Name: والاستشعار القائمة على أبتمر لUnchelated الجادولينيوم (III) (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: اكتشف طريقة كشف فلورية للكشف عن أيونات الجادولينيوم غير المخلبية السامة في المحاليل المائية باستخدام أبتامرات البوليديوكسي نوكليوتيد. تضمن هذه التقنية الكشف بتركيزات دون الميكرومول مع ارتفاع الانتقائية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يسعدنا أن نعرب عن امتناننا للدكتور ميلان إن ستويانوفيتش من جامعة كولومبيا ، نيويورك ، نيويورك للمدخلات العلمية القيمة. يتم دعم هذا العمل بتمويل من جامعة ولاية كاليفورنيا إيست باي (CSUEB) ومنحة دعم أعضاء هيئة التدريس CSUEB - الباحث الفردي. تم دعم OE و TC و A.L. من قبل زمالة مركز CSUEB لأبحاث الطلاب (CSR).

ملاحظة: يتم استخدام الجزيئي المياه البيولوجيا الصف في كافة الاستعدادات العازلة والحل. جميع أنابيب القابل للتصرف (microcentrifuge لوPCR) ونصائح الماصة هي DNase- وريبونوكلياز خالية. يرجى الاطلاع على ورقة بيانات سلامة المواد (MSDS) لجميع المواد الكيميائية قبل استخدامها. ينصح بشدة استخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة (PPE). 1. إعداد الحلول المالية أبتمر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شراء 2 خيوط polydeoxynucleotide تجاريا. طلب كل من خيوط بالتطهير عبر الأداء العالي اللوني السائل (HPLC). حبلا 1 (ش ج-أبتمر): 5 &#39;- / 56-FAM / AGGCTCTCGGGACGACCAGTTGGTCCCGCTTTATGTGTCCCGAG-3 &quot; حبلا 2 (QS): 5&#39;-GTCCCGAGAGCCT / 3Dab / -3 &quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كل حبلا في الماء لجعل 100 ميكرومتر الحلول الأسهم الفردية للش ج-أبتمر وQS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين هذه الحلول في -20 درجة مئوية. الحلول هي مستقرة حتى الآن، لمدة 3 سنوات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقليل فريزدورات ذوبان الجليد الإلكترونية، تخزين الحلول الأسهم في 10 مكل. </li></ol> 2. إعداد 2X ش ج استشعار الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المخزن المؤقت فحص (20 ملي HEPES، 2 مم MgCl 2، 150 مم كلوريد الصوديوم، 5 مم بوكل). ضبط درجة الحموضة إلى ~ 7.4 مع هيدروكسيد الصوديوم وحمض الهيدروكلوريك، وتصفية من خلال معقمة يمكن التخلص منها زجاجة أعلى مرشحات مع 0.2 ميكرومتر غشاء PES. تخزين في زجاجات معقمة. إذا تمت تصفيتها وتخزينها بشكل صحيح (في درجة حرارة الغرفة)، المخزن المؤقت مستقرة حتى الآن، لمدة 2 سنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 1 ميكرولتر من محلول المخزون ش ج-أبتمر (من الخطوة 1.2) و 2 ميكرولتر من محلول المخزون QS (من الخطوة 1.2) في 497 ميكرولتر من العازلة الفحص. تخلط جيدا باستخدام الدوامة. تركيزاتها في 2X حل ش ج استشعار هي 200 نانومتر و 400 نانومتر، على التوالي. ملاحظة: حجم 2X حل ش ج استشعار أعد في هذه الخطوة هو 500 ميكرولتر، وهو ما يكفي لاختبار 6-7 تركيزات مختلفة من ش ج 3+ لمنحنى المعايرة والحلول عامل تباين(الخطوة 3). وسيكون لكل عينة تعطي الآبار مكررة في 384 لوحة جيدا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط حجم 2X حل ش ج استشعار وفقا لعدد من الحلول ش ج 3+ التي تحتاج إلى فحصها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 2X حل ش ج استشعار في 9 أنابيب PCR، مع 50 ميكرولتر إلى كل أنبوب. وضع الأنابيب في cycler الحرارية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط البرنامج في cycler الحرارية لتسخين الحل في أنابيب إلى 95 درجة مئوية، وعقد لمدة 5 دقائق، ثم تبرد ببطء الحلول إلى 25 درجة مئوية خلال ~ 15 دقيقة (بمعدل ~ ،05-،1 ° C / ق). دورة التدفئة والتبريد هي ضمان التهجين الأمثل بين ش ج-أبتمر وQS. نتائج التهجين جزئية في تبريد غير مكتمل ومضان الخلفية أعلى من أجهزة الاستشعار. إذا كان cycler الحرارية غير متوفر، تنفيذ هذه العملية باستخدام حمام الماء الساخن بدلا من ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تبريده الى 25 درجة مئوية، واستخدامها على الفور الحل، أو الاحتفاظ في cycler الحرارية (تصل إلى حوالي 2 ساعة) حتى يكون على استعداد لمستعمل. عند استخدام حمام ماء للتدفئة، وترك الأنابيب في الحمام كما الماء يبرد ببطء إلى درجة حرارة الغرفة. </li></ol> 3. بناء منحنى الإسفار المعايرة والكشف عن وجود Unchelated ش ج 3+ في حل من وكيل التباين كلمة المدير العام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل GdCl 3 الصلبة في المخزن المؤقت فحص (المخزن نفسه كما في الخطوة 2.