طريقة التسليم المباشر القطاعي البينية الكبد باستخدام نموذج الفأر الكبد نقيري المشبك

الهدف العام من نموذج مشبك نقير كبد الفئران الفريد هذا هو تمكين دراسة تأثير الجزيئات الدوائية ذات الأهمية في تحسين إصابة نقص التروية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال زراعة الكبد حول الجزيئات التي يمكن حقنها مباشرة في الكبد للمساعدة في التوسط في إصابة نقص التروية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الجزيء محل الاهتمام يتم حقنه مباشرة في الوريد البابي ، مما يقلل من حجم التوزيع.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو زرع جميع الأعضاء ، لأنها تسمح باختبار الجزيئات التي يمكن إضافتها إلى عزف الأعضاء للحد من إصابة نقص التروية. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية بسبب صغر حجم فرع الوريد البابي المستخدم في القنية. ابدأ بتأكيد المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ، ثم ضع الجرذ على وسادة تسخين تحت مجهر تشريح وقم بتقييد الأطراف.

بعد ذلك ، قم بعمل شق في جلد البطن في خط الوسط من العانة إلى الخنجري ، متبوعا بشق مماثل في الصفاق على طول الخط الربا. ادخل البطن ، مع الحرص على عدم تلف المثانة أو الأمعاء ، وتحرير الكبد من الصفاق الأمامي بالقرب من عملية الخنجري. قم بعمل شق عرضي عبر الجلد والصفاق عند الحد السفلي للفص الأيمن للكبد ، واستخدم مشبك البعوض المنحني لسحب عملية الخنجري.

استخدم ضاغطات الأضلاع لفتح الأضلاع قدر الإمكان من خط الوسط ، وقطع الأربطة المنجلية والحجابية والمعدة. ثم استخدم مسحات قطنية معقمة مبللة لقلب الكبد لأعلى وقطع أربطة إضافية حسب الضرورة للوصول إلى البورتا. باستخدام شاش مبلل بالمحلول الملحي ، قم بتدوير الكبد بشكل عميق ، ثم قم بإزالة النسيج الضام الفضفاض الذي يغطي نقير البوابة ، والنسيج الضام الفضفاض الذي يغطي طول الوريد البابي.

باستخدام الملقط ، ادفع من خلال النسيج الضام الرخو الخلفي إلى الوريد البابي الأيسر والشريان والقناة الصفراوية لإنشاء نافذة وتطويق الأوعية بشكل فضفاض بخياطة 4-0 بوتس. ثم قم بتنظيف النسيج الضام السائب الذي يغطي الفرع الخلفي للوريد البابي في الكلية اليمنى. بعد ذلك ، استخدم حقنة الأنسولين لسحب 0.5 مل من الدم من الوريد الأجوف السفلي ونقل الدم إلى قارورة صغيرة.

قم بالطرد المركزي للعينة وجمع المصل في قارورة جديدة للتجميد المفاجئ في النيتروجين السائل. قطع قطعتين من خياطة 7-0. ضع أول حلقة 7-0 حول الوريد البابي الأيسر إلى أقصى حد ممكن ، واستخدم مشبك البعوض المنحني لسحب الوريد.

ضع حلقة ثانية مقبدة بشكل فضفاض 7-0 على الفرع الخلفي للوريد البابي بالقرب من تقاطعه مع الوريد البوابي. الآن ، قم بتحميل مضخة التسريب بحقنة سعة خمسة ملليلتر تحتوي على ثلاثة ملليلتر من الكاشف في محلول ملحي بنسبة 0.9٪ ، وقم بتجهيز الأنبوب. استخدم مشبك جراحي مجهري لإمساك الوريد البابي البعيد لتقليل النزيف أثناء القنية ، واستخدم مقصا جراحيا صغيرا لقطع ثقب 0.5 ملم في الوريد بين خياطة البقاء 7-0 وتقاطعها مع الوريد البابي.

باستخدام قسطرة 27-0 ، قم بتقطيع الجهاز الوريدي البابي الأيسر ، وإدخال القسطرة بعد تشعب الأوردة البابية اليمنى واليسرى. قم بنقع ملليلتر واحد من المحلول الملحي العادي لتأكيد وضع القنية وراقب الفصوص الجانبية والمتوسطة اليسرى للكبد لتبييض. قم يدويا بتقييم أن القسطرة قد تجاوزت إقلاع الوريد البابي الأيمن ، ولكن ليس بعد إقلاع الوريد البابي الذي يغذي الفص المتوسط ، ثم قم بربط خياطة بوتس ، وقم بتأمين القسطرة بخياطة 7-0 ، وقم بإزالة المشبك من الوريد البابي البعيد.

ابدأ على الفور بضخ ملليلترين من الكاشف محل الاهتمام خلال فترة تسليم مدتها 15 دقيقة ، مع المراقبة المستمرة للعلامات الحيوية للحيوان طوال فترة التسريب. بعد ساعة واحدة من بداية الوقت الإقفاري ، قم بإزالة خياطة بوتس والقسطرة ، ثم قم بربط خياطة 7-0 على الفرع الخلفي للوريد البابي. بعد ساعتين من بدء التروية ، اسحب ببطء 0.5 مل من الدم من الوريد الأجوف السفلي ، متبوعا بنقل الدم بالتنقيط البطيء إلى قارورة جديدة.

استخدم ضغطا برفق لوقف النزيف من الوريد حسب الضرورة. ثم قم بالطرد المركزي للدم وقم بتجميد نصف المصل للمعالجة النهائية ، كما هو موضح للتو. في نقطة النهاية التجريبية ، قم بشق الحجاب الحاجز في دائرة وقطع أي نسيج ضام إضافي يربط الكبد بالتجويف البريتوني.

اجمع الكبد واحصل على أربع عينات كبيرة من الفص الأيسر والمتوسط ، وأربع عينات كبيرة من الفص الأيمن. ثم ضع العينات في قوارير فردية مصنفة وقم بتجميد الأنسجة في النيتروجين السائل لمعالجتها في المصب. يوضح قياس ألانين أمينوترانسفيراز في الدم في المحلول الملحي العادي المشبوطة ب PEG-SOD فرقا كبيرا بين التحكم في المصل ومستويات التعبير عن إنزيم الكبد الحيواني التجريبي في 120 دقيقة بعد إعادة التروية.

لا يظهر تعبير مالوندي ألدهيد الأنسجة في فص المشبك الأيمن غير الهيلار فرقا كبيرا بين المجموعات الضابطة والتجريبية. ومع ذلك ، فإن المشبك الأيسر بعد الهير وفص إعادة التروية يظهر مستوى أعلى بكثير من تعبير مالوند ديالديهايد في الأنسجة مقارنة بالفص غير المعاد النفخ وغير المنقوع ، وكذلك الفص الأيمن المنقوع ب PEG-SOD. لوحظ نفس النمط أيضا لتعبير الجلوتاثيون الأنسجة.

يشير تحليل اللطخة الغربية إلى زيادة مستوى تعبير الكاسباز -3 المشقوق في الفص الأيسر بعد المشبك النزير وإعادة التروية التي تنخفض في التي عولجت بتسريب PEG-SOD ، وهي اختلافات تم تأكيدها على أنها مهمة عن طريق قياس الكثافة. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في ثلاث ساعات و 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر الحصول على جر كبير على فرع الوريد البابي للقنية عند وضع مشبك الوريد البابي البعيد.

بمجرد إتقان هذا الإجراء ، يمكن استخدامه لاستكشاف تأثير مجموعة متنوعة من المواد الدوائية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقنب النظام الوريدي للبوابة اليسرى.