تعديل وFunctionalization مجموعة جوانيداين من السلائف مصممة خصيصا

الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير وصول اصطناعي مريح إلى الببتيدات الوظيفية في غوانيدين. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال كيمياء الببتيد العضلي مثل تطوير روابط الإنتجرين أو روابط GPCR. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تتيح وصولا اصطناعيا سهلا إلى جوانيدينات وظيفية ، متوافقة تماما مع SPPS.

ستكون التكنولوجيا ذات قيمة خاصة للجزيئات اللمسية لأن المجموعات الوظيفية ، التي يتم تعديلها ، عادة ما تتدهور الجزيئات الحيوية. في حالتنا ، نهدف إلى الجزيئات التي يمكن استخدامها التصوير الجزيئي fpr للخصائص المميزة للسرطانات الفردية ولعلاجها المحدد. قضية مهمة للطب الشخصي. لبدء هذا الإجراء المحدد ، أضف غراما واحدا من boc-pyrazol carboxamaidine وغراما واحدا من PPh3 إلى قارورة مستديرة القاع سعة 50 مل.

بعد ذلك ، أضف 10 مل من THF المجفف إلى قارورة مستديرة القاع سعة 50 مليلتر في جو خامل عبر حاجز مطاطي. باستخدام حقنة ، أضف 194 ميكرولترا من الميثانول الجاف. حرك المحلول في درجة حرارة الغرفة.

باستخدام حقنة ، أضف محلولا محضرا من ثنائي أيزوبروبيل أزودي كاربوكسيل في THF بالتنقيط على مدار 15 دقيقة. ثم اترك المحلول يقلب لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. باستخدام مبخر دوار ، قم بإزالة المذيب تحت ضغط منخفض.

بعد ذلك ، قم بإذابة المنتج الخام في مليلتر واحد من DCM. بعد ذلك ، دع عمودا وميضا يحتوي على 100 جرام من السيليكا ، في 10٪ أسيتات إيثيل في محلول بنتان. قم بتحميل المنتج الخام المذاب على العمود وأضف المذيب تحت الضغط.

جمع الكسور وتحديدها ودمجها كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد ذلك ، باستخدام مبخر دوار ، قم بتبخير المذيب تحت ضغط منخفض للحصول على المركب المطلوب كزيت أصفر لزج. أولا ، أضف غراما واحدا من boc-pyrazole carboxamidine ، وغراما واحدا من PPH3 و 0.9 جرام من Dde-6-Aminohexanol إلى قارورة مستديرة القاع سعة 50 مل.

ثم أضف 10 مل من THF الجاف في جو خامل باستخدام حاجز مطاطي. بعد ذلك ، قم بإذابة المواد الأولية في درجة حرارة الغرفة. باستخدام حقنة ، أضف محلولا محضرا من ثنائي أيزوبروبيل أزودي كاربوكسيل في THF بالتنقيط على مدار 15 دقيقة.

قلب المحلول لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، استخدم مبخر دوار لإزالة المذيب تحت ضغط منخفض. قم بإذابة المنتج الخام في 1 مليلتر من DCM.

بعد ذلك ، قم بتحميل عمود وميض يحتوي على 100 جرام من السيليكا في محلول اثنين إلى واحد من البنتان وخلات الإيثيل. قم بتحميل المنتج الخام المذاب على العمود وأضف المذيب تحت الضغط. جمع الكسور وتحديدها ودمجها كما هو موضح في بروتوكول النص.

باستخدام مبخر دوار ، قم بتبخير المذيب تحت ضغط منخفض للحصول على المنتج المطلوب. للبدء ، قم بإذابة 1.4 جرام من S-methylisothiourea و 2.2 جرام من boc-anhydride في محلول ثنائي الطور مع التحريك بقوة من DCM وبيكربونات الصوديوم المائية المشبعة. دع الخليط يقلب لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة.

بعد ذلك ، صب الخليط في قمع منفصل. افصل الطبقات واستخرج المرحلة المائية ثلاث مرات باستخدام DCM. ثم امزج المراحل العضوية.

جفف المراحل العضوية المدمجة بكبريتات الصوديوم. بعد إزالة المذيب باستخدام مبخر دوار ، قم بإذابة المنتج الخام في 2 مل من الهكسان. قم بتحميل عمود وميض ب 100 جرام من السيليكا في محلول أربعة إلى واحد من الهكسان وخلات الإيثيل.

