$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، أو TLC ، هي طريقة كروماتوغرافية تستخدم لفصل مخاليط المركبات غير المتطايرة ، والتي يشيع استخدامها في الكيمياء العضوية.
يتم إجراء TLC على لوحة زجاجية أو بلاستيكية مدعومة. يتم وضع علامة على خط الأساس على اللوحة ، جنبا إلى جنب مع الملصقات. يتم إذابة الخليط الذي يتم فحصه والمركبات المرجعية في مذيب مناسب ويتم تطبيقه بالقرب من الحافة السفلية للوحة TLC في أماكن صغيرة. يتم وضع اللوحة في جرة ومذيب؟ (المرحلة المتنقلة) يفصل الخليط بناء على الخصائص الفيزيائية لكل مكون.
على الرغم من حقيقة أن تقنيات الفصل الثقيلة للأدوات تتمتع بقدرة حل أكبر من TLC ، إلا أن السرعة والتكلفة المنخفضة هي التي تجعل TLC تقنية جذابة للتحليل النوعي أثناء التنقل. سيوضح هذا الفيديو إعداد وتشغيل وتحليل كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.
تشمل تقنيات الكروماتوغرافيا مرحلة ثابتة ومتحركة. في TLC ، تتكون المرحلة الثابتة من طبقة رقيقة من المواد المثبتة على اللوحة. المادة عبارة عن مادة قطبية ، مثل هلام السيليكا. المرحلة المتحركة عبارة عن سائل غير قطبي يتحرك لأعلى الطبقة الماصة عن طريق العمل الشعري. عندما تتحرك المرحلة المتحركة لأعلى اللوحة ، فإنها تسحب على طول مكونات كل بقعة ، والتي يتم فصلها لاحقا بناء على القطبية.
ستقضي المركبات الأقل قطبية وقتا أطول في المرحلة المتنقلة حيث يتم سحبها لأعلى اللوحة. المركبات الأكثر قطبية تنجذب أكثر إلى المرحلة الثابتة ، وبالتالي لن تتحرك لأعلى اللوحة بعيدا.
يتم الفصل في حاوية نامية. يمكن أن تكون هذه برطمانات بأغطية أو أكواب مغطاة بورق الألمنيوم. استخدم أصغر حاوية متاحة تستوعب لوحة TLC لتسريع الفصل.
يجب أن تكون المرحلة المتحركة ، أو المذيب النامي ، غير قطبية قدر الإمكان من أجل فصل جيد. تظهر هنا سلسلة eluotropic لهلام السيليكا ، وهي قائمة بالمراحل المتنقلة الشائعة من أجل زيادة قوة الاستخراج.
يمكن اختبار عدد من المراحل المتنقلة في وقت واحد. على طبق نظيف ، حدد العينة المذابة عدة مرات ، على بعد 2 سم على الأقل. ضع ما يكفي من المرحلة المتحركة على كل بقعة لتشكيل دائرة قطرها 1-2 سم.
حدد المسافة التي تقطعها المرحلة المتنقلة. إذا لم تكن المرحلة المتنقلة قطبية بدرجة كافية ، فستظل العينة قريبة من البقعة الأولية. إذا كانت المرحلة المتنقلة قطبية للغاية ، فسوف تهاجر كل العينة مع واجهة المذيب. ستظهر المرحلة المتنقلة المناسبة حلقات منفصلة جيدا ، مع الحلقة الخارجية حوالي 50٪ من المسافة إلى مقدمة المذيب.
إذا لزم الأمر ، يمكن خلط مرحلتين متنقلتين قابلتين للامتزاج بنسب متفاوتة للحصول على الخصائص المطلوبة. هنا ، كان خليط 1: 1 من أسيتات الإيثيل والهكسان قطبيا للغاية ، ولكن تم فصل خليط 1:20 بشكل مناسب.
مع اختيار المرحلة المتنقلة ، أنت جاهز لبدء تطوير اللوحة.
لبدء الإجراء ، قم بقص لوحة TLC المتوفرة تجاريا إلى الحجم المطلوب. إذا كانت اللوحة تحتوي على دعامة زجاجية ، فقم بتسجيلها باستخدام قاطع زجاجي وكسرها بعناية على طول الخط.
باستخدام قلم رصاص ، ضع علامة على خط الأساس على بعد حوالي 1 سم من أسفل اللوحة. حدد الموقع الذي سيتم فيه رصد العينات على طول الخط. تأكد من أن البقع لا تقل عن 1 سم من الحافة و 3 مم على حدة. قم بتسميتهم بشكل مناسب.
يجب إذابة العينات الصلبة في مذيب مناسب. تشمل المذيبات الشائعة الهكسان أو أسيتات الإيثيل أو ثنائي كلورو ميثان. استخدم المذيب الأقل قطبية الذي سيذيب العينة.
ارسم خليط العينة / المذيبات باستخدام شعرية زجاجية. المس الطرف برفق إلى الموقع المطلوب على لوحة TLC وقم بإزالته على الفور. من المهم عدم إزعاج المرحلة الثابتة.
حافظ على البقعة صغيرة قدر الإمكان ، لأن هذا يؤدي إلى فصل أفضل. إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من العينة ، فيمكن تطبيق البقع على التوالي في كل موقع. اترك المذيب يجف بين التطبيقات. يمكن استخدام تيار من الهواء لتجفيف المذيبات الأقل تقلابا.
