باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية
أكتوبر 22, 2017
نحن نقدم نموذجا زرع الابهري أورثوتوبيك باستخدام تقنية الأكمام في الفئران. وهي طريقة ملامسة سريعة جداً، التي يمكن استخدامها في الدراسات المتعلقة بأمراض الأوعية الدموية.
في هذا الإجراء ، يتم وضع الشريان الأورطي للمتبرع في وضع تقويم العظام وتؤخذ اللدغات السطحية في وعاء التغذية. قم بتخدير الفئران بمزيج من 1.5 بالمائة من الأيزوفلوران و 100٪ أكسجين من خلال قناع الوجه. ضع الماوس على منصة في وضع ضعيف وقم بلصق جميع الأرجل على طاولة العمليات.
ضع مرهم العين على العينين لمنع الجفاف أثناء العملية. تحقق من ردود الفعل ، واضغط على القدمين الخلفيتين للتأكد من أن الماوس مخدر بدرجة كافية. إزالة كل الشعر من البطن.
ضعي كريما لإزالة الشعر أو استخدمي ماكينة حلاقة. قم بإجراء العملية في ظل ظروف معقمة. تطهير البطن.
لإزالة الشريان الأورطي المتبرع ، قم بعمل شق في خط الوسط في البطن وسحب الأمعاء يدويا إلى اليمين. اعكس الأمعاء يدويا على الجانب باستخدام قفازات خالية من المسحوق. ضع الأمعاء على قطعة من الشاش مبللة بالمحلول الملحي للحفاظ على رطوبتها.
قم بتشريح الشريان الأورطي البطني بعناية فائقة من الأنسجة المحيطة باستخدام تشريح حاد بالملاقط. قم بتشريح جزء الشريان الأورطي بين الشريان الكلوي والتشعب من الوريد الأجوف باستخدام الملقط. قم بتأمين جميع الفروع الصغيرة لهذا الجزء باستخدام خياطة واحدة أحادية الشعيرات 11-0.
قبل إزالة الشريان الأورطي، حقن 0.5 ملليلتر من المحلول الملحي الذي يحتوي على 50 وحدة من الهيبارين في الوريد الأجوف السفلي. دع المتبرع يخرج قبل إزالة جزء الشريان الأورطي. اشطف الكسب غير المشروع بالكامل بالمحلول الملحي وضعه بعد ذلك مباشرة في وعاء من المحلول الملحي المثلج.
لتحضير المتلقي ، قم بتخدير من خلال قناع الوجه ، وإزالة الشعر ، وتطهيره على النحو الوارد أعلاه ، وقم بعمل شق خط الوسط من الخنجري إلى الحوض بمشرط. اسحب جدران البطن مع الضاعات. لف الأمعاء بشاش مبلل بمحلول ملحي وقم بإزاحتها برفق شديد على يمين.
تشريح الشريان الأورطي تحت الكلوي الحر بين الشرايين الكلوية بالقرب من التشعب والمتشعب بعيدا مع الملقط. قم بتأمين جميع الفروع الصغيرة لهذا الجزء باستخدام خياطة واحدة أحادية الشعيرات 11-0. قم بتثبيت الأجزاء القريبة والبعيدة من الشريان الأورطي عبر خياطة حريرية مفردة 6-0.
قسم الشريان الأورطي في المنتصف بين المشابك وقم بري الأطراف المقطوعة بمحلول ملحي هيبارين لفتح التجويف. ضع الكسب غير المشروع في وضع تقويم العظام. قم بإجراء مفاغرة باستخدام تقنية الأكمام مع الغرز باستخدام 11-0 شعيرات أحادية.
بهذه الطريقة ، يتم وضع نهاية وعاء التغذية في وعاء الاستقبال. ضع نهاية الشريان الأورطي المتلقي تحت الكلوي داخل الطرف القريب من الشريان الأورطي المتبرع. قم بإجراء مفاغرة بعيدة بنفس الطريقة.
ضع الطرف البعيد من الشريان الأورطي المتبرع داخل الطرف البعيد من الشريان الأورطي المتلقي. احرص على تجنب أي التواء في الشريان الأورطي من خلال ضمان المحاذاة المثالية للشريان الأورطي المتبرع والمتلقي. تعد لحظة تحرير المشبك خطوة مهمة جدا في الإجراء ويجب تنفيذها بعناية فائقة.
