October 3rd, 2017
نماذج حيوانية لتصلّب الشرايين أساسية لفهم الآلية والتحقيق في النهج الجديدة لمنع تطوير اللوحة أو تمزق، سبب الرئيسي للوفاة في العالم الصناعي. هذا البروتوكول يستخدم مزيجاً من الإصابة بالون وحمية الكولسترول الغنية للحث على لويحات تصلب الشرايين في شريان حرقفي الأرانب.
الهدف العام من هذا الإجراء هو الحث على تكوين لويحات تصلب الشرايين في الأرانب عن طريق تعطيل بطانة الشرايين الحرقفية اليسرى جراحيا ، وإطعامهم نظاما غذائيا تصلب الشرايين. غالبا ما يتم إجراء إصابة وحيدة في الأرانب في الشريان الأورطي لدراسة تكوين البلاك. ومع ذلك ، فإن الشريان الحرقفي يشبه إلى حد بعيد الشريان التاجي البشري ، مما يجعله مكانا جذابا لنمذجة لويحات تصلب الشرايين.
المحتوى العضلي ، والآفات الموحدة ، ونشاط عامل أنسجة العين ، والأبعاد الوعائية المتسقة للشريان الحرقفي للأرانب كلها قابلة للمقارنة مع الشريان التاجي البشري. في النهاية ، يسمح هذا بتقييم الأجهزة المصنعة تجاريا إلى نقاط النهاية المورفولوجية والأوعية. سيوضح الإجراء أوريليان فروبرت ، متعاون من مختبري.
تأكد من تعقيم جميع الأدوات الجراحية باستخدام ، على سبيل المثال ، معقم الخرز الزجاجي. بعد ذلك ، قم بإعداد وفحص مجموعتي قسطرة البالون. على كل واحدة ، قم بتوصيل حقنة قفل Luer سعة ملليلتر واحد مملوءة بالمحلول الملحي العادي ، ثم تحقق من وجود شعارات محاصرة باستخدام آلية نفخ البالون.
بعد ذلك ، اضبط الوسادة الحرارية على المنصة الجراحية على 37 درجة مئوية. ثم تزن الأرنب. بعد ذلك ، قم بإعطاء حقنة من البوبرينورفين وتخدير الأرنب باستخدام 5٪ من الأيزوفلوران بمعدل خمسة لترات في الدقيقة لمدة 10 إلى 15 دقيقة.
الآن ، ضع الأرنب المخدر على وسادة التدفئة على منصة جراحية. قم بتوصيل أجهزة استشعار لمراقبة درجة حرارة الأرنب وتنفسه وجمع مخططات كهربية القلب. بعد ذلك ، قم بتوصيل قناع الوجه لتوصيل 4٪ من الأيزوفلوران بمعدل 2.5 لتر في الدقيقة.
ثم تأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق اختبار فقدان الهفوة وردود الفعل التافهة. تعتبر قوة العضلات المسترخية عالميا أيضا مؤشرا على التخدير العميق. بعد ذلك ، ضع مرهم أبتونيك على كلتا العينين.
بعد ذلك ، قم بإزالة الشعر من المنطقة البطنية أسفل مفاصل الركبة مباشرة باستخدام مقصات شعر. بعد ذلك ، قم بإزالة الشعر المتساقط وتنظيف الجلد المكشوف بثلاثة مقشرات متناوبة من 70٪ من الإيثانول والبيتادين وثني مع ترك الطرف السفلي فقط مكشوفا. لبدء الجراحة ، حدد موقع الشريان الصافن وقم بعمل شق 1.5 سم.
ثم باستخدام ملقط منحني صغير ، يكشف بعناية جزءا صغيرا من الشريان الصافن. احرص على تجنب تلف الوريد الفخذي أو العصب الفخذي. تنظيف الشريان جيدا مهم جدا أثناء هذا التعرض.
بعد ذلك ، ضع حلقتين من الرباط السائب أسفل الشريان الصافن واربط حلقة رباط واحدة بالقرب من الطرف البعيد للشريان. ثم ضع بعض المشبك الوعائي الدقيق على طول الشريان فوق الرباط وأغلق المشبك لإيقاف تدفق الدم. ضع على الفور قطرة من البابافيرين لتوسيع الشريان ومنع تشنجات الطور.
بعد ذلك ، باستخدام الرباط ، ارفع الشريان الصافن وقم بعمل شق صغير لبضع الشرايين باستخدام إبرة قياس 24. ثم ارفع اللوحات الشقية وأدخل ببطء معقا وريديا أو إبرة توجيهية في تجويف الشريان. الآن ، أدخل قسطرة استئصال الصمة الشريانية بعناية في الشريان الصافن.
كن لطيفا لتجنب حدوث تمزق. ثم قم بإزالة الوريد وحرر المشبك الوعائي الدقيق على الشريان. لإحداث الإصابة ، قم أولا بدفع قسطرة البالون إلى العلامة الثالثة.
يجب أن يضع هذا ما يقرب من سنتيمترين إلى خمسة سنتيمترات فوق التشعب الحرقفي. بعد ذلك ، قم بتضخيم البالون ب 0.1 مل من المحلول الملحي العادي. الآن ، قم بقص القسطرة واسحبها للخلف ستة سنتيمترات أثناء تدويرها لإتلاف الأنسجة.