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من خلال التخفيف المتسلسل، وإعداد 100 ميكرولتر كل من 6 حلول ش ج 3+ مختلفة في أنابيب microcentrifuge في ضعف تركيز المطلوب النهائية لمنحنى المعايرة (2X الحلول). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على سبيل المثال، لإنشاء معايرة ل0 (العازلة فقط مع عدم وجود GdCl 3)، 50، 100، 200، 400، و 800 نيوتن متر من ش ج 3+، وإعداد الحلول التي تحتوي على 0، 100، 200، 400، 800، و 1،600 نيوتن متر من أيون. تأكد من تضمين دائما &quot;فارغة&quot; مع 0 نانومتر ش ج 3+ كما سيطرة سلبية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كيل النقيض أن يكون الاختبارإد في المنطقة العازلة الفحص. إعداد 2 أو 3 تركيزات مختلفة من الحلول عامل تباين عبر التخفيف المتسلسل. ملاحظة: اختبار 3 تركيزات مختلفة من الحل وكيل النقيض من المستحسن. هذا هو التأكد من أن هذه التركيزات ضمن نطاق خطي. إذا كانت العينات المختبرة لا تعرض وجود علاقة خطية، والحد من تركيز وكيل النقيض المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ أنابيب PCR يحتوي الحل 2X ش ج استشعار من الخطوة 2.5 من cycler الحرارية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر من كل كلمة المدير العام 3+ حل من الخطوة 3.2 إلى 6 من 9 أنابيب PCR يحتوي الحل 2X ش ج استشعار. مزيج من قبل pipetting صعودا وهبوطا. يحتوي كل أنبوب PCR الآن التركيز المطلوب من ش ج 3+ لفحصها، و 100 نيوتن متر ش ج-أبتمر، و 200 نانومتر QS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للأنابيب PCR المتبقية التي تحتوي على 2X حل كلمة المدير العام أجهزة الاستشعار، وإضافة 50 ميكرولتر من الحلول وكيل النقيض من الخطوة 3.3. مزيج جيد من قبل pipetting صعودا وهبوطا عدة مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الصورةolutions في أنابيب PCR لحوالي 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قد يكون من اليسار إلى الوقوف لمدة تصل إلى 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 45 ميكرولتر من كل أنبوب في لوحة 384 جيدا. وسيكون لكل أنبوب PCR تعطي الآبار مكررة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل مضان من كل بئر على طبق من ذهب للقارئ. وfluorophore (فام) المستخدمة في تصميم ش ج-أجهزة الاستشعار لديها الإثارة وانبعاث قصوى تبلغ 495 و 520 نانومتر على التوالي، كما هو موضح على الموقع الإلكتروني للمورد. اختيار المناسبة الإثارة وانبعاث موجات أو مرشحات اعتمادا على ما إذا كان قارئ اللوحة هو monochromator- أو القائم على التصفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم بياني من مضان في وحدات مضان التعسفية (AFU) ضد تركيز ش ج 3+. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم بياني مع تغير مضان أضعاف ضد تركيز ش ج 3+. حساب التغير مضان أضعاف بقسمة AFU كل تركيز من قبل AFU من الحل &quot;فارغ&quot; (مع 0 نانومتر ش ج 3+). فإن التغيير مضان أضعاف تسمح للنormalization من النتائج، ينبغي عرض AFU بعض دورية (أيام مختلفة، وما إلى ذلك) الاختلافات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة الانبعاثات مضان من محلول يحتوي على عامل تباين و&quot;فارغة&quot;، وهو محلول يحتوي على 0 نانومتر GdCl 3 (العازلة فقط). ملاحظة: مضان أعلى من الحل GBCA يعني وجود unchelated ش ج 3+، والتي قد تتطلب المزيد من تنقية وكيل التباين. ويمكن تقدير كمية unchelated ش ج 3+ الحاضر باستخدام منحنى المعايرة التي شيدت في خطوة 3.10 أو 3.11. </li></ol>