بعد التحقق من أن مفاغرة في حالة جيدة ، حرر المشابك. قم أولا بتحرير المشبك البعيد برفق ، متبوعا بالمشبك القريب. بهذه الطريقة ، هناك ضغط منخفض لتثبيت الجدران معا قبل تحرير جانب الضغط العالي.
يتم نشر الكسب غير المشروع على الفور ويظهر النبض. قم بإزالة بقايا الحرير برفق. أعد محتويات البطن إلى تجويف البطن وأغلق الجرح باستخدام خياطة حمض البولي جليكوليك 3-0.
إعطاء البوبرينورفين 0.05 ملليغرام لكل كيلوغرام للفأر قبل إنهاء التخدير. نقدم أمثلة على صور التشريح للكسب غير المشروع بعد ستة أسابيع من الزرع وعرض الموجات فوق الصوتية ثلاثي الأبعاد والوضع B. تظهر الصور سالكية الكسب غير المشروع.
لا توجد تغييرات في أبعاد التجويف التي يظهرها الكسب غير المشروع. بالإضافة إلى ذلك ، لم نعثر على تضيق أو تكوينات تمدد الأوعية الدموية. لم نلاحظ أي آفات كبيرة في الشريان الأورطي المزروع عن طريق التلوين النسيجي والتلوين الكيميائي المناعي.
تم تلطيخ النوى بواسطة DAPI. في الختام ، يمكن استخدام طريقة مفاغرة سريعة جدا هذه لدراسة أمراض الأوعية الدموية في الفئران المعدلة وراثيا.
نظرة عامة
تقدم هذه المقالة نموذجاً لزراعة الشريان الأورطي في موضعه الأصلي باستخدام تقنية الكم في الفئران، والتي تتيح إجراء المفاغرة بشكل سريع. ويمكن الاستفادة من هذه الطريقة في دراسات الأمراض الوعائية.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- جراحة الأوعية الدموية
- تقنيات الزرع
- نماذج الفئران للمرض
خلفية علمية
- يعد زراعة الأبهر في موضعه التشريحي أمراً أساسياً لدراسة الأمراض الوعائية.
- توفر تقنية الغلاف طريقة سريعة لإجراء المفاغرة.
- تُستخدم نماذج الفئران بشكل شائع في الأبحاث الطبية الحيوية.
- إن فهم نفاذية الطعوم الوعائية أمر بالغ الأهمية لتحسين النتائج الجراحية.
الغرض من الدراسة
- تطوير تقنية مفاغرة سريعة لزراعة الأبهر.
- تقييم حيوية الطعم بعد عملية الزراعة.
- توفير نموذج لدراسة الأمراض الوعائية في الفئران المعدلة وراثياً.
الطرق المستخدمة
- يتم استئصال الشريان الأبهر من المتبرع وتحضيره تحت ظروف معقمة.
- يتم تخدير الفئران المستقبلة وتحضيرها للجراحة.
- يتم إجراء المفاغرة باستخدام تقنية الكم (sleeve technique) بواسطة خيوط جراحية دقيقة.
- يتضمن التقييم بعد الجراحة التصوير بالموجات فوق الصوتية والتحليل النسيجي.
النتائج الرئيسية
- أظهر الطعم نفاذية بعد ستة أسابيع من عملية الزرع.
- لم تُلاحظ أي تغيرات ذات دلالة في أبعاد اللمعة.
- كشف التحليل النسيجي عن عدم وجود تضيق أو تشكلات تمددية.
- أظهر الصبغ الكيميائي النسيجي المناعي عدم وجود آفات ذات دلالة في الشرايين الأورطية المزروعة.
الاستنتاجات
- تعد طريقة المفاغرة السريعة فعالة لزراعة الأبهر.
- يمكن لهذا النموذج تسهيل الأبحاث المتعلقة بالأمراض الوعائية.
