<em>In Vitro</em> SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

Wan-Shan Yang; Mel Campbell; Hsing-Jien Kung; Pei-Ching Chang

doi:10.3791/56629

في المختبر تحليل سومويليشن لدراسة النشاط ليجاسى E3 السومو

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

في المختبر تحليل سومويليشن لدراسة النشاط ليجاسى E3 السومو

Full Text

9,804 Views

09:45 min

January 29, 2018

DOI: 10.3791/56629-v

Wan-Shan Yang¹, Mel Campbell², Hsing-Jien Kung^2,3,4,5, Pei-Ching Chang^1,6

¹Institute of Microbiology and Immunology,National Yang-Ming University, ²UC Davis Cancer Center,University of California, Davis, ³Department of Biochemistry and Molecular Medicine,University of California, Davis, ⁴Institute for Translational Medicine, College of Medical Science and Technology,Taipei Medical University, ⁵Division of Molecular and Genomic Medicine,National Health Research Institutes, ⁶Center for Infectious Disease and Cancer Research,Kaohsiung Medical University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

خلافا ليجاسيس أوبيكويتين، حددت القليلة سومو E3 ليجاسيس. هذا المعدل في المختبر البروتوكول سومويليشن غير قادرة على تحديد رواية E3 سومو ligases بمقايسة إعادة تشكيل في المختبر .

الهدف العام من هذه التجربة هو التحقق من البروتين ذي الأهمية الذي يمكن أن يكون SUMOylated أو هو SUMO E3 lygase. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال SUMOylation ، مثل تحديد SUMO E3 lygase. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن استخدامها للتحقيق في خصوصية SUMO E3 lygase تجاه أشكال SUMO iso المختلفة.

سيوضح الإجراء وان شان يونغ ، طالب دكتوراه من مختبري. لتنقية العلامة K-bZIP ، قم أولا باحتضان 10 ملليلتر من المحللة الخلوية مع 50 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي الموسوم بالأجسام المضادة في أنبوب بولي بروبيلين سعة 14 مل. ثم قم بتدوير الأنبوب بمعدل 50 دورة في الدقيقة عند أربع درجات مئوية لمدة ثلاث ساعات في خلاط معلق.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos