل بالضرورة تأثير هيكل الجهاز سليمة على وظيفة. هناك، على حد علم الكتاب &quot;، أي تقنية بديلة التي لأداء هذه المهمة المحددة. الدراسات البيوكيميائية على أنسجة الكلى، ومع ذ...

وقد نضح معزولة من الأجهزة موضوع جهد مستمر بين فسيولوجي لعقود عديدة 1. هذه التقنية تتيح وظيفة الجهاز، دون التأثيرات الجهازية مثل ارتفاع ضغط الدم، والهرمونات، أو الأعصاب، لدراستها. يعتبر كارل إدوارد Loebell أن يكون أول من وصف نضح الناجح لالكلى معزولة، في عام 1849 2. ومنذ ذلك الحين، شهدت جهاز نضح صقل كبير. قدم فراي وغروبر رئة اصطناعية لالأوكسجين ونابض مضخات نضح المستمر 2. في حين الباحثين في وقت مبكر درس أساسا الكلى من الثدييات وهي كبيرة والخنازير والكلاب 2 3 -The التقرير الأول للاستخدام الكلى الفئران، التي فايس وآخرون. ، كان علامة فارقة في دراسة صغيرة الثدييات جهاز نضح (4). Schurek وآخرون. ذكرت ضرورة إضافة الكريات الحمراء الثدييات إلى الإرواء إذا أنبوبي كلوي كافيةكان الأوكسجين إلى أن يتحقق 5. حاسمة لتجارب طويلة الأمد كانت مقدمة من غسيل الكلى المستمر من المخزن المؤقت من قبل نفس المجموعة البحثية 6. في عام 2003، Schweda وآخرون. كانوا أول من الإبلاغ عن الكلى الماوس وظيفية معزولة perfused (MIPK) 7، والمكرر في وقت لاحق من قبل Rahgozar وآخرون. 18 ويندل وآخرون. 14. بينما من الناحية الفنية أكثر تحديا من الفئران المعزولة الكلى perfused، واستخدام MIPK يحمل ميزة تمكن من استخدام مجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا. تعرض هذه الورقة على تفاصيل طريقة المؤلفين من أجل perfusing الكلى الماوس معزولة لمدة 1 ساعة. يسمح أسلوب التقييم المستمر لمعدل الكلوي تدفق، ومقاومة الأوعية الدموية، والإفراج عن هرمون، تحليل غازات الدم وتحليل البول، وتطبيق المخدرات. وبعد هذا الإجراء، يمكن معالجتها الكلى للتحليل الجزيئي والكيمياء الحيوية، وتكون ثابتة للفحص المجهري، أوزرعه في الماوس المتلقي (الشكل 1). <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54712/54712fig1.jpg" /> الشكل 1: نظرة عامة على احتمال الإدخال / الإخراج إلى الكلى Perfused المعزولة. بغا: تحليل الدم الغاز. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54712/54712fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> هذه التقنية من المرجح أن تلقي اهتماما متزايدا في السنوات القادمة، كما يتم مناقشة العديد من التطبيقات المبتكرة مع فجر لفترات طويلة نضح الكلى سوي الحرارة قبل الزرع (مع أو من دون تطبيق المضادة للرفض أو عقاقير تحرير الجينوم) 8، 9، 10 ، 11، والهندسة الحيوية الكلى كلها من السقالات decellularized 12، وتطبيق جرعات عالية من الأصباغ الفلورية لmultiphoton التصوير 13 </sup&gt;. بل هو أيضا نموذج مثالي مع الذي لدراسة دور الجينات المحددة خلال قصور كلوي حاد 14. ويرد بروتوكول خطوة بخطوة للسماح غيرها من المختبرات لأداء معزولة الماوس نضح الكلى بنجاح. أولا، يتم تحديد تكوين وإعداد المخزن المؤقت. ثم، يتم وصف عملية جراحية في التفاصيل وتعرض الخطوات الحاسمة. ويرد الثالث، البيانات التي تمثل من الإعداد الناجح: تدفق الدم الكلوي، ومقاومة الأوعية الدموية، معدل الترشيح الكبيبي، والكهارل كسور إفراز للجميع القياسات وظيفية من الميكروسكوب الجدوى والإلكترون انتقال مورفولوجية قطاعات كليون مختلفة من الكلى perfused ثابت بعد 1 ساعة من نضح.

