تعديل التزجيج MicroSecure: وفعالة للغاية إجراء الحفظ بالتبريد آمنة وبسيطة والكيسات الأريمية الإنسان

الهدف العام لطريقة تزجيج الأجنة MicroSecure هو توفير إجراء تزجيج مغلق معقم آمن وآمن وبسيط ولكنه فعال للأجنة البشرية. تم تطوير هذه الطريقة لتقليل متغيرات مراقبة الجودة في تزجيج الأجنة البشرية ، وبالتالي ضمان نجاح موثوق به وقابل للتكرار. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسعى جاهدة للقضاء على الاختلافات التقنية بين علماء الأحياء والمختبرات.

تقنيتنا سهلة الأداء لدرجة أننا نجد أن التحدي الأكبر للمتدربين لدينا هو تعلم كيفية ماصة الأجنة دون فقدانها. كانت الفكرة وراء طريقتنا هي التخلص من الحاجة إلى أجهزة متخصصة من خلال تكييف عنصرين شائعي الاستخدام معتمدين من إدارة الغذاء والدواء. قش تخزين أيوني مصنف داخليا ، ومنقاص معقم.

العرض المرئي لهذه التقنية مفيدا للغاية لأنه يسلط الضوء على النصائح الأساسية التي تضمن تطبيقها بنجاح. قبل البدء في الإجراء ، ضع قش السائل المنوي المعقم سعة 0.3 مل على سطح التفلون من القطب الكهربائي الخاص بجهاز السدادة النبضي الأساسي على سطح الطاولة ، أمام القابس مباشرة ، لإنشاء ختم داخلي. اضغط على المقبض لتنشيط الحرارة ، وحرر المقبض عند إيقاف الضوء الأحمر وسماع صوت تنبيه.

ثم ادفع السدادة القطنية للأمام مقابل الختم الداخلي قبل إكمال الإعداد. للتخفيف بالتبريد وتحميل الكيسة الأريمية للعينات ، قم بإزالة طبق مزرعة المريض من الحاضنة وتأكد من جميع تعريفات العينات بمصدر ثانوي. تحت المجهر المجسم ، استخدم flexipet الزجاجي ، المشار إليه باسم طرف vit ، لنقل الأكياس الأريمية إلى قطرات فردية في الصف العلوي من طبق التبريد المقابل.

بعد ذلك ، املأ flexipet مسبقا ب 3 ميكرولترات من محلول V1 وقم بتوزيع نصف المحتويات على الجنين الأول. استنشق الجنين وانقله إلى أول قطرة غسيل V1. ثم قم بتقطيع الجنين مرتين إلى ثلاث مرات حول محيط القطرة، وقم بإزالة محتويات الماصة المتبقية خارج القطرة على سطح الطبق.

ثم انقل الكيسة الأريمية إلى قطرة V1 فردية وقم بتحميل طرف فيتامين بمحلول V2 التالي قبل سحب الأجنة الإضافية بطرف فيتامين جديد. بعد غسل جميع الأكياس الأريمية في قطرات V2 و V3 كما هو موضح للتو ، قم بإزالة المحلول المتبقي والفقاعات من طرف فيتامين خارج قطرة V3 ، واملأ الطرف بالكامل بمحلول V3 نظيف من حول الجنين الأول. طرد ما يقرب من 1 ميكرولتر من الحجم ، وشفط الكيسة الأريمية ومحلول V3 المتبقي تماما في طرف فيتامين

الآن ، قم بإزالة الطرف من الماصة ، واستخدم وسادة شاش معقمة لتجفيف محلول V3 المتبقي من السطح الخارجي لطرف vit. يعد تجفيف السطح الخارجي للطرف أمرا بالغ الأهمية ولا ينطوي على أي خطر إضافي لفقدان الجنين. ثم أدخل طرف الطرف أولا في الطرف المفتوح للقش المختوم مسبقا واقلب القشة ، وقم بوضع نهاية الملصق لأسفل.

راقب الطرف الموجود في القابس الداخلي. اترك مجالا جويا 1 سم على الطرف المفتوح ثم قم بلحام وأغلقه بأمان. عندما يتم إغلاق جميع القش ، اغمرها مباشرة في النيتروجين السائل في قارورة ديوار من الفولاذ المقاوم للصدأ وقم بتخزين القش في الكأس المفتوح المتصل بعصا المريض.

لشطف المحلول بالتبريد وتخفيفه ، ضع طبق تخفيف الآبار المكون من ستة آبار في وسط مرحلة المجهر المجسم وطبق بتري مقاس 60 مم يحتوي على حمام تسخين السكروز بدرجة حرارة 37 درجة مئوية على جانب واحد من المجهر. بعد ذلك ، قم بعزل القش المراد تسخينه ، وأمسك بختم القش العلوي فوق مستوى السائل لتأكيد هوية العينة. استخدم مقص المايونيز لتأمين المصاصة أسفل السدادة الداخلية ، للحفاظ على طرف فيتامين مغمورا في النيتروجين السائل.

