الفئران كامل سماكة الجلد زراعة

الهدف العام من هذا المقال المرئي هو إجراء عملية زراعة جلد كاملة السماكة، ووصف الخطوات الهامة اللازمة لضمان نجاح الإجراء. تُعد عملية زراعة الجلد كاملة السماكة في الفئران نموذجاً راسخاً لدراسة الاستجابات المناعية الخيفية ورفض الطعوم. ويتميز هذا الإجراء بسهولة التنفيذ، ولا يتطلب تقنيات جراحية مجهرية دقيقة.

يحدث رفض الطعم في هذا النموذج من خلال تفاعل مناعي قابل للتكرار بشكل كبير، ويمكن مراقبته بسهولة عن طريق الفحص المباشر والجس. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إجراء عملية زرع جلد ثانوية باستخدام طعوم جلدية متوافقة مع المانح أو من طرف ثالث لتطوير نماذج زرع أكثر تعقيداً، وذلك كطريقة بديلة وغير معقدة لتقييم التحمل الخاص بالمانح. بعد تخدير فأر المانح وفقاً للبروتوكول المذكور، استخدم ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة ظهر الحيوان.

ثم قم بتطهير الجلد باستخدام povidone-iodine بتركيز 10%. وباستخدام المقص والتشريح غير الحاد، استأصل جلد الظهر المانح من الورك إلى الرقبة عند مستوى النسيج الضام الفجوي. ضع جلد الظهر تحت المجهر، واستخدم مقص بضع الأوتار الدقيق لفصل النسيج الضام والطبقة العضلية الجلدية عن الجلد.

قم بقص طعوم بمقاس 15 في 15 مليمتر من جلد الظهر لإنشاء سرير طعم يتراوح مقاسه بين 10 في 10 إلى 15 في 15 مليمتر. احفظ الطعوم على شاش مغمور في PBS داخل طبق بتري، وضعه على الثلج. قم بتخدير الفأر المستقبل وفقاً للبروتوكول النصي.

قم بحلاقة الجانب الخلفي من الحيوان، حيث سيتم إدخال الطعم، ثم أعطِ 0.02 milligrams per kilogram من buprenorphine لتسكين الآلام بعد العملية الجراحية. استخدم 10%povidone-iodine لتطهير المنطقة. وباستخدام المقص، وبأقل عمق ممكن، قم بقص مربع من الجلد بمقاس 10 by 10 إلى 15 by 15 millimeter.

احرص على الحفاظ على الطبقة العضلية تحت الجلدية (panniculus carnosus) والأوعية الدموية التي تمر بشكل سطحي فوقها. بعد ذلك، ضع الطعم على سرير الطعم، مع تجنب تكون ثنيات على طول الحواف. ثم، ضع ثماني غرز جراحية عند زوايا الطعم، وفي منتصف كل حافة، وذلك بتمرير الإبرة عبر الطعم، ثم عبر الطبقة العضلية تحت الجلدية لسرير الطعم، أسفل جلد المستقبل المحيط.

ضع شاشاً مطوياً فوق ضمادة مضاعفة، ثم ضع الحيوان على الضمادة بحيث يكون جانب الطعم للأسفل، مع إزالة قناع التخدير للسماح للحيوان بالتعافي جزئياً. بعد ذلك، لف الضمادة حول الحيوان. إن العامل الأكثر أهمية في عملية تطعيم الأنسجة هو إعادة التوعي في نسيج الطعم من خلال نمو أوعية المضيف داخل الطعم.

تعد عملية تشريح العضلة اللحمية (panniculus carnosus) والوضع الصحيح للضمادة من أهم الخطوات. مباشرة بعد الجراحة، يتم إعطاء 5 milligrams per kilogram من enrofloxacin للوقاية من العدوى. يوضع الفأر المزروع في قفص نظيف حتى يتعافى تماماً من التخدير.

راقب الفأر لمدة ساعة واحدة بعد العملية الجراحية، وذلك قبل إعادته إلى مرفق الإيواء. تابع الفأر عن كثب أثناء مرحلة التعافي للتأكد من أن الضمادة لا تعيق تمدد الصدر أو التنفس. بعد ثمانية أيام، افحص الطعم بصرياً وبالجس للبحث عن علامات تكون القشور، أو الانكماش، أو التصلب.

إذا ظهرت أي من هذه العلامات، فقد لا تكون الطعمة قد حققت التوعية الدموية المناسبة، ويجب اعتبار ذلك فشلاً تقنياً. راقب الطعمة يومياً بحثاً عن علامات الرفض. تُعتبر الطعمة مرفوضة عندما تصبح نسبة 90% أو أكثر من أنسجة الطعمة نخرية.

في نماذج عدم التطابق الكامل، عادةً ما يتم رفض طعوم الجلد كاملة السماكة في غضون 8 إلى 12 يوماً. أما في نماذج عدم التطابق الطفيف، فتكون استجابات الرفض أبطأ وأكثر تفاوتاً، وتتميز مظاهر طعم الجلد بتغيرات أقل وضوحاً، مثل الانكماش أو فقدان الشعر. يبدأ الرفض الحاد للطعم عموماً بالتورم والحمامى في منطقة الطعم.

تتبع هذه الأحداث عملية جفاف الطعم، وتكون القشرة، والانكماش، كما هو موضح هنا. واعتماداً على درجة عدم تطابق معقد التوافق النسيجي الكبير (MHC) وبروتوكول كبت المناعة، يمكن أن يحدث الرفض من خلال عملية دون حادة تتميز بتغيرات طفيفة، مثل فقدان الشعر، والتصبغ، والخطوط الجلدية، وحجم الطعم. وفي هذه الحالات، يظهر الطعم المرفوض لامعاً وأبيض اللون وخالياً من الشعر، مع حواف غير منتظمة.

بإستخدام فئران BALB/c كمتبرعين، وفئران C57 black 6 كمستقبلين، لُوحظ أن تثبيط تحلل السكر والفسفرة التأكسدية، أو استقلاب الغلوتامين وحده، أدى إلى إطالة بقاء الطعم الجلدي. ولكن حظر المسارات الثلاثة في وقت واحد أدى إلى زيادة كبيرة في بقاء الطعم. علاوة على ذلك، كان العلاج الاستقلابي الثلاثي أكثر فعالية من السيكروسبورين التقليدي، أو الراباميسين.

علاوة على ذلك، أظهر الفحص النسيجي لطرعوم الجلد من مجموعة العلاج الأيضي محاذاة نسيجية أكثر تماسكاً، وارتشاحاً التهابياً لمفاوياً أقل، مقارنة بالأنسجة غير المعالجة. لقد تحسنت نتائج زراعة الأعضاء بشكل ملحوظ مع التقدم في الإجراءات الجراحية وبروتوكولات تثبيط المناعة. ومع ذلك، يرتبط تثبيط المناعة طويل الأمد بآثار جانبية كبيرة، ولا تزال الاستراتيجيات الجديدة التي تعزز التسامح المناعي هي الهدف من أبحاث زراعة الأعضاء الحديثة.

من المعروف جيداً أهمية عملية التمثيل الغذائي في تنظيم الخلايا التائية. ومن خلال تثبيط تحلل السكر، والفسفرة التأكسدية، واستقلاب الجلوتامين، تمكنا من زيادة بقاء الطعم الخيفي بشكل ملحوظ. وكان هذا النهج المبتكر أكثر فعالية من العلاج التقليدي، وهو يمثل تحولاً جذرياً في النهج المحتمل للتنظيم المناعي وزراعة الأعضاء.