<table><tbody><tr><td><قوية> دائرة التروية: < / قوية></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>غرفة رطبة 834/8</td><td>جهاز هارفارد / هوغو ساكس Elektronik GmbH</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Cannular مع سلة ومنفذ جانبي</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-2947</td><td></td></tr><tr><td>Thermostat TC120-ST5 &nbsp ؛</td><td>هارفارد للأجهزة / هوغو ساكس Elektronik GmbH</td><td>73-4544</td><td></td></tr><tr><td>ISM 827 / 230V مضخة أسطوانية Reglo Analogue</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-0114</td><td></td></tr><tr><td>خزان مغلف لحل العازلة 1 لتر</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3438</td><td></td></tr><tr><td>خزان مغلف لحل العازلة 0.5 لتر</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3436</td><td></td></tr><tr><td>محول الضغط APT300 &nbsp ؛</td><td>هارفارد للأجهزة / هوغو ساكس إلكترونيك جي إم بي إتش</td><td>73-3862</td><td></td></tr><tr><td>TAM-D محول الطاقة</td><td>هارفارد للأجهزة / هوغو ساكس إلكترونيك جي إم بي إتش</td><td>73-1793</td><td></td></tr><tr><td>SCP Plugsys وحدة تحكم مؤازرة</td><td>هارفارد جهاز / هوغو ساكس إلكترونيك جي إم بي إتش</td><td>73-2806</td><td></td></tr><tr><td>Windkessel &nbsp ؛</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3717</td><td></td></tr><tr><td>HSE-USB الحصول على البيانات</td><td>Harvard Apparatus / Hugo Sachs Elektronik GmbH</td><td>73-3330</td><td></td></tr><tr><td>Low-Flux Diacap Polysulfone</td><td>B.Braun</td><td>7203525</td><td></td></tr><tr><td>PE-Tubing لقنية الشريان الأورطي 1.19 مم معرف × 1.70 مم OD</td>شركة <td>السلع العلمية</td><td>BB31695-PE / 8</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td> Catalog Number</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>> Buffers recodes: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>aminoplasmal 10٪</td> <td>B.Braun</td><td>134518064</td><td></td></tr><tr><td>بيروفات الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>P2256-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-حمض الجلوتاميك هيدرات الملح أحادي الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>G1626-100G</td><td></td></tr><tr><td>L- (-) - حمض الماليك ملح الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>M1125-25G</td><td></td></tr><tr><td>صوديوم - إل لاكتات</td><td>سيجما - ألدريتش</td><td>L7022-10G</td><td></td></tr><tr><td>ملح الصوديوم ألفا كيتوجلوتاريك حمض الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>K1875-25G</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-5KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>60130-1KG</td><td></td></tr><tr><td>اليوريا</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>U5378-500G</td><td></td></tr><tr><td>الكرياتينين</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>C4255-10G</td><td></td></tr><tr><td>أمبيسلين</td><td>روش</td><td>10835242001</td><td></td></tr><tr><td>mgCl2 * 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2393-500G</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 * 6H2O&nbsp;</td><td>ريدل دي ها & euml; ن</td><td>12074</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-500G</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876-500G</td><td></td></tr><tr><td>الهرمون المضاد لإدرار البول dDAVP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V2013-1MG</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filter تستخدم لترشيح كريات الدم</td> الحمراء <td>Macherey-Nagel</td><td>MN 615</td><td></td></tr><tr><td>BGA التحليل:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>ABL 80 فليكس</td><td>مقياس الإشعاع الطبي APS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>المجهر الإلكتروني:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Philips CM100 TEM</td><td>FEI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