<ol><li>Shen, C., New, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promising+strategies+for+Gd-based+responsive+magnetic+resonance+imaging+contrast+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Promising strategies for Gd-based responsive magnetic resonance imaging contrast agents.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 17 (2), 158-166 (2013).</li>
<li>Cheong, B. Y. C., Muthupillai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephrogenic+systemic+fibrosis%3A+a+concise+review+for+cardiologists%5BTitle%5D)+AND+%22Tex.+Heart+Inst.+J%22%5BJournal%5D)">Nephrogenic systemic fibrosis: a concise review for cardiologists.</a> Tex. Heart Inst. J. 37 (5), 508-515 (2010).</li>
<li>Hao, D., Ai, T., Goerner, F., Hu, X., Runge, V. M., Tweedle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+contrast+agents%3A+basic+chemistry+and+safety%5BTitle%5D)+AND+%22J+Magn.+Reson.+Imaging%22%5BJournal%5D)">MRI contrast agents: basic chemistry and safety.</a> J Magn. Reson. Imaging. 36 (5), 1060-1071 (2012).</li>
<li>Telgmann, L., Sperling, M., Karst, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+gadolinium-based+MRI+contrast+agents+in+biological+and+environmental+samples%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Determination of gadolinium-based MRI contrast agents in biological and environmental samples: a review.</a> Anal. Chim. Acta. 764, 1-16 (2013).</li>
<li>Frenzel, T., Lengsfeld, P., Schirmer, H., Hütter, J., Weinmann, H. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+gadolinium-based+magnetic+resonance+imaging+contrast+agents+in+human+serum+at+37+degrees+C%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Stability of gadolinium-based magnetic resonance imaging contrast agents in human serum at 37 degrees C.</a> Invest. Radiol. 43 (12), 817-828 (2008).</li>
<li>Loreti, V., Bettmer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+MRI+contrast+agent+Gd-DTPA+by+SEC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Determination of the MRI contrast agent Gd-DTPA by SEC-ICP-MS.</a> Anal. Bioanal. Chem. 379 (7), 1050-1054 (2004).</li>
<li>Telgmann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Speciation+and+isotope+dilution+analysis+of+gadolinium-based+contrast+agents+in+wastewater%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Speciation and isotope dilution analysis of gadolinium-based contrast agents in wastewater.</a> Environ. Sci. Technol. 46 (21), 11929-11936 (2012).</li>
<li>Cleveland, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatographic+methods+for+the+quantification+of+free+and+chelated+gadolinium+species+in+MRI+contrast+agent+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chromatographic methods for the quantification of free and chelated gadolinium species in MRI contrast agent formulations.</a> Anal. Bioanal. Chem. 398 (7), 2987-2995 (2010).</li>
<li>Edogun, O., Nguyen, N. H., Halim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+single-stranded+DNA-based+assay+for+detecting+unchelated+gadolinium%28III%29+ions+in+aqueous+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescent single-stranded DNA-based assay for detecting unchelated gadolinium(III) ions in aqueous solution.</a> Anal. Bioanal. Chem. 408 (15), 4121-4131 (2016).</li>
<li>Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+determine+free+Gd+and+free+ligand+in+solution+of+Gd+chelates.+A+technical+note%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Med.+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note.</a> Contrast Med. Mol. Imaging. 1 (5), 184-188 (2006).</li>
<li>Johansson, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+reporter-quencher+pairs+for+efficient+quenching+through+formation+of+intramolecular+dimers%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing reporter-quencher pairs for efficient quenching through formation of intramolecular dimers.</a> Methods Mol. Biol. 335, 17-29 (2006).</li>
<li>Sherry, A. D., Caravan, P., Lenkinski, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+on+gadolinium+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Reson.+Imaging%22%5BJournal%5D)">A primer on gadolinium chemistry.</a> J. Magn. Reson. Imaging. 30 (6), 1240-1248 (2009).</li>
<li>Shakhverdov, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cross-relaxation+mechanism+of+fluorescence+quenching+in+complexes+of+lanthanide+ions+with+organic+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Spectrosc%22%5BJournal%5D)">A cross-relaxation mechanism of fluorescence quenching in complexes of lanthanide ions with organic ligands.</a> Opt. Spectrosc. 95 (4), 571-580 (2003).</li>
<li>Brittain, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submicrogram+determination+of+lanthanides+through+quenching+of+calcein+blue+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Submicrogram determination of lanthanides through quenching of calcein blue fluorescence.</a> Anal. Chem. 59 (8), 1122-1125 (1987).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

باستخدام كلمة المدير العام استشعار القائم على أبتمر، وزيادة في الانبعاثات مضان أن يتناسب مع تركيز unchelated ش ج 3+ لوحظ. لتقليل كمية العينة المستخدمة، يمكن تشغيل الفحص في صفيحة 384 بشكل جيد مع حجم العينة ما مجموعه 45 ميكرولتر لكل بئر. في هذا التصميم، واختيار فلوريسئين (فام) وdabcyl (DAB) ويستند في المقام الأول على تكلفة الكواشف. لتعديل الطول الموجي الانبعاثات، الاقتران مختلفة من fluorophore وفاكهه تقضي يمكن استخدامها 11. <p class="jove_content" style=";t...