اضغط بقوة على المقص على قارورة dewar عدة مرات لإخراج الطرف من الجدار الجانبي الداخلي للقش كإجراء احترازي لمراقبة الجودة ، وارفع القشة في الهواء المحيط في اتجاه أفقي بجوار سطح المجسم أو أسفله. أمسك الطرف غير الملصق من القش ، وقطع القشة في القابس الداخلي. ثم ارفع القشة فوق طبق الحمام الدافئ واسكب طرف فيتامين في الحمام بزاوية 60 درجة ، حتى يتم بثق الطرف بالكامل.

يجب أن تستقر قاعدة flexipet فوق الجدار الجانبي للطبق. بعد 5 إلى 10 ثوان، انقل قاعدة الماصة إلى جهاز سحب العينات الصغير. ابدأ مؤقتا لمدة خمس دقائق.

أثناء عرض المجهر ، استخدم السبابة لتغطية فتحة المصباح ، واضغط برفق على المصباح لتحرير الكيسة الأريمية المزججة من طرف الفيتامين في غسول T1. بعد التأكد من إطلاق الكيسة الأريمية ، قم بإزالة محلول V3 المتبقي والفقاعات بالضغط الإيجابي ، وتفريغ المحتويات في وسط بئر التخلص غير المستخدم. انقل طرف فيتامين إلى ماصة ستربر، وحرك الجنين إلى قطرة T1 الثانية تحت الزيت لمدة الدقائق الأربع المتبقية.

أثناء الحضانة ، املأ الفليكسيبوت مسبقا بالمحلول التالي ، ثم قم بتخفيف الكيسة الأريمية في قطرات T2 و 3 و 4 على فترات ثلاث دقائق. أخيرا ، قم بموازنة الأكياس الأريمية في قطرة T5 لمدة خمس دقائق على سطح 37 درجة مئوية ، قبل إعادتها إلى الحاضنة. يعتبر نظام تصنيف الكيسة الأريمية المعدل غاردنر أن الأكياس الأريمية الكاملة تحتوي على أقل من 10٪ من فتق خلايا الأديم الغاذي ، بينما تصنف الأكياس الأريمية التي تصل إلى 50٪ من الفتق على أنها موسعة.

تعتبر الأكياس الأريمية التي تظهر فتق أكبر من 50٪ فقس. باستخدام طرق الحفظ بالتبريد والتسخين التي أثبتت جدواها ، تم تحقيق مستويات عالية من المواليد الأحياء لكل دورة بداية باستمرار مع أو بدون الاختبار الجيني قبل الزرع. على الرغم من أن هذه النجاحات أعلى بشكل ملحوظ ، باستخدام الأكياس الأريمية euploid المختارة مسبقا.

في الواقع ، عند تقييم مجموعة جيدة من مرضى التشخيص للدورات المحفوظة بالتبريد وحدها ، تظهر بيانات نقل الأجنة المجمدة هذه معدلات نجاح أفضل من المتوسط الوطني لكل من معدلات الزرع والمواليد الأحياء بأكثر من 30٪ عن طريق نقل الأكياس الأريمية المزججة euploid التي تم اختبارها وراثيا في الغالب ، وبعض من أعلى معدلات الزرع ومعدلات المواليد الأحياء في الولايات المتحدة ، بغض النظر عن العمر ، تم تحقيقها ، مقارنة بالإحصاءات الوطنية الحديثة التي أبلغ عنها مركز السيطرة على الأمراض لعيادتين أخريين للخصوبة تحظى باحترام كبير ، والبيانات الصادرة عن جمعية تقنيات المساعدة على الإنجاب. التزجيج MicroSecure هو إجراء معقم جديد تم تطويره من أجل السهولة التقنية والموثوقية والأمان بالتبريد. يوفر نظام التزجيج البسيط غير التجاري هذا بديلا منخفض التكلفة عالي الفعالية لأجهزة التزجيج.

منذ تطويرها ، ضمنت طريقة MicroSecure تعافي الأجنة بنسبة تزيد عن 99.9٪ وبقاء الكيسة الأريمية بالكامل بنسبة تزيد عن 95٪. وقد مكن ذلك من تحويل ممارستنا السريرية إلى جميع دورات نقل الإمبيرو المحفوظة بالتبريد تقريبا على مدى السنوات الثلاث الماضية. لقد قمنا بتعديل إجراءاتنا بشكل فعال لتشمل ختما داخليا أمام سدادة القطن لقش السائل المنوي الأيوني للاستمرار في إنتاج أختام لحام موثوقة ونتائج رائعة بعد الاحترار.

هناك العديد من أنظمة الأجهزة المختلفة المستخدمة في صناعات تكنولوجيا الإنجاب المساعدة اليوم ، ولكن لا يوجد جهاز آخر يوفر البساطة والتكرار التقني للقضاء بشكل أساسي على تباين المستخدم وتوفير أمان محسن ، مثل تزجيج MicroSecure.