الماوس معزولة تقنية الكلى perfused

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

الماوس معزولة الكلى perfused (MIPK) هي تقنية للحفاظ على الكلى الماوس تحت المجراة سابقا الظروف perfused وظيفية لمدة 1 ساعة. وهذا شرط أساسي لدراسة علم وظائف الأعضاء من الجهاز معزولة وللعديد من التطبيقات المبتكرة التي قد يكون من الممكن في المستقبل، بما في ذلك decellularization نضح عن الهندسة الحيوية الكلى أو إدارة مكافحة الرفض أو المخدرات تحرير الجينوم في جرعات عالية لرئيس الكلية للزرع. خلال ذلك الوقت من نضح، والكلى يمكن التلاعب بها، ويمكن تقييم وظائف الكلى، ومختلف المواد الصيدلانية تدار. بعد العملية، والكلى يمكن زرعها أو تجهز لعلم الأحياء الجزيئي، وتحليل الكيمياء الحيوية، أو المجهري. وتصف هذه الورقة الإرواء والتقنية الجراحية اللازمة لنضح خارج الجسم الحي الكلى الماوس. وترد تفاصيل جهاز نضح وقدمت بيانات تظهر الخامسiability من إعداد والكلى: تدفق الدم الكلوي، ومقاومة الأوعية الدموية، والبول بيانات وظيفية، الميكروسكوب الإلكتروني النافذ من شرائح كليون المختلفة وقراءات المورفولوجية، والبقع الغربية من البروتينات نقل شرائح كليون المختلفة وقراءات الجزيئية.

مع طريقة وصفها، يمكن أن الكلى الماوس معزولة لا تزال قابلة للحياة لا يقل عن 1 ساعة. نحن اختبار قابلية الأنسجة بعد 1 ساعة من نضح مستمر مع وظيفية (تدفق الكلوي الدم ومقاومة الأوعية الدموية، وتحليل غازات الدم من التدفق الوريدي، معدل الترشيح الكبيبي، البولية كسور نا + و K + إفراز، والأسمولية البول) والصرفي (الإلكترون انتقال المجهر، تيم) طرق في أربع كلى من wildtype C57BL / 6 الفئران. بالإضافة إلى ذلك، تم إجراء البقع الغربية من البروت...

الماوس معزولة الكلى perfused (MIPK) هي تقنية للحفاظ على الكلى الماوس تحت المجراة سابقا الظروف perfused وظيفية لمدة 1 ساعة. ويرد في مخازن وتقنية جراحية في التفاصيل.