وقد أدت الأهمية المتزايدة للتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) في التشخيص السريري، والذي يحد من حساسية الكامنة في أسلوب في النمو السريع للبحث في تطوير عوامل رواية القائم على الجادولينيوم المقابل (GBCAs) 1. GBCAs هي الجزيئات التي تدار لتحسين جودة الصورة، وأنها عادة ما يكون التركيب الكيميائي للأيون الثلاثي الجادولينيوم (ش ج 3+) منسقة ليجند polydentate. هذا complexation له أهمية حاسمة كما unchelated ش ج 3+ غير سامة. وقد تورط في تطوير تليف النظامية كلوي في بعض المرضى الذين يعانون من أمراض الكلى أو الفشل 2. ونتيجة لذلك، والكشف عن أيون حر مائي غير فعال في ضمان سلامة GBCAs. وجود unchelated ش ج 3+ في حلول GBCA غالبا ما يكون نتيجة رد فعل غير مكتمل بين يجند وأيون، تفكك المجمع، أو displacemenر من قبل غيرها من الكاتيونات المعدنية البيولوجية 3. ومن بين العديد من التقنيات المستخدمة حاليا لتحديد وجود ش ج 3+، أولئك الذين يعتمدون على اللوني و / أو الطيف رتبة أعلى من حيث التنوع وتطبيق 4. بين مواطن القوة لديهم هي حساسية عالية ودقة، والقدرة على تحليل مختلف المصفوفات عينة (بما في ذلك المصل البشري 5 والبول والشعر 6، 7 مياه الصرف الصحي، وتركيبات وكيل النقيض 8)، والكمي في وقت واحد من عدة ش ج 3+ المجمعات (قائمة من الدراسات قبل 2013 الموضح في مراجعة شاملة من قبل Telgmann وآخرون.) (4). لكن العائق الوحيد هو أن العديد من هذه الأساليب تتطلب أدوات القياس (مثل إضافة بالحث مطياف البلازما الشامل) 4 أن بعض المختبرات قد لا يكون الوصول إليها. في سياق اكتشاف GBCA الرواية في البحث ومستويات إثبات صحة مفهوم، عelatively أكثر ملاءمة، والسريع، وفعالة من حيث التكلفة طريقة القائم الطيفية (مثل امتصاص الأشعة فوق البنفسجية فيس أو مضان) قد يكون بمثابة بديل قيمة. مع هذه التطبيقات في الاعتبار، وقد وضعت الفلورسنت القائم على أبتمر الاستشعار عن مائي ش ج 3+ 9. وأبتمر (ش ج-أبتمر) هو 44 قاعدة طويلة واحد الذين تقطعت بهم السبل جزيء الحمض النووي مع تسلسل معين من القواعد التي كانت معزولة من خلال عملية التطور المنهجي للبروابط كتبها تخصيب الأسي (سيليكس) 9. لتكييف أبتمر إلى جهاز استشعار الفلورسنت، ويرد على fluorophore إلى محطة 5 &#39;من حبلا، وهو ما يتم تهجين مع حبلا التبريد (QS) عبر 13 قواعد تكميلية (الشكل 1). والموسومة QS مع جزيء فاكهه تقضي الظلام في &#39;محطة 3. في غياب ش ج 3+، أجهزة الاستشعار (ش ج استشعار)، تتكون من نسبة 1: الخلد 2 ش ج-أبتمر وQS على التوالي، وسيكون الحد الأدنى من الانبعاثات مضان ر المناسبس نقل الطاقة من fluorophore إلى فاكهه تقضي. وإضافة مائي ش ج 3+ تحل محل QS من ش ج-أبتمر، مما أدى إلى زيادة في الانبعاثات مضان. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/55216/55216fig1.jpg" /> الشكل 1. استشعار (ش ج استشعار) التي تتكون من أبتمر 44 قاعدة طويلة (ش ج-أبتمر) الموسومة مع فلوريسئين (أ fluorophore) و13 قاعدة تبريد طويل حبلا (QS) الموسومة مع dabcyl (فاكهه تقضي الظلام) . في غياب unchelated ش ج 3+، مضان من أجهزة الاستشعار هو الحد الأدنى. مع اضافة كلمة المدير العام 3+، تهجير QS يحدث ولوحظ حدوث زيادة في الانبعاثات مضان. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55216/55216fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> هناك في الوقت الحاضر، احد يشيع استخدامها أسلوب قائم على التحليل الطيفي للكشف عنجي مائي ش ج 3+. يستخدم هذا الاختبار البرتقال زايلينول جزيء، والتي تخضع لعملية التحول في أقصى الطول الموجي امتصاص 433-573 نانومتر على عملية إزالة معدن ثقيل إلى أيون 10. نسبة هذين الامتصاصية ماكسيما يمكن أن تستخدم لقياس كمية من unchelated ش ج 3+. أجهزة الاستشعار أبتمر هو بديل (قد تكون أيضا مكملة) لفحص زايلينول البرتقال، وطرق لهما ظروف التفاعل المختلفة (مثل درجة الحموضة وتكوين المحاليل المستخدمة)، الإختياريات الهدف، ويتراوح خطية من تقدير، وطرائق الكشف 9.

