الجينات مراسل fluorescence النويدات المشعة التصوير لتتبع تطور الورم في نماذج القوارض الورم

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تتبع نمو الورم والورم الخبيث في القوارض الحية عن طريق التصوير. يسمح مراسل اندماج النويدات المشعة بالكشف غير الجراحي عن طريق التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني مع مساعدة الفلوروفور على تأكيد النتائج خارج الجسم الحي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية كلما احتاجت الخلايا إلى تتبعها في الحية على مدى فترة زمنية طويلة.

يمكن أن يساهم في فهم ورم خبيث بعيد وتأثير العلاجات على تطور الورم. التقنية الموصوفة هي تتبع الخلايا السرطانية عن طريق التصوير شديد الحساسية وغير الغازية في الجسم الحي باستخدام متتبع التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني الناتج عن التوليف الآلي. إنه يوفر انخفاضا كبيرا في استخدام مقارنة بالمنهجية التقليدية.

قد يشعر الأفراد الجدد بهذه الطريقة بالإرهاق من تعقيدها. على وجه الخصوص ، يبسط التوليف الآلي لجهاز التتبع الإشعاعي PET هذه العملية بشكل كبير. نعتقد أن العرض المرئي لهذه الطريقة يوضح هذه الآراء لخطوات التصوير الحرج المرتبطة بها.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى الاختبار قبل السريري للعلاجات الجديدة التي يمكن تتبعها أيضا جنبا إلى جنب مع الخلايا السرطانية. يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة لبيولوجيا السرطان وتطوير العلاجات. عندما يكون التوطين في الجسم الحي ، والنقل ، والتوسع ، والمراقبة طويلة الأجل لسكان معينين أمرا ذا أهمية.

للبدء ، استخدم البلازميدات الجينية المراسلة ، وقم بتوليد جزيئات فيروس القصص ، وتحويل الخلايا وتوصيفها. ثم قم بتحليل وظيفة جين المراسل عن طريق امتصاص التتبع الإشعاعي في خطوط الخلايا التي تعبر عن NISFP. قم بزرع الخلايا المنقاة ووسط النمو في ستة ألواح بئر ، مع التأكد من تحضير جميع العينات ثلاث نسخ.

في صباح اليوم التالي ، اغسل الخلايا بوسط نمو خال من المصل واحتضان الصفائح ب 50 كيلو بيكيريل من F18 رباعي فلوروبورات عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم اجمع المادة الطافية وانقل 100 ميكرولتر إلى أنبوب تجميع مسمى مسبقا. تخلص من المادة الطافية المتبقية ، ثم اغسل الخلايا بملليلتر واحد من PVS المثلج البارد الذي يحتوي على الكالسيوم والمغنيسيوم بمستويات فسيولوجية.

اجمع محلول الغسيل وانقل 100 ميكرولتر من محلول الغسيل إلى أنبوب تجميع مسبق التصنيف. ثم كرر عملية الغسيل مرة أخرى. أضف 500 ميكرولتر من PVS التي تحتوي على كل من التربسين و EDTA لرفع الخلايا.

احتضان العينات عند 37 درجة مئوية حتى تنفصل الخلايا باستخدام المجهر للتحقق من الانفصال. ثم انقل تعليق الخلية إلى أنبوب تجميع مسمى. بعد ذلك ، قم بأجهزة الطرد المركزي لعينات الخلية عند 250 جم لمدة أربع دقائق عند أربع درجات مئوية.

استخدم عداد جاما آلي لحساب العينات من كل نوع من أنواع العينات الأربعة والحصول على النسبة المئوية للامتصاص باستخدام المعادلة الأولى. لبدء تخليق رباعي فلوروبورات F18 ، قم بإعداد منصة التخليق الراديوي الآلي في غطاء كيميائي مناسب وتأكد من تحميل ملف XML الصحيح على كمبيوتر التحكم. أثناء تشغيل المركب ، سيتم إنتاج F18 رباعي التمثيل ثم تنقيته على خرطوشة تبادل أنيونية.

سيتم شطف خرطوشة تبادل الأنيون بالماء ثم تجفيفها بغاز النيتروجين. يتم التلميح إلى المنتج النهائي من خرطوشة تبادل الأنيون مع مليلتر واحد من 0.9٪ كلوريد الصوديوم ونقله إلى قارورة تجميع الزجاج عبر خط المخرج. لبدء التصوير ، قم بتخدير وإعداد الفئران وفقا للبروتوكول المكتوب.

ثم استخدم محلول ملحي معقم بنسبة 0.9٪ لتخفيف محلول F18 tetrafluoroborate إلى 5 ميغابيكريل لكل 50 ميكرولتر. استخدم حقنة بإبرة تحت الجلد لسحب 100 ميكرولتر من محلول رباعي فلوروبورات F18. قياس النشاط الإشعاعي في المحقنة وتسجيل قيمة ووقت القياس.

قم بإدارة 50 ميكرولترا من محلول F18 رباعي فلوروبورات في الذيل الدافئ مسبقا عبثا عن طريق الوريد. ثم قم بقياس النشاط الإشعاعي المتبقي في المحقنة وسجل قيمة ووقت القياس. يعد حقن وريد الذيل للمتتبع الإشعاعي أمرا بالغ الأهمية.

نقوم بتنفيذه تحت التخدير الحيواني لتقليل مخاطر الحقن الخاطئ وانسكاب المقتدر الإشعاعي. يبقى تحت التخدير حتى بدء الحصول على صورة التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني. بالضبط بعد 45 دقيقة من حقن المقتفي الإشعاعي.

