استخدام خط وريدي المركزي للسوائل والمخدرات وإدارة المغذيات في نموذج الفأر من الأمراض الخطيرة

الهدف العام من طريقة الفئران المصنفة مركزيا لربط البزل الرأسي ، أو CLP ، هو إنشاء نموذج قابل للتكرار للأمراض الخطيرة لفترات طويلة مع تدابير العناية المركزة لتقليد البيئة السريرية البشرية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات طب العناية المركزة. حول التسبب في الغدد الصماء والتغيرات الأيضية أثناء الأمراض الخطيرة الحادة والمطولة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تجمع بين تقنية CLP الموحدة جيدا واستخدام خط وريدي مركزي لإعطاء السوائل والأدوية والمغذيات. سيوضح هذا الإجراء توماس دوفور ، فني من مختبرنا. لتحضير طرف الخط الوريدي ، اغمر بسرعة الجزء الأوسط من قطعة من أنابيب ريناثان دقيقة 60 سم في 220 درجة مئوية أو زيت السمسم الأكثر سخونة.

اسحب أطراف الأنبوب برفق لتمديد منتصف الأنبوب ، لإنتاج قطر مركزي ضيق واستخدم شفرة مشرط لتقطيع الأنبوب إلى قطعتين متساويتين بطول 30 سم. الآن ، قم بتوصيل الأنبوب بموصل البولي إيثيلين PE 50 ، وإبرة دوارة وإبرة كعب لور ، لبناء القسطرة كما هو موضح وتطبيق غراء لاصق قوي سريع المفعول على جميع التوصيلات. عندما يتم معالجة الغراء ، اغسل القسطرة بالهواء ، للتحقق من التسرب ، بعد ذلك ، قم بقص قطعة 80 سم من سلك معدني قطره 0.8 مم ، وقم بطي السلك مرة أخرى على نفسه لعمل حلقة.

قم بقيادة ثلاث لآلئ فوق السلك المزدوج للحلقة ، وقم بتوجيه طرف القسطرة المعقمة عبر اللآلئ الثلاثة ، لربط القسطرة بالسلك. تخدير 27 إلى 32 جراما ، 24 أسبوعا ذكر c57 أسود ستة فأر ، وتأكد من التخدير من خلال عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم. استخدم الملقط لسحب اللسان برفق من الفم لتجنب ابتلاع اللسان.

بعد ذلك ، احلق المنطقة الجراحية ، ثم ضع الماوس في وضع الانبطاح على وسادة تسخين دافئة مسبقا. تطهير الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول وتطبيق كمية صغيرة من زيوت تشحيم العيون. تسلل إلى المواقع الجراحية مع التسكين وقم بعمل شق صغير في قاعدة الجانب الظهري من الرأس.

كشف عضلات عنق الرحم الخلفية ، وقم بربط قطعة من النايلون 3.0 تحت العضلات لربط حلقة سلك التعلق بالعضلة. بعد ذلك ، مع وجود الماوس على جانبه الأيمن ، قم بعمل شق رأسي صغير في جلد الرقبة البطنية. نفق إبرة قياس 18 تحت الجلد من خلال هذا الشق البطني باتجاه الشق الموجود في الظهر وقم بتمرير القسطرة عبر الإبرة لإخراج الإبرة من الجانب

مع وضع الماوس على ظهره ، مرر خيطا من النايلون بثلاثة صفر خلف أسنان القواطع العلوية وقم بلصق النايلون على وسادة التسخين. ثم قم بتأمين الذيل والأطراف الأمامية في وضع ممدود. الآن ، ركز مجهر التشريح واستخدم الملقط لإزالة الأنسجة الدهنية والغدد في الشق البطني برفق حتى يمكن تصور الوريد الوداجي.

ضع طرف الملقط بين الوريد والنسيج الضام ، وافتح الملقط بشكل متكرر بالتوازي مع الوريد لتشريح الوريد الوداجي بشكل صريح خال من النسيج الضام وتحت الجلد حول الوعاء الدموي. عندما يتم عزل الوعاء ، ضع الملقط الحاد تحت الوريد الوداجي وقم بتغذية قطعتين من ثلاثة خيوط حريرية صفرية تحت الوريد. وضع قطعة واحدة ، تقريبية لتشعب الوريد الوداجي للرباط القحفي وقطعة واحدة بالقرب من العضلة القصية الترقوية الخشائية للرباط الذيلي.

شد الأربطة القحفية والذيلية لتمديد الوريد ومنع النزيف المفرط أثناء وضع القسطرة. استخدم خيطا ثالثا لإنشاء رباط فضفاض ، ثم باستخدام مقص دقيق ، قم بعمل شق على طول الوريد بين الأربطة القحفية والذيلية كبيرة بما يكفي لتمرير القسطرة. باستخدام الملقط ، أدخل القسطرة 11 ملم في الوريد وقم بتأمين القسطرة بشكل غير محكم بالرباط الأوسط.