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تحليل وظائف الكلى المعزولة في كلية فأر يتم ترويتها خارج الجسم (ex vivo)، مع استبعاد تأثير ضغط الدم، أو الهرمونات، أو الجهاز العصبي اللاإرادي. ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة جوهرية في علم أمراض الكلى.يوفر هذا الإجراء رؤى حول وظائف الأعضاء المعزولة ويعمل كأداة متميزة لدراسة إصابة الكلى الحادة. وتكمن الميزة الرئيسية لنموذج الكلى المعزولة تروياً (IPK) في إمكانية دراسة وظائف العضو بمعزل عن التأثيرات الجهازية. بعد تحضير الفأر للجراحة، استخدم المقص لإجراء شق بطني متوسط يمتد من العرف العاني وصولاً إلى القص.افتح الجلد أولاً، ثم العضلات البطنية. بعد ذلك، قم بإزالة الأمعاء ووضعها على الجانب الأيسر من الفأر، بشكل جانبي من البطن. الآن، حرر المثانة من النسيج الضام واكشف عن كلا الحالبين والإحليل.بالنسبة لهذه الإجراءات، ضع جميع الرباطات باستخدام خيوط جراحية من قياس 5-0. أول رباط يتم وضعه يكون حول الحالب الأيسر، ثم أحكم إغلاقه جيداً باستخدام عقدة جراحية مزدوجة.بعد ذلك، ضع رباطاً حول الإحليل باستخدام التقنية نفسها. ثم ضع رباطاً حلقياً حول المثانة بأكملها، واتركه دون ربط. ومع تثبيت الغرز الثلاث الأولى في مكانها، استخدم مقصات دقيقة لإجراء شق بطول 1 ملم في المثانة.في هذا الشق، ضع قُنبلة (cannula) مكونة من أنبوب PE-50 بطول سنتيمترين. الآن أغلق الرباط الذي يطوق المثانة، لتثبيت القُنبلة. بعد تثبيت القُنبلة في المثانة، قم الآن بقطع الحالب الأيسر والإحليل في المنطقة البعيدة عن الرباطات.يجب أن تكون المثانة الآن متصلة فقط بالحالب الأيمن وأن تتحرك بحرية. بعد ذلك، قم بإزالة الأنسجة الضامة والدهون المحيطة بالشريان الأورطي البطني. ثم ضع الرباطات حول نقطة المنتصف من الشريان الأورطي المكشوف وأسفل الحجاب الحاجز مباشرةً بين الشريان المساريقي العلوي والجذع الزلاقي.أبقِ كل واحدة من هذه الربطات مرتخية أيضاً. بعد ذلك، ضع رباطاً حول الشريان المساريقي العلوي. الآن، ضع رباطاً ثالثاً حول الأبهر مباشرة أسفل الشريان الكلوي الأيمن وفوق الشريان الكلوي الأيسر.هذه هي الربطة السابعة. أخيرًا، ضع ربطة حول حزمة الوريد الذيلي. الآن ضع مشبكًا بين الربطة السابعة وتفرع الشريان الكلوي الأيسر.بعد ذلك، قم بعمل شق صغير في الأبهر، في الجهة الذيلية للرباط السابع، مع الحرص على عدم قطع الجدار الظهري، ثم قم بتوسيع الفتحة باستخدام موسع أوعية. أدخل في الفتحة كانيولا PE-50 مسحوبة بطول سنتيمترين، مع دفع الطرف ليكون داخل المشبك مباشرة. ثم، افتح المشبك.بعد ذلك، ادفع طرف الإبرة باتجاه القحف حتى تصل إلى نقطة التقاء الشريان الكلوي الأيمن بالشريان الأورطي. الآن قم بربط الرباط السابع، ثم أغلق الرباط عند نقطة المنتصف من الشريان الأورطي البطني. تابع بفتح الصدر باستخدام المقص عن طريق تشريح الحجاب الحاجز.بعد ذلك، وبقطع واحد، افصل الشريان الأبهر، والوريد الأجوف، والقلب، والأعصاب النباتية. الآن، ابدأ في التحكم في ضغط مضخة التروية وحافظ على متوسط الضغط بين 80 و 100 millimeters of mercury. الآن، أغلق الأربطة الثلاثة المتبقية غير المربوطة حول حزمة الشريان الأبهر والوريد الذيلي.باستخدام المقص، قم بتحرير الكلية اليمنى من النسيج الضام المحيط بها وفكها من الكبسولة الدهنية. اقطع الشريان الأبهر من الجهة القريبة بالنسبة للرباط الموجود بين الشريان المساريقي العلوي والجذع الزلاقي. بعد ذلك، اقطع الشريان المساريقي العلوي من الجهة البعيدة بالنسبة للرباط المحيط بالشريان المساريقي العلوي.الآن، قم بإزالة حزمة الأوعية الدموية الداعمة للكلية، مع الحرص على عدم قطع الأوعية نفسها. بعد ذلك، اقطع الكبد عند نقطة اتصاله بالكلية، ولكن اترك جزءاً صغيراً من الكبد متصلاً بها، بحيث تظل الوريد الأجوف مفتوحاً بفضله. الخطوة التالية هي إزالة حزمة الكلية من الفأر.الآن، اترك الكلية في الغرفة وأخرج الفأر. عند نقطة الاتصال بين الكبد والكلية، ضع رباطاً من نوع lasso. بعد ذلك، قم بقسطرة الوريد الأجوف باستخدام خط وريدي ثم أغلق رباط lasso.يجب أن تستقر الكلية الآن بشكل ثابت داخل الصندوق. وينبغي أن يبدأ التدفق الوريدي عبر الخط الوريدي على الفور. أما تدفق البول فسيبدأ بعد ثلاث دقائق تقريباً.يجب أن تبدأ الحركة الدودية للحالب فوراً وتظل مستقرة لمدة ساعة واحدة على الأقل. أغلق الصندوق. لقد اكتمل التحضير الآن، ويجب أن يظل حياً لمدة ساعة واحدة على الأقل.بعد تطبيق الطريقة الموصوفة على فئران C57 black 6، تم اختبار حيوية الأنسجة في أربع كلى بعد ساعة من التروية المستمرة. تم الحفاظ على الضغط عند 100 millimeters of mercury بشكل مستمر. وظل تدفق سائل التروية والمقاومة الوعائية ثابتين في الكلى الأربع جميعها.تم تقييم معدل الترشيح الكبيبي باستخدام تصفية الـ FITC inulin التي كان من المتوقع أن تزداد بمرور الوقت ولكن ليس بشكل ملحوظ. كما تم تقييم الإفراز الجزئي للصوديوم والبوتاسيوم بعد 55 دقيقة من التروية. وقد ازدادت هذه المعايير مقارنة بالحالة في الجسم الحي.بعد مرور 55 دقيقة، لم ترتفع مولالية البول فوق أسمولالية التدفق الوريدي. بعد ذلك، تم تثبيت الكلى وتقييم بنيتها الدقيقة باستخدام TEM. وبدت الكبيبات في قطاعات S1 من الأنابيب القريبة غير متغيرة إلى حد كبير.أظهرت بعض قطع S2 وS3، وليس جميعها، من الأنابيب القريبة في الأطراف الصاعدة السميكة التي لم تكن قريبة من الحزم الوعائية علامات على تلف العضو. وعند الفحص الدقيق، لم تظهر الأنابيب الملتوية القاصية والقنوات الجامعة علامات على النخر. وبشكل عام، عكست الكلى ما تم الإبلاغ عنه في الكلى المعزولة والمروية للجرذان.بعد اتباع هذا الإجراء، يمكن إجراء طرق تحليل مثل التصوير أو تقنية FACS، يتبعها تحليل البروتين أو RNA على النسيج للحصول على رؤى إضافية.