بعد ذلك ، اضبط مؤقتا للعد التنازلي من 45 دقيقة وتأكد من وضع الماوس على الطاولة في الوضع القصي. قم بتركيب أدوات المراقبة الجراحية المناسبة وتأكد من عمل الأدوات بشكل صحيح قبل المضي قدما. بعد ذلك ، قم بتعيين مقاييس التصوير المقطعي المحوسب والحصول على صور التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني.

عندما يقرأ مؤقت العد التنازلي 15 دقيقة ، تبدأ الحصول على صورة التصوير المقطعي المحوسب وعندما يقرأ المؤقت صفر دقيقة ، تبدأ الحصول على صورة PET. قم أولا بقياس النشاط الإشعاعي للفأر القتل الرحيم بالكامل وسجل قيمة ووقت القياس. ثم قم بتشريح الفئران وحصاد الأنسجة اللازمة.

قم بقياس النشاط الإشعاعي للجثة المتبقية مع الذيل وبدونه. سجل هذه القيم ولاحظ أوقات القياس. بعد ذلك ، قم بوزن جميع الأنسجة المحصودة بشكل فردي والتقط صورا للأعضاء السرطانية تحت ضوء النهار وتحت ضوء الفلورة.

بعد ذلك ، قم بتضمين الأنسجة في OCT لعلم الأنسجة النهائي. قم بقياس النشاط الإشعاعي لجميع الأنسجة المحصودة ، وسجل القيمة ولاحظ وقت القياس. أخيرا ، قدم البيانات كقيم امتصاص قياسية أو سيارات الدفع الرباعي كما هو موضح في المعادلة الثانية.

في هذه التجربة ، تم استخدام التصوير الجيني لمسجل الإزهار بالنويدات المشعة لتتبع تطور الورم في نموذج ورم القوارض. أظهر الفحص المجهري الفلوري متحد البؤر توطين غشاء البلازما الدقيق ل NISFPs. تم قياس وظيفة NISFP ونوعيتها باستخدام امتصاص NIS الممنوح للتتبع الإشعاعي.

لم يلاحظ وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين 4T1NISGFP و 4T1NISRFP التي تعبر عن خطوط الخلايا ذات مستويات تعبير NIS المتشابهة. الأهم من ذلك ، أن كتلة بريكلورات أظهرت في جميع خطوط الخلايا أن امتصاص المقتفي الإشعاعي الذي تم الحصول عليه يرجع إلى تعبير NISFP محدد. كشف تصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لكامل الجسم للحيوانات الحاملة للورم عن معلومات عن تطور الورم وانتشاره النقيلي.

يوضح المثال الموضح هنا ورم خبيث طويل واسع النطاق مع العديد من العقيدات المميزة في الرئة. اختلفت قيم الجرعة المحقونة والأحجام المشغولة من ورم خبيث فردي في الرئتين. ومع ذلك ، كانت قيم الجرعة المحقونة في الحجم الطبيعي ضمن نطاق مماثل.

مكن البروتين الفلوري في جين مراسل الوضع المزدوج من تحديد الأنسجة السرطانية تحت ضوء الإزهار أثناء تشريح. كشف التوزيع الحيوي اللاحق للتتبع الإشعاعي خارج الجسم الحي عن أعضاء ذات امتصاص عالي للتتبع الإشعاعي وبالتالي NIS يعبر عن الأنسجة. في حين أن الغدة الدرقية والغدد اللعابية ، وكذلك المعدة ، تعبر عن NIS محليا ، فإن جميع الإشارات الإيجابية الأخرى تدل على الأنسجة السرطانية مثل الورم والنقائل.

مراسل مضان النويدات المشعة أيضا تحديد الخلايا السرطانية في أقسام الأنسجة النهائية. مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال السرطان لتصور عملية ورم خبيث تلقائي واختبار كيفية تأثير الأدوية عليها. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم التخطيط بعناية لجميع الخطوات المقبلة.

يجب إنشاء خطوط الخلايا ، وإعداد نماذج الأورام الحيوانية ، ويجب أن تكون جميع الكواشف والمعدات للتصوير متاحة في اليوم المطلوب. نوصي بتجارب تجريبية صغيرة لتبدأ بها. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء إنتاج المقتفي الإشعاعي والتصوير الحيواني في الجسم الحي مع ستة في يوم عمل مدته ثماني ساعات إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية التعامل مع جين المراسل المتوفر في تتبع الخلايا في الجسم الحي باستخدام مراسل النويدات المشعة NIS جنبا إلى جنب مع بروتين الفلورسنت. يجب أن تكون قادرا أيضا على توصيف مراسل NISFP الذي يعبر عن خطوط الخلايا لإنتاج جهاز التتبع الإشعاعي PET المطلوب للتصوير في الجسم الحي والأداء في الجسم الحي وخارج الجسم الحي عن طريق تجارب التوزيع. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل قياس الخلايا الفلورية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية.

على سبيل المثال ، كيف يرتبط ملف تعريف الخلية المناعية للورم والورم الخبيث ببعضهما البعض أو يتغير بمرور الوقت. لا تنس التأكد من أن خطوط الخلايا التي تنتجها خالية من الميكروبلازميدات حيث تم الإبلاغ عن أن الأخيرة تؤثر على النتائج. الأهم من ذلك ، لا تنس أن العمل مع النظائر المشعة يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب دائما إعطاء الأولوية لحماية الذات والآخرين أثناء تنفيذ هذا الإجراء.