بمجرد التراجع ، قم بتفريغ البالون. ولضمان التوسع الكامل للبطانة ، كرر العملية مرتين أخريين. ثم قم بإزالة القسطرة واربط حلقة الرباط على الفور فوق موقع بضع الشرايين مباشرة لوقف النزيف.
بعد ذلك ، ضع مطهر مناسبا حول ثقب الجرح وقم بمسح جلطات الدم. أخيرا ، أغلق شق الجلد وقم بتطهير موقع الجراحة بمحلول بوفيدون اليود. ثم كرر الإجراء الجراحي بأكمله على الشريان الحرقفي المقابل باستخدام القسطرة الثانية.
بعد الجراحة ، قم أولا بتنظيف مرهم الأبتون من جوانب الأرنب. ثم قم بإعطاء السلفادوكسين والتريميثوبريم. ثم انقل الأرنب باستخدام وسادة الرأس إلى قفص استرداد نظيف ورقعة مراقبة ومشابك.
بمجرد أن يستعيد الاستلقاء الخارجي ويتجول ، أعده إلى قفص منزله. لإدارة الألم ، قم بتوفير البوبرينورفين. الآن ، ابدأ في إطعام بنظام غذائي تصلب الشرايين طالما دعت الحاجة.
لحصاد الكتان الرقيق المبكر ، بعد أسبوعين أو أربعة أسابيع من الجراحة ، قم أولا بتخدير الأرنب ثم القتل الرحيم للأرنب بشق بين الكاردينال. بعد ذلك ، افتح البطن وفضح خلف الصفاق. ثم تتبع الشريان الأورطي باتجاه التشعب الحرقفي واربطه فوق التشعب.
اتبع ذلك بإزالة الأنسجة المحيطة بعناية وعزل الشرايين الحرقفية. الآن قم بتشريح كلا الشرايين وغمرهما في PBS المثلج. في ذلك قم بإزالة الجلطات باستخدام الملقط وقسم كل شريان إلى 46 قطعة.
ثم قم بتضمين الأجزاء على الفور في قالب يحتوي على مركب OCT وقم بتقطيع أنسجة التجميد في النيتروجين السائل. قم بتخزين الأنسجة عند 80 درجة مئوية تحت الصفر ثم قم بتلطيخ أقسام بسمك خمسة ميكرون باستخدام المنهجية القياسية. تم إجراء إصابة بالون الشرايين الحرقفية بنجاح دون مضاعفات في أقل من ساعة.
تعافى الأرنب في غضون ساعة واحدة و / أو بدا بصحة جيدة دون فقدان الوزن بشكل كبير. لم تتم مواجهة مضاعفات ما بعد الجراحة. وبعد أربعة أسابيع من النظام الغذائي تصلب الشرايين ، أصيبت الأرانب جميعا بفرط كوليسترول الدم.
أدى الجمع بين إصابة البالون والنظام الغذائي للكوليسترول إلى تغيرات هيكلية في جدار الوعاء الدموي مما أدى إلى تطور الشرايين الكلورية في غضون أسبوعين. تم عزل الشرايين الحرقفية غير المصابة والمصابة بالبالون من نفس ومقارنتها. تميز الكتان بتسلل الدهون وكذلك هجرة صوت العضلات الملساء وانتشارها.
يستمر الكتان في النمو في الأوعية المصابة بينما يستمر حجم التجويف في الانكماش. كانت التغييرات الناتجة واضحة جدا لمدة أربعة أسابيع. بعد أسبوعين وأربعة أسابيع ، كشف القياس الكمي المورفومتري عن زيادة سماكة الوسط البطاني ، وزيادة مساحة البلاك ، وانخفاض مساحة التجويف ، وأخيرا زيادة في تراكم الدهون.
يتفاعل تلطيخ الجسم المضاد للأكتين في العضلات الملساء ألفا مع الأكتين العضلي ، وبالتالي تحديد خلايا العضلات الملساء الوعائية. بينما يكشف التلوين بأكثر من 11 جسما مضادا أحادي اللونة عن سيتوبلازم الضامة. تكشف البقع معا عن مدى تكاثر خلايا العضلات الملساء والبلاعم في لويحات تصلب الشرايين في الأوعية المصابة.
بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لسلامة السيارات وإجراء إصابة عنيفة بسهولة على الشرايين الحرقفية للأرنب. تؤدي هذه الإصابة مع النظام الغذائي الشرايين إلى تطور اللويحات للشرايين الحرقفية في طريقة متجانسة في الوقت المحدد.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
يصف هذا البروتوكول طريقة لإحداث لويحات تصلب الشرايين في الأرانب عن طريق الإخلال الجراحي ببطانة الشرايين الفخذية اليسرى وتغذيتهم على نظام غذائي مسبب لتصلب الشرايين. تم اختيار الشريان الفخذي نظرًا لتشابهه مع الشريان التاجي البشري، مما يجعله نموذجًا مناسبًا لدراسة تطور اللويحة.
The rabbit iliac artery balloon injury model accelerates atherosclerotic plaque development, enabling rapid assessment of therapeutic interventions within a two-week timeframe. This approach supports target validation and mechanistic de-risking in cardiovascular drug discovery by providing a reproducible, disease-relevant system that mimics human coronary pathology. The model enhances predictive confidence in preclinical studies by delivering quantifiable morphometric and angiographic endpoints for evaluating drug efficacy and safety.
The model fits within the cardiovascular discovery continuum, supporting early target validation through to preclinical efficacy assessment by providing a rapid, quantifiable atherosclerosis model.