the-mouse-isolated-perfused-kidney-technique

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نموذج دقيق لإصابة الفئران الكلى الحاد (آكي) نتيجة لنقص التروية هو أداة مهمة للتحقيق في إصابة حادة في الكلى وربما تجد الأدوات العلاجية لعلاج اصابة في الكلى. نظام الوزن معلقة يقدم أداة لفورية وموثوقة انسداد الشريان الكلوي وضخه دون التسبب في ازدحام الكلوي.

استخدام نظام تعليق الوزن المعزولة عن انسداد الشريان الكلوي

في هذا الفيديو ، نصف إجراء استخراج الكلى من الفضاء خلف الصفاق للفأر. يمكن أيضا تشريح الكلية المستخرجة للحصول على كلية سليمة بدون كبسولة كلوية وطبقة الدهون المحيطة بها.

استخراج الكلى السليمة من الفأر: تقنية للحصول على الكلى بدون كبسولة كلوية من نماذج الفئران

يصف هذا الفيديو طريقة عزل الكبيبات السليمة من كلى الفئران. يمكن استخدام الكبيبات المغلفة والمفكسورة التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة لزراعة نتاج الخلايا الظهارية الجداري من كلية الفئران.

عزل الكبيبات: تقنية للحصول على كبيبات سليمة من كلية الفئران

نحن تصف نماذج من إصابة الكلى نقص التروية-ضخه التي يسببها المعتدلة والشديدة والتي الفئران الخضوع من جانب واحد الكلوي عنيق لقط تليها في وقت واحد أو تأخر استئصال الكلية المقابل، على التوالي. هذه النماذج تعطي باستمرار يؤدي إلى الفشل الكلوي وتليف بعد الاصابه، ولكن شدة الإصابة والبقاء على قيد الحياة تعتمد على خلفية والعمر والمعدات الجراحية الماوس.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

هناك حاجة إلى تقنيات موثوقة وفعالة لعزل الخلايا المناعية للكلى للتطبيقات النهائية. يتطلب ذلك وضع علامات على الأجسام المضادة السطحية لعدد صغير من الخلايا المناعية للكلى. هنا ، نصف طريقة موجزة لعزل الخلايا المناعية للكلى والتي تحقق هذا الهدف على ما يبدو.