يمكن <table><tbody><tr>استخدام <td>تسلسل المدخلات Gd-aptamer</td><td>IDTDNA</td><td>وتعديل الفلوروفور في شكل الترتيب</td><td>A فلوروفور بطول موجة انبعاث مختلف. يمكن أيضا طلب أبتامر من شركة أخرى.</td></tr><tr><td>تبريد حبلا</td><td>IDTDNA</td><td>تسلسل الإدخال وتعديل التبريد في شكل الترتيب</td><td>يمكن استخدام مروي مختلف لنقل الطاقة الأمثل من الفلوروفور. يمكن أيضا طلب أبتامر من شركة أخرى.</td></tr><tr>مياه <td></td><td></td><td>من الدرجة في البيولوجيا الجزيئية</td><td>لا توجد شركة مصنعة محددة ، سواء معالجتها DEPC أو غير DEPC تعمل بشكل جيد بشكل جيد</td></tr><tr><td>كلوريد الجادولينيوم (III) اللامائي</td><td>Strem</td><td>936416</td><td>HEPES السامة</td></tr><tr><td></td><td>فيشر Scientific</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد المغنيسيوم اللامائي</td><td>MP Biomedicals</td><td>0520984480 - 100 جم</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>Acros Organics</td><td>327300025</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم</td><td>فيشر Scientific</td><td>P333-500</td><td></td></tr><tr><td>هيدروكسيد الصوديوم ، الكريات</td><td>فيشر Scientific</td><td>BP359</td><td></td></tr><tr><td>حمض الهيدروكلوريك</td> المسببة للتآكل <td>فيشر Scientific</td><td>SA49</td><td>سامة ومسببة للتآكل</td></tr><tr><td>384 بئر شفة منخفضة من البوليسترين الأسود المسطح القاع ألواح NBS</td><td>لوحات Corning</td><td>3575</td><td>التي هي مناسبة للتألق القراءة مطلوبة.</td></tr><tr><td>Nalgene Rapid-Flow معقم الزجاجة العلوية القابل للتصرف</td><td>Thermo Scientific</td><td>5680020</td><td>سطح الزجاجة مزود بغشاء PES 0.2 ميكرون</td></tr><tr><td>زجاجات معقمة يمكن التخلص منها 250 مل</td><td></td><td>430281</td> يمكن <td>استخدام زجاجة أكبر أو أصغر</td></tr><tr><td>1.5 مل أنابيب</td><td></td><td></td> الطرد المركزي الدقيقة <td>لا توجد شركة تصنيع محددة ، طالما أنها خالية من الحمض النووي والحمض النووي الريبي أنابيب</td></tr><tr><td>0.2 مل PCR</td><td></td><td></td><td>لا توجد شركة مصنعة محددة ، طالما أنها خالية من الحمض النووي والحمض النووي الريبي</td></tr><tr><td>Micropipets</td><td></td><td></td><td>لا توجد شركة تصنيع محددة</td></tr><tr><td>أطراف Pipet (غير مرشح) بأحجام</td><td></td><td></td> مناسبة <td>لا توجد شركة تصنيع محددة ، طالما أنها خالية من DNAse و RNAse</td></tr> <tr><td>< قوية > المعدات < / قوية ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>قارئ الألواح</td><td>Biotek Synergy H1</td><td></td><td>ستعمل قارئات اللوحات من الشركات المصنعة الأخرى بشكل جيد</td></tr></tbody></table>

والاستشعار القائمة على أبتمر لunchelated الجادولينيوم (iii)

