نموذج قلب مقلوب لجمع الخلالي الخلالي من القلب المعزول الجرذ

الهدف العام لنموذج القلب المقلوب هذا هو جمع الخلال الخلالي القلبي من قلب الفئران المعزولة. داخل القلب النابض ، يطلق الإحساس الفردي للقلب عوامل paracrine وتطلقها في مساحة السائل الخلالي المحيطة. هذا مهم ، لأن مساحة السائل الخلالي ، تحمل معلومات للاتصال بين خلايا القلب.

وهذا مهم بشكل خاص في ظل ظروف التهاب وتجديد عضلة القلب الاحتشية. في هذا الفيديو، سوف يعرض لكم المتعاونون معي، الدكتور دينغ وتان، التقنيات التي نجمع بها هنا، في هذا الحب الآه-حب، السائل الخلالي من سطح قلب الفئران المعزول. لجعل غطاء قلب اللاتكس ، أو الغطاء ، يحتوي على قالب من الألومنيوم يتناسب مع متوسط حجم قلب الفئران وقد تم صقله بورق صنفرة فائق النعومة.

قم بتثبيت عنق القالب عموديا على آلة الطحن وابدأ في تدوير القالب ببطء. بعد ذلك ، اسكب 20 مل من اللاتكس السائل في دورق زجاجي سعة 50 مليلتر ، وقم بخفض القالب الدوار في مادة اللاتكس حتى يغمر. بعد ذلك ، ارفعه ببطء واستمر في تدوير القالب لمدة 15 دقيقة إضافية حتى يتجمد اللاتكس.

يعد الدوران أمرا حيويا لصنع هذا الموس وتوزيع طبقة اللاتكس السائل بالتساوي على سطح القالب. لذا ، تأكد من أن القالب يدور أثناء رفعه من مادة اللاتكس. بمجرد أن يجف اللاتكس ، قم بتغطية اللاتكس بمسحوق التلك لمنع تلف اللاتكس.

أوقف الدوران ، ثم افصل القالب برفق عن الماكينة. قم بإزالة اللاتكس بعناية من القالب. الآن ، قم بإرفاق أنبوب السيليكون بطول 25 سم بالمخرج الموجود على غطاء اللاتكس.

يستخدم هذا الأنبوب لجمع ترانسودات القلب الخلالي ، أو التصوير المقطعي المحوسب. بعد ذلك ، قم بتوصيل البالون البطيني بحجم الفئران بإحكام على قنية معدنية على شكل حرف L ، متصلة بحقنة مملوءة بالماء سعة ملليلتر واحد. واملأ بالون البطين بحجم الجرذ بالماء. تأكد من أن البالون محكم الإغلاق عن طريق نفخه وتفريغه عدة مرات باستخدام المحقنة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل القنية بمحول ضغط ، عبر توقف ثلاثي الاتجاهات. أخيرا ، ضع علامة على المحقنة حيث يملأ البالون تجويف البطين لقياس الضغط داخل البطين. قبل الشروع في تحضير القلب ، قم بتجهيز نظام نضح Langendorff وفقا لبروتوكول النص.

الآن ، بعد التخدير الكامل لفأر ويستار ذكر من 300 إلى 350 جراما ، قم بنقله إلى طاولة عمليات بدرجة حرارة الغرفة. مع الخبرة ، يجب أن تستغرق الخطوات التالية التي تؤدي إلى قنية القلب حوالي ثلاث دقائق فقط. ارفع الجلد والعضلات أسفل القص مباشرة ، باستخدام ملقط ، وقم بقص الحافة السفلية للأضلاع باستخدام مقص ثقيل.

بعد ذلك ، باستخدام مقص ناعم ، قم بعمل قطع صغير في الحجاب الحاجز عند هامش الضلع. بعد ذلك ، قم بقص الضلع ذيليا لعمل رفرف من جدار الصدر البطني بالكامل. الآن ، أمسك القلب برفق ، وقم بحياته ببطء حتى تبدأ الأوعية القلبية في التمدد.

بعد ذلك ، استئصال القلب حتى يتعرض الشريان الأورطي بالكامل وانقل القلب إلى دورق سعة 100 مل يحتوي على 50 مل من KHB المثلج. الآن ، خذ القلب على الفور إلى جهاز الوفرة ، وقم بتركيب الشريان الأورطي على قنية متساقطة. قم بتثبيته بإحكام باستخدام خياطة 4-0 ، حتى لا تدخل فقاعات الهواء إلى القلب.

ثم قم بتطبيق ضغط وفرة ثابت أو تدفق وفرة. لإنشاء القلب المعكوس ، قم أولا بتدوير قنية الأبهر برفق حتى يصبح الجدار الخلفي للهارت في وجهه. بعد ذلك ، قم بقص النسيج الضام لكشف الفتحة إلى الأذين الأيسر.

بعد ذلك ، أمسك القلب برفق واقلبه رأسا على عقب. قم بتركيب القلب على بالون البطين المجهز، مع تفريغ البالون، وإطعامه في البطين الأيسر. يتم الآن تثبيت القلب ميكانيكيا في وضع مستقيم ، باستخدام مجموعة قسطرة البالون كدعم.

قم بتضخيم البالون حتى يملأ تجويف البطين بالكامل ، عن طريق دفع المكبس إلى علامة التعبئة. قم بتأمين القلب بحيث يكون هناك حد أدنى من الضغط على جذر الأبهر. هذا الجزء من الإجراء يتطلب ممارسة.

الآن ، راقب المقياس الموجود على البالون ، واضبط الضغط الانبساطي على ثلاثة إلى خمسة ملليمترات من الزئبق. يجب أن تتشكل قطرات صغيرة على النخابة إذا تم ضبط الضغط بشكل صحيح. بعد ذلك ، اسحب غطاء اللاتكس برفق فوق القلب.

حتى أكثر السطح البطيني يجب تغطيته. قبل المتابعة ، تحقق من وجود فقاعات هواء داخل الغطاء. لإزالة أي فقاعات هواء ، استخدم شفطا لطيفا من المحقنة.

الآن ، ضع نهاية الأنبوب المسقط 10 سنتيمترات أسفل القلب. اجمع التصوير المقطعي المحوسب المتساقط في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر وحافظ على الأنبوب أقل من أربع درجات مئوية عن طريق تضمينه في خليط 1: 1 من الثلج وكلوريد الصوديوم. اجمع ما بين 0.15 و 1.5 مل من التصوير المقطعي المحوسب ، ثم قم بوزن العينة وقم بتجميدها في النيتروجين السائل.

قم بتخزينه على حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر حتى يمكن معالجته. عند إعادة تشكيل نموذج القلب المعكوس عند ضغط ثابت يبلغ 100 سم من الماء ، يمكن جمع ما بين 1/10 إلى 1٪ من النفايات السائلة الوريدية التاجية. تم قياس محتوى البروتين في التصوير المقطعي المحوسب باستخدام مقايسة BCA ، وبلغ متوسطه 1.1 ملليغرام لكل مليلتر.

كشف الرحلان الكهربائي الهلامي البسيط عن مجموعة واسعة من البروتينات. تمت مقارنة العينات الطبيعية بعينات من القلوب التي تعرضت لإعادة تروية نقص التروية لمدة 50 دقيقة باستخدام 2D DIGE. تم العثور على العديد من البروتينات ليتم تنظيمها في التصوير المقطعي المحوسب للقلوب الإقفارية.

تم إجراء تحليل البروتينات على البروتينات التي تم تنظيمها. كانت البيورينات أيضا ذات أهمية كبيرة. البيورينات هي جزيئات إشارات محورية تنظم الاستجابة المناعية للقلب ، وتوتر الأوعية الدموية ، ووظيفة القلب ، خاصة بعد الإصابة الإقفارية.

أظهر تحليل HPLC للتصوير المقطعي المحوسب تركيزات مرتفعة من العديد من البيورينات في القلوب المصابة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن التحول القلبي الذي يتشكل في قلب معزول ، لن يحاكي تماما التركيب الحقيقي لظروف in-vee-vuh.