تصوير تشوريوريتينال المزدوج-طريقة رواية التنظير المجهري والتصوير المقطعي التماسك البصري في عيون الأرانب الحية

الهدف العام من إعداد التصوير الجديد وإجراء التشغيل هذا هو إجراء الفحص المجهري الضوئي الصوتي والتصوير المقطعي بالتماسك البصري المزدوج للتصوير المشيمي والشبكي غير الغازي الخالي من الملصقات لعيون الثدييات الكبيرة ، مثل الأرانب. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في تصوير العيون حول عمق التصوير والدقة والترجمة السريرية المطلوبة لتمييز تشبع الأكسجين وتوزيع الدم والميلانين في الكبيرة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بالتصور غير الجراحي لأنسجة العين للحصول على الفحص المجهري الضوئي والتصوير المقطعي البصري التماسك البصري ثنائي الطريقة.

للبدء ، حدد ليزر مذبذب بصري بارامتري يتم ضخه بواسطة ليزر الحالة الصلبة بمضخة الصمام الثنائي كمصدر للضوء للمجهر الضوئي الصوتي واستخدم مقسم شعاع لتقسيم الشعاع بمساعدة العمود بنسبة انقسام من 19 انعكاس إلى 10 إرسال. قم بتحويل الجزء المنعكس على التوالي بواسطة مرآة M3 والمرآة ثنائية اللون واستخدم الجلفانومتر ثنائي الأبعاد لمسح الانعكاس. قم بتوصيل الحزمة الممسوحة ضوئيا من خلال تلسكوب مكون من عدسة ممسوحة ضوئيا بطول بؤري يبلغ 36 ملم وعدسة للعيون بطول بؤري يبلغ 10 ملليمترات وتركيز الشعاع على قاع العين بواسطة بصريات عين الأرنب.

قبل البدء في إجراء التصوير ، يرجى استخدام بطانية تسخين متداولة بالماء على دعامة الجسم واضبط درجة حرارة الماء المتداول على 38 درجة مئوية. سجل العناصر الحيوية قبل الإجراء وتأكد من المستوى المناسب من التخدير من قبل قلب الأرنب ومعدلات التنفس. قم بتوسيع تلاميذ الأرانب بقطرة واحدة لكل من تروبيكاميد 1٪ للعيون وفينيليفرين هيدروكلوريد 2.5٪ للعيون.

استخدم مكبر صوت بالموجات فوق الصوتية لتضخيم الإشارة وتصفية الإشارة بواسطة مرشح تمرير منخفض. ضع عداد طاقة فوق عين الأرنب وقم بقياس طاقة نبض الليزر على قرنية الأرنب لإبقائها أقل من حد السلامة الخاص بالمعهد الوطني الأمريكي للمعايير. لتمكين التصوير المقطعي البصري أو نظام OCT من تصوير الجزء الخلفي من عين الأرنب ، أضف عدسة العين بعد عدسة المسح.

استخدم أنبوب مبيت تكبير/تصغير لضبط طول الذراع المرجعي لتأكيد تطابقه مع طول المسار البصري لذراع العينة. بالنسبة لتصوير OCT للمجال الطيفي ، ضع الأرنب على منصة التصوير لكاميرا قاع العين السريرية واحصل على صور قاع العين الحمراء وخالية من التألق الذاتي بزاوية 50 درجة. بعد ذلك ، انقل إلى منصة نظام OCT بعين واحدة تحت عدسة العين.

أضيء العين باستخدام ضوء LED وافتح برنامج OCT. تحقق من صورة كاميرا CCD لقاع العين وارسم خطا مستقيما في البرنامج لتمثيل مسح OCT B ذي الاهتمام. ابدأ في المسح الضوئي وضبط طول الذراع المرجعي لتصور صورة OCT وتحسين عامل تعويض التشتت في برنامج OCT للحصول على الصور الأكثر وضوحا.

ثم قم بتعيين البيانات ومعلمات الحصول على البيانات المناسبة واحفظ الصور. للتصوير بالمجهر الضوئي الصوتي ، قم بتشغيل ليزر المذبذب البصري البارامتري. ابدأ تشغيل برنامج التحكم في المجهر الضوئي الصوتي وقم بضبط الطول الموجي للياز على إحدى قمم الامتصاص للقوة اللونية المستهدفة.