- يمكن للدراسات المستقبلية استخدام هذه التقنية لإجراء المزيد من الاستقصاءات.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
تتيح تقنية الكم (sleeve technique) لزراعة الشريان الأبهر في موضعه التشريحي لدى الفئران إجراء تطعيم وعائي سريع وقابل للتكرار وبمعدلات فشل منخفضة، مما يدعم الدراسات عالية الإنتاجية في بيولوجيا الأوعية الدموية. ويسهل هذا النموذج عملية تقليل المخاطر الآلية والتحقق من الأهداف في أبحاث أمراض الأوعية الدموية قبل السريرية، مما يوفر منصة قوية لتقييم التدخلات الجينية والدوائية. كما أن بساطتها التشغيلية وموثوقيتها تجعلها ذات قيمة عالية في فرز المحافظ البحثية وضمان الاستمرارية الانتقالية في مجال البحث والتطوير الخاص بأمراض القلب والأوعية الدموية.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية البيولوجية
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- يمكّن من استقصاء آليات الأمراض الوعائية في نماذج الفئران المعدلة وراثياً.
- يدعم التحقق الوظيفي من الأهداف المرشحة التي تؤثر على إعادة تشكيل الأوعية الدموية ونفاذية الطعوم.
- يسهل تعزيز الثقة التنبؤية في دراسات الفعالية قبل السريرية للعلاجات الوعائية.
الفحص وتطوير المقايسة
- يوفر نموذجاً موحداً وقابلاً للتكرار لتقييم نتائج الرقع الوعائية.
- يقدم مخرجات كمية مثل نفاذية الرقعة، وأبعاد اللمعة، والسلامة النسيجية.
- يتيح تقييماً موثوقاً لتأثيرات التدخلات المركبة أو الجينية على الإصلاح الوعائي.
الأبحاث الترجمية وما قبل السريرية
- يتوافق مع النهايات الطرفية ذات الصلة بالمرض، بما في ذلك التضيق، وتكون تمدد الأوعية الدموية، وتطور الآفات الوعائية.
- يدعم الاستمرارية من مرحلة الاكتشاف وصولاً إلى التحقق قبل السريري من الأهداف والتدخلات الوعائية.
- يقلل من المخاطر البيولوجية من خلال نمذجة عمليات إصابة الأوعية الدموية وإصلاحها ذات الصلة سريرياً.
تكامل سير العمل والمسار التحليلي
يدمج نموذج زراعة الشريان الأورطي للفئران هذا في التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية لأبحاث الأمراض الوعائية، مما يشكل جسراً يربط بين الدراسات الميكانيكية والتحقق الانتقالي.
- بيولوجيا الاكتشاف: تمكّن من اختبار الفرضيات المتعلقة بمسارات إصابة الأوعية الدموية وإصلاحها وإعادة تشكيلها.
- الفحص: توفر جاهزية المقايسة من خلال نقاط نهاية جراحية وتحليلية قابلة للتكرار.
- التحليلات: تدعم القياس الكمي لنفاذية الطعم، وحجم اللمعة، وعلم الأمراض النسيجي.
- الأبحاث الانتقالية: تضع نماذج للنتائج الوعائية ذات الصلة بالمرض للتقييم قبل السريري.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: توفر منصة موحدة وقابلة لإعادة الاستخدام لمختلف برامج أبحاث الأوعية الدموية.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تزيد من الثقة التنبؤية وتقلل من الغموض الآلي في التحقق من الأهداف الوعائية.
- القيمة التشغيلية: تقدم إجراءات زراعة معيارية وقابلة للتطوير وإعادة الإنتاج.
- القيمة الاستراتيجية: تحسن عملية اتخاذ القرار بشأن المضي قدماً أو التوقف (go/no-go) وكفاءة رأس المال في محافظ البحث والتطوير الوعائية.
- تأثير المحفظة: تتيح تحديد الأولويات المعدلة وفقاً للمخاطر للأهداف الوعائية والمرشحين العلاجيين.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة جراحية في المفاغرة الوعائية الجراحية المجهرية في الفئران.
- يستلزم توفر التخدير، وأجنحة جراحية معقمة، وبنية تحتية للتصوير من أجل التقييم بعد الزرع.
- يستوجب توحيد البروتوكولات الجراحية والتحليلية بين الفرق لضمان قابلية التكرار.
- قد يكون التكييف مطلوباً لسلالات الفئران المختلفة أو الخلفيات الجينية المتنوعة.
- تشمل القيود المحتملة التباين التقني والحاجة إلى تدريب متخصص.