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

يتم توضيح طريقة لتحديد وجود أيون الجادولينيوم ثلاثي التكافؤ غير المخلب (Gd3+) في المحلول المائي. غالبا ما يكون Gd3+ موجودا في عينات من عوامل التباين القائمة على الجادولينيوم نتيجة لتفاعلات غير مكتملة بين الترابط والأيون ، أو كمنتج تفكك. نظرا لأن الأيون سام ، فإن اكتشافه له أهمية حاسمة. هنا ، يتم وصف تصميم واستخدام جهاز استشعار قائم على aptamer (Gd-sensor) ل Gd3+. ينتج المستشعر تغييرا مضنوعا استجابة لزيادة تركيزات الأيون، وله حد للكشف في النطاق النانومولار (~ 100 نانومتر مع نسبة إشارة إلى ضوضاء تبلغ 3). يمكن إجراء الاختبار في مخزن مؤقت مائي عند درجة الحموضة المحيطة (~ 7 - 7.4) في صفيحة دقيقة مكونة من 384 بئرا. المستشعر غير متفاعل نسبيا تجاه أيونات المعادن الأخرى ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية مثل أيونات الصوديوم والبوتاسيوم والكالسيوم ، على الرغم من أنه ليس خاصا ب Gd3+ على اللانثانيدات ثلاثية التكافؤ الأخرى مثل اليوروبيوم (III) والتيربيوم (III). ومع ذلك ، لا توجد اللانثانيدات بشكل شائع في عوامل التباين أو الأنظمة البيولوجية ، وبالتالي يمكن استخدام المستشعر لتحديد Gd3+ غير المخلب بشكل انتقائي في الظروف المائية.

ويرد التغيير مضان نموذجي من الحل ش ج استشعار بحضور unchelated ش ج 3+ في الشكل 2. قد يكون رسم انبعاث كما تغير مضان أضعاف (الشكل 2A) أو مضان الخام القراءة (الشكل 2B) في وحدات التعسفي (AFU). كلا المؤامرات تسفر عن منحنيات المعايرة متشابهة جدا مع مجموعة خطية لتركيزات ش ج 3+ أقل من 1 ميكرومتر وتشبع إشارة في&gt; 3 ميكرومتر. الحد من الكشف ~ 100 نيوتن متر مع نسبة 3 الإشارة إلى الضوضاء....

تم وصف استخدام جزيئات بولي ديوكسي نيوكليوتيد (44-mer aptamer) لاستشعار أيون الجادولينيوم (III) غير المخلب في محلول مائي. يتم الكشف عن وجود الأيون من خلال زيادة انبعاث مضان المستشعر.

والاستشعار القائمة على أبتمر لUnchelated الجادولينيوم (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