لوحة TLC جاهزة الآن للتطوير. ضع قطعة من ورق الترشيح في قاع البرطمان لزيادة ضغط البخار. أضف المرحلة المتنقلة إلى عمق لا يصل إلى خط الأساس. قم بتغطية البرطمان عندما لا يكون قيد الاستخدام حتى لا تهرب أبخرة المذيبات.
ضع لوحة TLC المرقطة بعناية في الجرة النامية. تأكد من أن مرحلة الهاتف المحمول أقل من خط الأساس. شاهد تقدم جبهة المذيبات؟ الحافة الرائدة في مرحلة الهاتف المحمول؟ لأنها ستتحرك بسرعة فوق اللوحة.
لا تسمح للمرحلة المتنقلة بالوصول إلى الحافة العلوية للوحة ، حيث ستبدأ نطاقات العينة في التمدد عن طريق الانتشار. بمجرد أن تقترب مقدمة المذيب من الأعلى ، قم بإزالة اللوحة من غرفة التطوير وقم بتمييز مقدمة المذيب بقلم رصاص قبل أن يجف المذيب.
إذا لم تكن المركبات ملونة ، فيمكن استخدام مصباح الأشعة فوق البنفسجية لتصور البقع. سوف يمنع المركب تألق الخلفية للوحة. اضبط المصباح على إعداد الموجة القصيرة ، وقم بإضاءة اللوحة الجافة. باستخدام قلم رصاص ، حدد أي بقع مرئية تحت المصباح. باستخدام قلم رصاص ، حدد أي بقع مرئية تحت المصباح.
تقنية تصور أخرى ممكنة هي استخدام برمنجنات البوتاسيوم ، وهو عامل مؤكسد. باستخدام الملقط ، اغمس الطبق في بقعة البرمنجنات.
قم بإزالة المحلول الزائد والتخلص منه بمنشفة ورقية. في غطاء الدخان ، قم بتسخين اللوحة بعناية بمسدس حراري لتصور البقع. استخدم قلم رصاص لتمييز أي بقع تظهر.
بمجرد تصور البقع ، يمكن مقارنة جوهر الاهتمام بالمعايير ، كما هو موضح هنا. في هذا المثال ، المجهول هو 1،3-ثنائي فينيل بروبينون ، وهو لبنة بناء في التخليق العضوي. من خلال مقارنة الفرقة بمعيار معروف وكلوريد البنزويل ، أحد المواد الأولية ، يمكن تحديد المنتج.
يستخدم عامل التخلف ، أو RF ، لتحديد المركب المجهول. الترددات اللاسلكية هي نسبة المسافة التي يقطعها المركب فوق لوحة TLC إلى المسافة التي تقطعها المرحلة المتنقلة. يتم تحديد العامل عن طريق قياس المسافة من خط الأساس إلى البقعة والقسمة على المسافة من خط الأساس إلى مقدمة المذيب.
يعتمد التردد اللاسلكي لمركب معين على الظروف المستخدمة في التجربة ، بما في ذلك اختيار المذيب وسمك ونشاط المادة الممتزة ودرجة الحرارة وحجم العينة. يجب توخي الحذر للحفاظ على اتساق هذه العوامل بين التجارب.
هناك العديد من تطبيقات كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.
في هذا المثال ، تمت دراسة محتوى ثلاثي الجلسريد في الغدد الدهنية للخفافيش. تم فصل جزء سطح الدهون لأول مرة عن طريق القطبية على لوحة TLC. ثم تمت إزالة شريط ثلاثي الجليسريد من اللوحة باستخدام ملعقة. تم نقل مسحوق السيليكا إلى أنبوب طرد مركزي دقيق مع مذيب. بعد الطرد المركزي ، تركت المرحلة الثابتة في قاع الأنبوب ، بينما ظلت المركبات مذابة في المذيب. ثم تم فصل ثلاثي الجلسريد بواسطة خاصية فيزيائية أخرى. في هذه الحالة ، كان البعد الثاني للفصل هو الحجم الجزيئي.
يمكن أيضا استخدام TLC لمراقبة تطور التفاعل الكيميائي. في هذا المثال ، تم استخدام مادة البداية للتفاعل كمعيار ، وتم تشغيلها جنبا إلى جنب مع محلول التفاعل على لوحة TLC. تكررت هذه العملية على فترات محددة على مدار التفاعل. مع تقدم التفاعل ، تضاءل نطاق مادة البداية وتضخم نطاق المنتج. عندما لم يكن هناك تغيير في النطاقات ، أو تم استهلاك جميع المواد الأولية ، كان التفاعل كاملا. ?
أخيرا ، يمكن استخدام لوحات TLC في المقايسات الحيوية. في هذا المثال ، تم فصل المركبات عن البرسيم الأحمر باستخدام TLC. ثم تم وضع كل شريط على البكتيريا التي تنمو على ألواح الأجار. تم تحليل الجزيئات التي أظهرت تثبيط نمو البكتيريا لخصائصها المضادة للميكروبات.
لقد شاهدت للتو مقدمة JoVE لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة. يجب أن تفهم الآن النظرية الأساسية للفصل ، وكيفية اختيار مرحلة متنقلة مناسبة لتجربتك ، وكيفية إعداد لوحة TLC وتشغيلها. شكرا للمشاهدة!