بعد ذلك ، قم بتحميل المنتج الخام المذاب على العمود وأضف المذيب تحت الضغط. بعد جمع الكسور وتحديدها ، اجمع الكسور المطلوبة. باستخدام مبخر دوار ، قم بتبخير المذيب تحت ضغط منخفض للحصول على 1.1 جرام من Boc-S-methylisothiourea.

قم بإذابة 250 ملليغرام من Boc-S-methylisothiourea المجمعة في 10 ملليلتر من DMF المجفف في قارورة مستديرة القاع سعة 50 مليلتر في جو خامل في درجة حرارة الغرفة. استخدم حقنة لإضافة 440 ميكرولتر من DIPEA. باستخدام حقنة ، أضف 245 ميكرولترا من أنهيدريد الخل بالتنقيط أثناء التحريك.

دع الخليط يقلب لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم استخدم حقنة لإضافة ملليلترين من الميثانول وحركه لمدة 15 دقيقة. بعد إزالة المذيب تحت ضغط منخفض ، باستخدام مبخر دوار ، قم بإذابة المنتج الخام في مليلتر واحد من DCM.

قم بتحميل عمود وميض ب 60 جراما من السيليكا في محلول ثلاثة إلى واحد من الهكسان وخلات الإيثيل. بعد ذلك ، قم بتحميل المنتج الخام المذاب وأضف المذيب تحت الضغط. جمع الكسور وتحديدها ودمجها كما هو موضح في بروتوكول النص.

باستخدام مبخر دوار ، قم بتبخير المذيب تحت ضغط منخفض للحصول على 210 ملليغرام من المنتج المطلوب كمادة صلبة بيضاء. للبدء ، قم بإذابة كمية صغيرة من الببتيد الدوري غير المحمي بشكل متعامد في حجم صغير من DMF. أضف اثنين من ما يعادل DIPEA.

واثنين من ما يعادل سلائف guanidinylation. ثم اترك المحلول يقلب لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بمجرد اكتمال التفاعل ، قم بإزالة المذيب.

أعد إذابة الببتيد الدوري الجوانيديني في نتريل الأسيتيل وقم بتنقية HPLC شبه التحضيرية كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد ذلك ، في زجاج صغير ، أضف محلولا معدا من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك والماء وثلاثي الأيزوبروبيلسيلان إلى المنتج المنقى. قلب هذا الخليط لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة ، ثم لاحظ إزالة الحماية الكاملة باستخدام ESIMS.

أضف 10 مل من الأثير المثلج إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل. باستخدام ماصة باستور، أضف الببتيد غير المحمي بالتنقيط إلى الأثير. الطرد المركزي التعليق عند 5 ، 000 مرة غرام لمدة خمس دقائق.

بعد ذلك ، اغسل الحبيبات بالأثير المثلج. في جهاز الطرد المركزي عند 5 ، 000 مرة جم لمدة خمس دقائق. كرر هذا الغسيل والطرد المركزي مرة أخرى.

بعد ذلك ، قم بإذابة المنتج في 2 مل من الماء من درجة HBLC وتنقية المنتج باستخدام HPLC شبه التحضيري كما هو موضح في بروتوكول النص. في هذه الدراسة ، يتم تقديم طريقة سهلة في تعديل مجموعة الجوانيدين في الغليجين الببتيدي. تتم مراقبة تقدم التفاعلات باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الضغط.

بالنسبة للمخلفات الكبيرة على مجموعة الجوانيدين ، غالبا ما لا تكون ساعتان وقتا كافيين حتى يصل التفاعل إلى الانتهاء. وبالتالي ، يستمر التفاعل ويتم تنقية المركبات بواسطة HPLC شبه التحضيري. ثم يتم تخفيف كمية صغيرة باستخدام DMSO للحصول على محلول جذعي للتقييم البيولوجي في مقايسة ربط الطور الصلب الشبيه.

تظهر جميع المركبات التي تم تحليلها تقاربا عاليا نسبيا للنوع الفرعي المتكامل ألفا الخامس بيتا ثلاثة ، وانتقائية عالية ضد النوع الفرعي المتكامل ألفا خمسة بيتا واحد. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنا نبحث عن طريقة قياسية للغوانيدينيلیشن أثناء SPPS. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير سلائف guanidinylation المصممة خصيصا ، من أجل تعديل أو تشغيل مجموعة guanidine من الببتيد المستهدف.