اغسل القسطرة برفق بمحلول ملحي معقم للتأكد من وضعها الصحيح. ثم شد بقوة الرباط الذيلية والوسطى. اربط طرفي الأربطة الذيلية والوسطى معا لتأمين القسطرة.

التأكد من أن الوريد غير مسدود بالعقدة ، عن طريق تنظيف القسطرة بعد كل ربطة عنق. أخيرا ، قم أيضا بربط الرباط الجمجمي. ثم أغلق الشق بخمس خيوط حريرية صفرية.

بالنسبة للربط والثقب الرأسي ، قم بعمل شق خط الوسط بطول سنتيمتر واحد عبر جلد النصف السفلي من البطن ، مع الحرص على عدم اختراق التجويف البريتوني. بعد تحديد linea alba في عضلات البطن. قم بعمل شق بين العضلات للدخول إلى التجويف البريتوني.

باستخدام ملقط تشريحي حاد ، قم بعزل الأعور وإخراجه من الخارج. اربط الأعور بنسبة 50٪ من طوله بثلاث خيوط حريرية صفرية ، مع الحرص على عدم تضييق الصمام اللفائفي ، بحيث يتم الحفاظ على استمرارية الأمعاء. بعد ذلك ، استخدم إبرة قياس 18 لثقب الأعور بثقب واحد من خلال وعبر ثقب في منتصف الطريق بين الربط وطرف الأعور ، وبثق كمية صغيرة من البراز من الحفرة ، لضمان سالكية بعد إزالة الإبرة.

أعد وضع الأمعاء في تجويف البطن ، وأغلق الصفاق والجلد بخمس خيوط حريرية صفرية. مع وضع الماوس في وضع ضعيف ، قم بلصق القسطرة على سلك التوصيل. ثم ضع الماوس في قفص فردي به مواد تعشيش وكتلة خشبية.

باستخدام حامل بمشبك قابل للتعديل ، ضع الجهاز الدوار في المشبك وقم بلصق الجزء الحر من سلك التثبيت المعدني بإحكام على نقطة دوران الدوار. بعد ذلك ، ضع القفص في خزانة يتم التحكم في درجة حرارتها بدرجة حرارة 27 درجة مئوية مع 12 ساعة من دورات الضوء والظلام. قم بتوصيل المحقنة التي تحتوي على الخليط المناسب من الغرويات المتوازنة والبلورات في الخط الوريدي واستخدم مضخة تسريب دقيقة مدفوعة بالحقنة ، لبدء إنعاش السوائل بسرعة 0.3 ملم في الساعة.

بعد ست ساعات ، حقن التسكين والمضادات الحيوية. يكشف تحليل منحنيات البقاء على قيد الحياة لمدة خمسة أيام ، وتجربة ربط ثقب الرأس لمدة سبعة أيام ، أن معدلات البقاء على قيد الحياة لم تكن مختلفة بشكل كبير بين الدراستين حتى اليوم الخامس ، مما يؤكد قابلية استنساخ الإعداد التجريبي. يؤدي ربط 50٪ من الأعور بالاشتراك مع المضادات الحيوية وإنعاش السوائل والتغذية الوريدية الكاملة عبر قسطرة وريدية في الوريد الوداجي إلى 13٪ من الوفيات بعد يوم واحد من المرض الخطير.

24٪ وفيات بعد ثلاثة أيام من المرض الخطير ، و 27٪ إلى 31٪ الوفيات بعد خمسة أيام من المرض الحرج و 36٪ الوفيات بعد سبعة أيام من المرض الخطير. ومع ذلك ، فإن الفئران التي تغذت على الفئران السليمة التي كانت تقتصر على تناول المغذيات للفئران المصابة بأمراض خطيرة ، لم تظهر أي وفيات في أي من التجربتين. بعد 10 إلى 15 لإتقان هذه التقنية ، يمكن وضع القسطرة ويمكن إجراء CLP على مدى 45 دقيقة ، إذا تم تنفيذ الإجراءات بشكل صحيح.

عند إجراء هذا الإجراء ، تذكر وضع القسطرة في الوريد بعناية. وضع القسطرة بعيدا جدا في القلب ، سيؤدي إلى عدم انتظام ضربات القلب. بوضعه ليس بعيدا بما فيه الكفاية ، يمكن سحبه بسهولة.

تأكد دائما من وضع القسطرة داخل تجويف الوعاء. إذا تم وضع القسطرة داخل طبقات جدار الوعاء الدموي ، فسوف تتسرب السوائل إلى الأنسجة المحيطة. قد يتطلب هذا النموذج إجراء جراحيا مكثفا وعناية مركزة يومية للحيوان.

لكنه ينتج عنه نموذج مستقر وقابل للتكرار يسمح بدراسة العديد من جوانب الأمراض الخطيرة الحادة والمطولة.