الهدف العام من هذا المقايسة القائمة على الفلورة هو الكشف عن وجود أيونات الجادولينيوم السامة غير المخلبية في المحاليل المائية التي تحتوي على عوامل تباين التصوير بالرنين المغناطيسي. يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في تسهيل تطوير عوامل تباين التصوير بالرنين المغناطيسي القائمة على الجادولينيوم من خلال توفير وسيلة لضمان النقاء العالي للعوامل المُصنعة. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في قدرتها على الكشف عن تركيزات دون الميكرومولار من الجادولينيوم السام غير المخلبي مع انتقائية عالية نسبيًا مقارنة بكاتيونات المعادن البيولوجية الأخرى.لبدء هذا الإجراء، قم بتحضير منظم المقايسة كما هو موضح في البروتوكول النصي. وباستخدام هيدروكسيد الصوديوم وحمض الهيدروكلوريك، اضبط قيمة pH لتصبح 7.4. بعد ذلك، قم بترشيح المنظم عبر مرشح زجاجة معقم مخصص للاستخدام مرة واحدة مزود بغشاء PES بمسامية 0.2 ميكرون.بعد ذلك، انقل 497 µL من محلول التخزين الخاص بالمقايسة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد. أضف 1 µL من المحلول المخزون المُحضّر من أبتامر الغادولينيوم و 2 µL من المحلول المخزون المُحضّر من QS. انقل 50 µL من محلول مستشعر الغادولينيوم (2X) هذا إلى كل أنبوب من أنابيب PCR التسعة.بعد ذلك، ضع الأنابيب في جهاز التدوير الحراري. اضبط جهاز التدوير الحراري لتسخين العينات إلى 95 °C لمدة خمس دقائق، ثم برد المحاليل ببطء لتصل إلى 25 °C على مدار 15 دقيقة. من المهم تذكر تسخين محاليل مستشعر الجادولينيوم 2X إلى 95 °C، يليه تبريد بطيء حتى درجة حرارة الغرفة قبل إضافة محلول أيون الجادولينيوم.للبدء، قم بإذابة كلوريد الغادولينيوم الثلاثي الصلب في محلول منظم للمقايسة لإنشاء محلول مخزون من الغادولينيوم الثلاثي بالتركيز المطلوب. وباستخدام التخفيف التسلسلي، قم بتحضير ستة محاليل من الغادولينيوم الثلاثي بحجم 100 µL كما هو موضح في البروتوكول النصي. بعد ذلك، قم بإذابة عامل التباين المراد اختباره في محلول منظم للمقايسة.استخدم التخفيف المتسلسل لتحضير ثلاثة تركيزات مختلفة. بعد ذلك، قم بإزالة أنابيب PCR التي تحتوي على محلول مستشعر الجادولينيوم 2X من الجهاز الدوري الحراري. انقل 50 µL من كل محلول جادولينيوم إلى أنابيب PCR منفصلة.استخدم الماصة لسحب ودفع كل محلول عدة مرات لخلطه. بعد ذلك، انقل 50 µL من كل محلول عامل تباين بشكل منفصل إلى أنابيب PCR المتبقية. اخلط المحاليل عن طريق السحب والدفع بالماصة عدة مرات.تُحضن جميع المحاليل التسعة لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، يتم نقل 45 µL من كل محلول إلى طبق يحتوي على 384 بئراً في مكررات ثنائية. ثم يتم تسجيل وتحليل بيانات الفلورة كما هو موضح في البروتوكول النصي.في هذه الدراسة، يتم الكشف عن أيون الغادولينيوم ثلاثي التكافؤ غير المخلبي في محلول مائي باستخدام طريقة تعتمد على الفلورة. تم تطوير المستشعر الفلوري عن طريق ربط فلوروفور بالأبتامر. بعد ذلك، يتم تهجين المستشعر مع شريط إخماد مُوسوم بجزيء إخماد مظلم.تؤدي إضافة gadolinium three إلى إزاحة شريط الإخماد عن الأبتامر، مما يتسبب في زيادة انبعاث الفلورة. يتم الحصول على منحنيات المعايرة باستخدام 100 nanomolar من أبتامر gadolinium و 200 nanomolar من QS، ويتم رسمها إما كفلورة خام أو كنسبة تغير في الفلورة. يظهر كلا المنحنيين نطاقاً خطياً لتراكيز gadolinium three الأقل من 1 micromolar وتشبعاً في الإشارة عند تراكيز تتجاوز 3 micromolar.يتم بعد ذلك تحليل دفعتين مختلفتين من حمض الجادوتيريك بتركيزات تتراوح من 0 millimolar إلى 20 millimolar. وبينما لا يزداد انبعاث الفلورة في العينة عالية النقاء بشكل ملحوظ عبر هذا النطاق، يُلاحظ تغير كبير في العينة التي تحتوي على الجادولينيوم الثلاثي غير المخلبي بتركيزات منخفضة تصل إلى 5 millimolar. وعند محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم التأكد من عدم وجود فقاعات هواء في آبار اللوحة الدقيقة، لأن ذلك سيؤدي إلى تغيير قراءة الفلورة.باستخدام هذا الإجراء، قد نتمكن من الكشف حتى عن كميات صغيرة من أيونات gadolinium المحسوبة في المحاليل التي تحتوي على عوامل التباين. ستكون هذه طريقة جيدة لتحديد نقاء هذه العوامل. قد يكون العمل مع المواد الكيميائية خطيراً، لذا فإن اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء معدات الوقاية الشخصية أمر ضروري أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

an-aptamer-based-sensor-for-unchelated-gadolinium-iii

Research

JoVE Journal

Chemistry

الكيمياء

نبدي metalation ، والتنقية ، وتوصيف المجمعات اللانثينيدات. يمكن للمجمعات وصفها هنا لتكون الجزيئات مترافق لتمكين تتبع هذه الجزيئات باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي.

تحضير وتنقية وتوصيف انثانيد المجمعات للاستخدام وكلاء والتباين للتصوير بالرنين المغناطيسي

لإثبات السرطان MR التصوير الجزيئي مع الببتيد الصغيرة المستهدفة التصوير بالرنين المغناطيسي وكيل النقيض محددة لبروتينات البلازما في متخدر سدى الورم في الفأر نموذج البروستاتا السرطانية.

MR التصوير الجزيئي للسرطان البروستاتا مع وكيل النقيض المستهدفة الجزيئية الببتيد الصغيرة CLT1

يتم توفير بروتوكول لتحديد أجهزة تبديل الهيكل لأهداف الجزيئات الصغيرة بناء على طريقة اختيار حبة مغناطيسية صارمة قابلة للضبط. تعتبر Aptamers المختارة بخصائص تبديل الهيكل مفيدة للمقايسات التي تتطلب تغييرا توافقيا للإشارة إلى وجود هدف ، مثل مقايسة الجسيمات النانوية الذهبية الموصوفة.

منهج في اختيار الأبتامرات تبديل الهيكل تطبيقها على اللونية الذهب جسيمات متناهية الصغر الفحص

يصف هذا البروتوكول تخليق الجسيمات النانوية الزرقاء البروسية الوظيفية بيولوجيا واستخدامها كعوامل تصوير جزيئية متعددة الوسائط. تتميز الجسيمات النانوية بتصميم غلاف أساسي حيث تولد أيونات الجادولينيوم أو المنغنيز داخل قلب الجسيمات النانوية تباين التصوير بالرنين المغناطيسي. يحتوي الغلاف الوظيفي الحيوي على الفلوروفورات للتصوير الفلوري واستهداف الروابط للاستهداف الجزيئي.

Biofunctionalized البروسية الأزرق النانوية الجزيئية لالمتعدد الوسائط تطبيقات التصوير

وقد وضعت AN-مصمم خصيصا القائم على الليزر جهاز التدفئة MRI متوافق مع توفير التدفئة المحلية الأورام تحت الجلد من أجل تفعيل الافراج عن وكلاء من الجسيمات الشحمية للحرارة على وجه التحديد في منطقة الورم.

مصمم خصيصا القائم على الليزر التدفئة جهاز لإطلاق الحفز من سيسبلاتين من حساس للحرارة الليبوزومات مع الرنين المغناطيسي الإرشاد صورة

تم فحص تصميم وتطوير أبتمر الذهب فحص جسيمات متناهية الصغر اللونية للكشف عن جزيئات صغيرة للتطبيقات في الميدان. بالإضافة إلى ذلك، تم التحقق من صحة تطبيق اللونية جهاز ذكي (التطبيق) وتأسست تخزين طويل الأجل للمقايسة لاستخدامها في هذا المجال.

تصميم وتطوير أبتمر الذهب الجسيمات النانوية وبناء اللونية فحوصات للتطبيقات الموجودة على الشبكة العالمية الحقل

إجراء لعزل EOB-DTPA وcomplexation لاحق مع جورجيا الطبيعي (III) و 68 ويرد جا هنا، فضلا عن تحليل شامل لجميع المركبات والتحقيقات على الكفاءة وصفها، في المختبر الاستقرار والأوكتانول N- / المياه معامل التوزيع للمجمع رديولبلد.

التحقيقات في جورجيا (III) مجمع EOB-DTPA وه<sup&gt; 68</sup&gt; جورجيا رديولبلد التناظرية

يصف هذا البروتوكول إعداد وتوصيف وكيل النقيض dendrimeric التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) الذي يحمل يخلب macrocyclic أساس cyclen للتنسيق بين أيونات ممغطس الجادولينيوم. في سلسلة من التجارب التصوير بالرنين المغناطيسي في المختبر، أنتج هذا العامل إشارة التصوير بالرنين المغناطيسي تضخيم بالمقارنة مع التناظرية أحادى متاحة تجاريا.

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف وكلاء التباين القائم Dendrimer للتصوير بالرنين المغناطيسي

ويرد وضع بروتوكول للتحديد في المختبر وتوصيف الابتامرات الحمض النووي ملزم إستر حامض فثاليك الخاصة بالمجموعة. ويرد أيضا تطبيق ابتمر المحدد في أبتاسينسور الكهروكيميائية.

اختيار ابتمر الحمض النووي ملزم إستر حامض فثاليك وتوصيف وتطبيق أبتاسينسور الكهروكيميائية

نقدم هنا، وضع بروتوكول للحصول على68Ga أكسيد الحديد يخدر الأساسية جسيمات نانوية عن طريق سريع الميكروويف يحركها التوليف. المنهجية يجعل الحيوانات الأليفة/(تي1) التصوير بالرنين المغناطيسي الجسيمات النانوية مع راديولابيلينج كفاءات أعلى من 90% والكيمياء الإشعاعية نقاء 99% في توليفة 20 دقيقة.

التوليف من 68Ga جسيمات نانوية أكسيد الحديد يخدر الأساسية للتصوير المقطعي بانبعاث البوزيترون المزدوج/التصوير الرنين المغناطيسي (تي1)

يصف هذا البحث العملية الآلية لإنتاج [68Ga] Ga-3BP-3940 باستخدام مركب GAIA V2 ، لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لبروتين تنشيط الخلايا الليفية. كما يتم عرض نتائج اختبارات مراقبة الجودة التي أجريت على ثلاث دفعات اختبار.

التحضير الآلي ل [68Ga] Ga-3BP-3940 على وحدة توليف لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني للبيئة المكروية للورم

اكتشف طريقة كشف فلورية للكشف عن أيونات الجادولينيوم غير المخلبية السامة في المحاليل المائية باستخدام أبتامرات البوليديوكسي نوكليوتيد. تضمن هذه التقنية الكشف بتركيزات دون الميكرومول مع ارتفاع الانتقائية.

والاستشعار القائمة على أبتمر لUnchelated الجادولينيوم (III)

استكشف المزيد من الفيديوهات