موثوقة وعالية استخراج كفاءة الكلى الخلايا المناعية

يوفر هذا البروتوكول نهج فعال من حيث التكلفة لعزل وتحديد خصائص الماوس الأساسي كلوي أنبوبي الخلايا التي يمكن بعد ذلك شبه مثقف لتقييم الوظائف البيولوجية الكلوي السابقين فيفو، بما في ذلك الاستقلاب المتقدرية.

تحليل الجريان خارج الخلية عزل وتوصيف وإنتاجية عالية للماوس الأساسي كلوي أنبوبي الخلايا الظهارية

نقدم هنا بروتوكولا مورين في فيفو وسم البروتينات السطحية خلية الكبيبي مع البيوتين. هذا البروتوكول يتضمن معلومات عن كيفية نتخلل الكلي الماوس وعزل glomeruli وأداء إيمونوبريسيبيتيشن الذاتية من بروتين الفائدة.

عزل جلوميرولي و في فيفو وسم البروتينات السطحية خلية الكبيبي

يسمح الجمع بين وضع العلامات على الأجسام المضادة، والمقاصة البصرية، والفحص المجهري الضوئي المتقدم، بإجراء تحليل ثلاثي الأبعاد للهياكل أو الأجهزة الكاملة. يوصف هنا هو طريقة بسيطة للجمع بين وضع العلامات المناعية من شرائح الكلى سميكة، والمقاصة البصرية مع cinnamate إيثيل، والتصوير البؤري التي تمكن التصور والقياس الكمي للهياكل الكلوية ثلاثية الأبعاد.

التطهير البصري والتصوير من أنسجة الكلى المسماة بالمناعة

تقدم هذه الورقة تعليمات مفصلة لتمكين الباحثين من إجراء انسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس في الفئران باستخدام نموذج موحد يسمح بتحليل النتائج الهيكلية والوظيفية طويلة المدى بعد عكس انسداد الحالب لفترات طويلة.

نموذج فأر لتقييم النتائج الهيكلية والوظيفية طويلة المدى بعد عكس انسداد الحالب أحادي الجانب لفترات طويلة

تقدم هذه المقالة نموذج اضطراب الكلى المزمن الإقفاري باستخدام التهاب الكلى الداخلي أحادي الجانب مع استئصال الكلى المقابل الذي أجري قبل يوم واحد من جمع العينة؛ يتيح هذا البروتوكول التقييم الوظيفي المعتمد على المصل، والبقاء العالي، وإعادة التكرار لأمراض مرض الكلى المزمن عند 28 و42 يوما، مما يوفر منصة متعددة الاستخدامات للدراسات الميكانيكية والتدخلية.

نموذج الفأر للانتقال من مرض الكلى الحاد إلى المزمن الناتج عن إقمرام/إعادة تروية الكلى

تم استخدام نظام تصوير ليزري للتباين بتقنية البقع لمراقبة التغيرات في تدفق الدم الميكروأوعية الدموية الكلوية أثناء فقدان التروية الكلوية الأحادي الجانب بعد استئصال الكلية اليمنى في الفئران.

يتم مراقبة التروية الوعائية الدقيقة بواسطة تصوير التباين بالليزر أثناء إصابة إقرامية الكلى وإعادة التروية في الفئران

تعلم تقنية الكلية المعزولة المروية في الفئران لدراسة وظائف الكلى خارج الجسم وآليات الإصابة الكلوية الحادة. هذه الطريقة تتيح فهم وظائف الأعضاء المعزولة بدون تأثيرات جهازية.

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

استكشف المزيد من الفيديوهات