قم بتهيئة موضع الجلفانومتر ومراقبة طاقة الليزر قبل قرنية الأرانب للتأكد من أنها أقل من حد أمان المعهد الوطني الأمريكي للمعايير. قم بتعيين محول الطاقة بالموجات فوق الصوتية على مرحلة ترجمة ثلاثية الأبعاد ، وضع طرف محول الطاقة على اتصال مع ملتحمة الأرانب بحيث يشير الطرف إلى قاع العين. استخدم قطرة من زيوت التشحيم للعين لربط طرف محول الطاقة بشكل أفضل في ملتحمة الأرانب وتشغيل ضوء إضاءة LED.

تصور قاع الأرنب من خلال برنامج MatLab وتعيين منطقة المسح محل الاهتمام بما في ذلك المركز والحجم المادي للمنطقة. افتح غالق الليزر وابدأ المسح B للشعاع مع مراقبة الإشارة الصوتية الضوئية المكتشفة على راسم الذبذبات وأخيرا ضبط موضع محول الطاقة لزيادة شدة الإشارة على طول المسح B بأكمله حسب الضرورة. ثم قم بتعيين معلمات الحصول على البيانات ، ومعالجة البيانات الأولية وتصور صورة المجهر الضوئي الصوتي في بعدين.

في نهاية جلسة التصوير ، انقل الأرنب مرة أخرى إلى كاميرا قاع العين لفحص قاع العين بحثا عن أي تغييرات مورفولوجية بعد التصوير وشطف قرنية الأرنب بغسول العين. ضع كبريتات فلوربيبروفين للعيون والنيومايسين والبولي ميكسين ب ومرهم ديكساميثازون للعيون على القرنية وأغلق العين. ثم انقل الأرنب وبطانية المياه المتداولة إلى غرفة الاسترداد مع المراقبة حتى الشفاء التام.

في هذه الصورة التمثيلية لقاع العين ، تنتشر الأوعية المشيمية على معظم أجزاء أموال الأرانب ، بينما تكون الأوعية الشبكية محصورة داخل الشعاع النخاعي. هنا تظهر صورة مجهرية صوتية نموذجية للأوعية الدموية المشيمية داخل قاع العين مع الأوعية الدموية المشيمية المحددة بدقة جانبية عالية. في صورة مسح OCT B هذه ، يتم تصور شبكية العين والمشيمية والصلبة بدقة محورية عالية مع الأوعية المشيمية التي لوحظت أسفل طبقة ظهارة صبغة الشبكية.

باستخدام نظام التصوير ثنائي الطريقة ، يمكن الحصول على الإسقاط الأقصى للكثافة ثنائية الأبعاد والعرض الحجمي ثلاثي الأبعاد لأوعية الشبكية عن طريق التصوير الضوئي الصوتي. توضح الشرائح المتعامدة للصورة ثلاثية الأبعاد كيف يمكن أيضا استخدام الفحص المجهري الضوئي الصوتي لتصور الأوعية الشبكية الفردية التي تقع فوق طبقة ظهارة صبغة الشبكية وتأكيد الأعماق المختلفة التي توجد فيها الأوعية الشبكية والمشيمية. تظهر هنا صورة فحص OCT B أوعية شبكية فردية.

وطبقة الألياف العصبية التي تؤكد نتائج التصوير المجهري الضوئي الصوتي. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في غضون ساعة واحدة تقريبا إذا تم إجراؤها بشكل صحيح من خلال تذكر ضبط إشعاع الليزر على حدود منخفضة ل ANLI لوضع حدود لإحياء مواد التشحيم بمجرد شطف العين لتجنب الجفاف ومراقبة حالة الأرانب كل 15 دقيقة. بعد الإجراء ، يمكن إجراء الكيمياء المناعية للشرائح الآلية للإجابة على سؤال إضافي حول تأكيد تطور الأوعية الدموية المشيمية الجديدة وتضخيم حجم الأوعية الدموية الجديدة في الأرانب.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال طب العيون لاستكشاف الأمراض المشيمية في نماذج الأمراض الحاملة للأرانب ، بما في ذلك نماذج الأوعية الدموية المشيمية الجديدة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية اكتشاف الأوعية الدموية المشيمية والشبكية المفردة في عيون الأرانب باستخدام نظام تصوير جزيئي متعدد الوسائط جديد للتشخيص في المرحلة المبكرة من الضمور البقعي المرتبط بالعمر الرطب. لا تنسى هذا.

يمكن أن يكون العمل باستخدام الليزر الزجاجي خطيرا للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء النظارات الواقية ومعاطف المختبر أثناء تنفيذ هذا الإجراء.