حقن الخلية الداخلية عبر كتلة من الخلايا الجذعية الجنينية يؤدي إلى ارتفاع في أسعار تشيميريسم

الهدف العام من هذا الإجراء المعدل هو زيادة إنتاج الوهم دون تكبد تكاليف إضافية أو فترات تدريب طويلة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة المختبرات على أن تصبح أكثر كفاءة في إنتاج الوهم ، خاصة في الحالات التي تكون فيها الخلايا الجنينية الجنينية أقل من الأمثل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها لا تتطلب معدات إضافية ولا تدريب متخصص.

سيظهر الإجراء اليوم توماس هاجلر. إنه عالم أحياء وطالب دراسات عليا يعمل في المختبر الأساسي. لحصاد الأجنة ، امسح الرحم على أنسجة المختبر لإزالة الدم الزائد ووضع العضو في طبق جديد بحجم 60 ملم تحت مجهر تشريح منخفض التكبير.

باستخدام ملقط تشريح لتثبيت الرحم بعناية وبرفق بالقرب من قناة البيض ، أدخل إبرة قياس 25 متصلة بحقنة سعة 10 مليلتر تحتوي على 10 ملليلتر من وسط تجميع الانفجار في وسط الرحم خلف أطراف الملقط في مستوى متوازي قدر الإمكان. اضغط على الملقط لتأمين الإبرة داخل الرحم وقم بغسل ما يقرب من ملليلتر واحد من الوسط برفق عبر قرن الرحم. عندما يتم طرد جميع الأكياس الأريمية، قم بتجميع جهاز ماصة الفم واستخدم ماصة الفم لنقل الأجنة الفردية إلى قطرات مفردة من وسط تجميع الانفجار في طبق ثان بحجم 60 ملم.

ثم اغسل كل جنين في قطرة ثانية من وسط جمع الانفجار وانقل الأجنة إلى طبق من أربعة آبار حتى حقنها. للبدء ، استخدم حاقن دقيق لتطبيق الفراغ على إبرة الحقن. ضع طبقا من الخلايا الجذعية الجنينية تحت مجهر الحقن حيث يتم توصيل إبرة الحقن وماصة حامل الجنين.

من الضروري لنجاح الحقن أن تأخذ الوقت الكافي لإعداد المجهر بشكل صحيح. يتضمن ذلك الكمية المناسبة من الوسائط في الإبرة والمحاذاة الصحيحة للمحور z. استخدم حاقن دقيق لتطبيق الفراغ على إبرة الحقن.

مع الحفاظ على أقل مساحة ممكنة بين الخلايا ، ارسم الخلايا الجنينية الصغيرة إلى المتوسطة الحجم التي تظهر بسلاسة دون عيوب واضحة من طبق الأجنة. بعد جمع 15 خلية على الأقل ، ضع جنينا بالقرب من فتحة الحامل. ضع المكنسة الكهربائية لتثبيت الجنين على الحامل وحرك الماصة المثبتة لأعلى أو لأسفل لضبط المحور z حتى يلمس الجنين الشريحة.

ركز بدقة على منطقة pellucida واضبط المحور z لإبرة الحقن حتى تصبح الخلايا الجنينية بالقرب من طرف الإبرة في بؤرة التركيز. إذا لزم الأمر ، استخدم إبرة الحقن لدحرجة الكيسة الأريمية برفق حتى تصبح كتلة الخلية الداخلية في الموضع المناسب للحقن. باستخدام دفعة قوية ولكن خاضعة للرقابة ، أدخل إبرة الحقن عبر منطقة البلوس في كتلة الخلية الداخلية وقم بالضغط قليلا على الحاقن الدقيق لإبرة الحقن للمساعدة في منع القيلة الأريمية من الانهيار.

بمجرد أن تخترق الإبرة القيلة الأريمية ، اضغط على الحاقن الدقيق لنقل جميع الخلايا الجذعية الجنينية إلى الجنين ، وتوقف لفترة وجيزة عندما يبدأ شطبة الإبرة في الخروج من الجنين للسماح للضغط في الجنين بالعودة إلى طبيعته مع الاحتفاظ بالخلايا. عندما يتم حقن جميع الأكياس الأريمية ، استخدم جهاز نقل الأجنة غير الجراحي لتوصيل الأجنة إلى فئران ويبستر السويسرية في المرحلة الجنينية 2.5 وفقا لتعليمات الشركة المصنعة وإيواء الفئران بشكل فردي بعد كل نقل من خلال الولادة والفطام اللاحق. في هذه التجربة التمثيلية ، لم تتغير معدلات الحمل بين كتلة الخلية الداخلية العابرة المحقونة والمجموعات التي يتم حقنها تقليديا وعدد متساو من الجراء نجا حتى الفطام من كل مجموعة.

والجدير بالذكر أنه في حين أن عدد الفئران عند الفطام ظل دون تغيير ، فإن عددا أكبر بكثير من الجراء من مجموعة حقن كتلة الخلية الداخلية العابرة أظهر خيمرا بلون المعطف مقارنة بالمجموعة التي تم حقنها في السيطرة. أفضل جزء في هذه التقنية هو أنها لا تتطلب سوى تغيير بسيط في اتجاه الجنين لتسهيل إنتاج أكبر في الوهم. الإعداد السليم للمجهر ضروري.

إذا لم يتم إعداد المجهر والمتلاعبين بشكل صحيح وصيانتها جيدا ، فلن تعمل عملية الحقن. إذا كنت جديدا في حقن الأجنة ، فإن التكرار هو الطريقة الوحيدة للتعلم. بالنسبة للمبتدئين ، يميل التعامل مع الأجنة إلى أن يكون أصعب جزء في الإجراء.

إن القدرة على نقل الأجنة بكفاءة من طبق إلى آخر دون فقدان أي منها هي الجزء الأكثر أهمية في التجربة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية مساعدة التغيير البسيط في تقنية الحقن القياسية على أن تصبح أكثر كفاءة في إنتاج الوهم.