Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

Genta Ito; Taisuke Tomita

doi:10.3791/56688

كشف الفسفرة Rab10 بالنشاط LRRK2 باستخدام مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة مع علامة ربط الفوسفات

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

كشف الفسفرة Rab10 بالنشاط LRRK2 باستخدام مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة مع علامة ربط الفوسفات

Full Text

16,197 Views

08:55 min

December 14, 2017

DOI: 10.3791/56688-v

Genta Ito¹, Taisuke Tomita^1,2

¹Laboratory of Brain and Neurological Disorders, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo, ²Laboratory of Neuropathology and Neuroscience, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

هذه الدراسة توضح طريقة بسيطة للكشف عن مستويات الذاتية من الفسفرة Rab10 بالغنية لوسين تكرار كيناز 2.

الهدف العام من هذه التجربة هو اكتشاف فسفرة Rab10 بواسطة LRRK2 باستخدام SDS-PAGE مع علامة ربط الفوسفات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث باركنسون مثل كيفية تأثير طفرات المرض في LRRK2 على فسفرة Rab10. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن للمرء أن يكون لديه تقدير تقريبي لقياس الفسفرة Rab10 باستخدام لطخة غربية بسيطة.

العديد من خطوات هذا البروتوكول قياسية إلى حد ما ويتم وصفها بتفصيل كاف من خلال بروتوكول النص المصاحب لهذا الفيديو. هنا ، نريد أن نوضح لك الخطوات التي تستفيد أكثر من التعليمات المرئية. قم بإعداد لوحات من خلايا HEK293 المنقولة كما هو موضح في بروتوكول النص.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos