المستهدفة في الموقع الطفرات من هيستون الجينات في مهدها الخميرة

الهدف العام من هذا الإجراء هو توليد طفرات محددة في جينات الهيستون في مواقعها الكروموسومية الداخلية في خلايا الخميرة الناشئة. يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد مساهمة بقايا هيستون محددة في مجموعة متنوعة من العمليات التي تستخدم الكروماتين كركيزة ، مثل نسخ الحمض النووي ، كل مجموعة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن استهداف جينات هيستون معينة للطفرات على الرغم من حقيقة أنه في الخميرة ، يتم ترميز كل بروتين هيستون بواسطة جينين متماثلين للغاية وغير أليليين.

بعد توليد سلالة خميرة مع إخراج جين الهيستون المستهدف واستبداله ب URA3 ، قم بإنشاء منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل لجزأين متداخلين جزئيا من جين الهيستون المستهدف عن طريق إعداد التفاعل التالي للنصف الأول من الجين. بالنسبة للنصف الثاني من الجين ، قم بإعداد تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل مماثلا باستخدام بادئات مختلفة. ضع التفاعلات في جهاز تدوير حراري وقم بإعداد البرنامج التالي.