Intracarotid حقن الخلية السرطانية لإنتاج نماذج الماوس من الدماغ الانبثاث

الهدف العام من هذا الحقن المجهري للخلايا السرطانية من خلال الشريان السباتي هو إنتاج نماذج متسقة في الجسم الحي لورم خبيث الدماغ التجريبي في الفئران. لذلك يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال ورم خبيث في الدماغ ، مثل ما إذا كان العلاج الجديد قد يظهر فعاليته في علاج ورم خبيث في الدماغ. لذا فإن الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بإنتاج ورم خبيث تجريبي في الجسم الحي مع قابلية عالية للتكاثر وتباين منخفض.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه التقنية في البداية لأن هناك حاجة إلى قدر لا بأس به من الممارسة للحفاظ على يد ثابتة لحقن الخلايا السرطانية في الشريان السباتي لهذه الفئران تحت المجهر. ابدأ هذا الإجراء عن طريق زرع الخلايا السرطانية بوسائط DMEM F12 المكملة بنسبة 10٪ FPS وزراعتها لمدة يوم إلى يومين قبل الحقن. في يوم العملية الجراحية ، قم بإزالة الخلايا من الحاضنة وحصادها عندما تصل إلى 70٪ إلى 80٪ من التقاء عن طريق الغسيل بوسائط خالية من المصل.

بعد ذلك ، احتضان الخلايا بنسبة 0.25٪ تريبسين لمدة دقيقة إلى دقيقتين عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بإزالتها من الحاضنة وأضف 10٪ FBS التي تحتوي على وسائط DMEM F12 إلى الخلايا لإخماد الشقاق. الطرد المركزي للخلايا عند 80 مرة G لمدة ثلاث دقائق.

ثم قم بإزالة الوسط وغسل الخلايا في مصل خال من المصل مرتين لإزالة المصل المتبقي. بعد ذلك ، قم بحساب الخلايا باستخدام مقياس الدم وإعادة تعليقها في HBSS. ثم احتفظ بالخلايا على الجليد حتى وقت الحقن.

في هذا الإجراء ، قم بتخدير الفأر بكوكتيل الكيتامين / الزيلازين عن طريق الحقن داخل الصفاق. تأكد من التخدير الكامل عن طريق الضغط على أقدام ولاحظ عدم الاستجابة. بعد ذلك ، قم بإزالة شعر الرقبة عن طريق الحلاقة أو استخدام كمية صغيرة من منتج إزالة الشعر.

ثم ضع الماوس على صفيحة زجاجية وقم بتثبيته بأربطة مطاطية. نظف البشرة عن طريق وضع 70٪ كحول في بوفيدون اليود. الآن ، قم بعمل شق في الجلد بطول سنتيمتر واحد بمشرط جراحي.

بعد ذلك ، قم بتشريح العضلات بصراحة باستخدام ملقط جراحي لفضح الشريان السباتي تحتها. افصل الشريان السباتي عن العصب المبهم المجاور باستخدام ملقط جراحي. بعد ذلك ، ضع خياطتين.

واحد بعيد وقريب من كرة القطن وجعل عقدة فضفاضة. شد العقدة القريبة لمنع تدفق الدم إلى موقع الحقن. بعد ذلك ، قم بترطيب كرة قطنية صغيرة بمحلول ووضعها تحت الشريان السباتي في موقع الحقن المقصود.

بعد ذلك ، انتقل إلى حقن الخلايا السرطانية إذا بدا الشريان السباتي على كرة القطن مضغوطا بالكامل بدم أحمر طازج. في هذه الخطوة ، قم بتدوير وسحب 100 ميكرولتر من الخلايا السرطانية في المحقنة. تحت مجهر التشريح ، أدخل إبرة القياس 31 ببطء مع شطبة في تجويف الشريان السباتي ، جالسا فوق كرة القطن.

حقن الخلايا ببطء من المحقنة في الشريان السباتي. يمكن ملاحظة الحقن الناجح من خلال تغير لون الأوعية الدموية والعضلات القريبة عندما يتم دفع الخلايا السرطانية المخزنة إلى الدورة الدموية. عند اكتمال الحقن ، ارفع الرباط البعيد برفق لمنع القلس.

ثم شد العقدة البعيدة بسرعة لإكمال عملية الحقن. بعد الانتهاء من الحقن ، شد الأربطة وقص خياطة الحرير الزائدة بمقص صغير. حرك العضلة المنفصلة للخلف لتغطية موقع الجرح وأغلق الجلد باثنين من الدبابيس.

للتعافي ، انقل إلى وسادة تدفئة. بعد ذلك، يتم تطبيق البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد كمسكن بعد الجراحة. بمجرد أن يستعيد وعيه ويستأنف سلوكه الطبيعي ، أعد الفأر إلى موقع سكنه.

زود بغذاء هلامي لعدة أيام بعد الجراحة. تظهر هذه الصور أن خلايا سرطان الثدي MDA MB231 المعدلة تم تصنيفها بجين مراسل foraise السائب ex-vivo. بدءا من 24 ساعة بعد حقن الشريان السباتي ، تمت مراقبة تطور ورم خبيث في الدماغ بشكل غير جراحي عن طريق التصوير المتكرر لنظام التصوير في الجسم الحي.

يشير القياس الكمي لبيانات التصوير إلى انخفاض أولي في عبء الورم بعد حقن الشريان السباتي ، يليه نمو أسي لرم خبيث في الدماغ حتى يزداد وفرة. لذلك ما يتم إتقانه يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من 10 دقائق لكل حقنة فأر إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. لذلك أثناء إجراء هذا الإجراء ، فإن أهم شيء يجب تذكره هو أنه يجب عليك التأكد من وضع الشريان السباتي ودراسته وتأمينه فوق كرة القطن قبل الشروع في حقن الخلايا السرطانية.

بعد هذا الإجراء ، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل العلاجات العلاجية للإجابة على أسئلة أخرى. على سبيل المثال ، ما إذا كان الدواء الجديد سيكون فعالا في تثبيط ورم خبيث في الدماغ. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال ورم خبيث في الدماغ لاستكشاف الأسئلة الأساسية أو الانتقالية في النموذج التجريبي في الجسم الحي في الفئران.

لذلك بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية حقن الخلايا السرطانية في الشريان السباتي للفئران لإنتاج نموذج ورم خبيث تجريبي في الجسم الحي.