تحديد تركيبات المخدرات التآزر بواسطة الأسلوب² تداخل الفائق

الهدف العام لهذه المنهجية هو تحديد الجزيئات التآزرية ، التي تضخم نشاط بعضها البعض ، عند دمجها من خلال الفحص عالي الإنتاجية. وتعد أزواج الأدوية التآزرية استراتيجية واعدة لمكافحة العدوى المقاومة للأدوية، ولكن يصعب تحديدها. يمكن لهذه الطريقة تحديد الجزيئات التي تتفاعل مع الأدوية المضادة للميكروبات الموجودة المستخدمة لعلاج الأمراض المعدية.

على المدى الطويل ، يمكن لهذه المجموعات أن تدخل في التقييم قبل السريري وتحسن رعاية المرضى في النهاية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن إجراؤها مع أي كائن حي ذي أهمية ومع أي مكتبة من الجزيئات الصغيرة. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج الأمراض المعدية المتعددة لأنها تعمل مع أي كائن حي ذي أهمية.

استخدم جدول بيانات قياسي لحساب متوسط درجة النمو والانحراف المعياري لجميع الطفرات ، في وجود تركيز معين للجزيء الصغير المضاف. ثم احسب درجات Z لكل تركيز جزيء صغير. ثم قم بتسليط الضوء على الطفرات الجينية ذات درجات Z الكبيرة.

أولا ، قم بزراعة ثقافة الإشريكية القولونية في متوسط M9 الحد الأدنى ، طوال الليل عند 37 درجة مئوية. ثم قم بإذابة الجزيئات الصغيرة في ثنائي ميثيل سلفوكسيد بتركيز عال أعلى من 10 ملليغرام لكل ملليلتر. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من متوسط M9 إلى كل بئر في طبق 96 بئر.

ماصة 100 ميكرولتر إضافية من M9 وسط في العمود الأول بحيث يكون الحجم في هذا العمود 200 ميكرولتر. ثم أضف ما يقرب من 10 ميكرولتر من محلول الجزيء الصغير المركز في العمود الأول. بعد إضافة الجزيئات الصغيرة ، ابدأ في تخفيفها عبر المحور X للوحة.

استمر في التخفيف حتى يكون هناك 100 ميكرولتر في العمود 11. بعد خلط العمود 11 ، تخلص من 100 ميكرولتر من هذا العمود. فليكن هناك وسيط فقط في العمود 12 لتطبيع البيانات.

بعد ذلك ، سجل قيمة الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر من الثقافة الليلية المزروعة في متوسط M9 البسيط. ثم أضف ميكرولترين من الثقافة في كل بئر. بحيث يوجد 1000 خلية لكل بئر.

ثم رج الطبق برفق. ولاحظ قراءة الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر لنقطة زمنية صفر ساعة. بمجرد تسجيل القراءة ، احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة يوم.

مرة أخرى ، قم بقياس قيمة الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر لمدة 24 ساعة. لإجراء اختبار رقعة الشطرنج ، قم بزراعة ثقافة الإشريكية القولونية في متوسط M9 الأدنى لليلة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من وسط M9 إلى كل بئر وأضف 100 ميكرولتر إضافي من نفس الوسط في العمود الأول من لوحة 96 بئر.

بعد ذلك ، أضف جزيئات الاختبارات الصغيرة ، في كل بئر في العمود الأول. وأضف ضعف التركيز في البئر A1. بعد ذلك ، قم بإنشاء تدرج تخفيف على طول المحور X عن طريق نقل 100 ميكرولتر ، من العمود الأول إلى العمود الثاني. استمر في عملية التخفيف حتى يتم إضافة 100 ميكرولتر في العمود 11.

بعد خلط العمود 11 ، تخلص من 100 ميكرولتر من هذا العمود واترك العمود 12 مع وسيط فقط بدون أي أدوية. قم بإنشاء تدرج آخر لتخفيف الدواء الثاني. للقيام بذلك ، أضف 100 ميكرولتر من الوسط الذي يحتوي على اثنين من X ، الحد الأدنى من التركيز المثبط لجزيء الإدخال في الصف A. ثم انقل 100 ميكرولتر من الصف A إلى B.استمر في عملية التخفيف ، حتى يتم إضافة 100 ميكرولتر في الصف G.بعد خلط الصف G ، تخلص من 100 ميكرولتر من البئر.

ثم قم بتلقيح اللوحة بميكرولتر من الثقافة في كل بئر. بحيث يوجد 1000 خلية لكل بئر. بعد ذلك ، قم بقياس قراءة الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر لنقطة زمنية صفر ساعة.

بمجرد تسجيل القراءة ، احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. وبعد ذلك ، قم بقياس قيمة الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر لمدة 24 ساعة. لإجراء فحص عالي الإنتاجية ، للأدوية التآزرية ، استزراع كل من النوع البري والخلايا الطافرة للتنبؤ بالتآزر في الحد الأدنى من وسط M9.

ثم أضف الأدوية من المكتبة إلى الوسيط. بعد ذلك ، قم بتلقيح صفيحة واحدة من أدوية المكتبة بالنوع البري ولوحة أخرى بالبكتيريا الطافرة للتنبؤ بالتآزر. تمثل هذه اللوحة مقايسة رقعة الشطرنج المستخدمة للتحقيق في تركيبات الأدوية التآزرية.

في هذه اللوحة ، يشير البئر F9 مع أدنى درجة FICI تبلغ 0.07 إلى أن زوج الجزيئات الصغيرة تآزري. تمثل هذه اللوحة اختبار رقعة الشطرنج للتحقيق في تركيبة الأدوية غير المتفاعلة. في هذه اللوحة ، يشير البئر C3 الذي حصل على أدنى درجة FICI تبلغ 1.0 إلى أن زوج الجزيئات الصغيرة لا يتفاعل مع بعضه البعض.

تمثل هذه اللوحة اختبار رقعة الشطرنج المستخدمة للتحقيق في تركيبات الأدوية العدائية. في هذه اللوحة ، يشير A1 مع أدنى درجة FICI تبلغ 8.0 إلى أن التفاعل بين جزيئات الدواء عدائي. بعد ذلك ، يستخدم Befeldin A ، وهو دواء جزيئي صغير في Fluconazole ، لدراسة نمو C و U Formins.

تظهر المؤامرة أن نمو كل من النوع البري وطفرة التنبؤ بالتآزر يتم تثبيطه قليلا وبنفس القدر. يشير هذا إلى أن Befeldin A و Fluconazole شريكان دواءيان غير متآزرين. على العكس من ذلك ، يتم تثبيط نمو متحولة التنبؤ بالتآزر من C و U Formins بشكل كبير ، في وجود Refromisyn و Fluconazole.

مشيرا إلى أن الأدوية شريكة تآزرية. ومن المثير للاهتمام أن نمو النوع البري لا يتم تثبيطه على الإطلاق. هنا ، لوحظ أكبر فرق في النمو ، بين 32 و 49 ساعة بعد التطعيم.

بمجرد إتقانها ، يمكن لهذه التقنية تقصير الوقت لتحديد التفاعلات الدوائية التآزرية. أثناء تنفيذ هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر عدم الجمع بين الأدوية في العمود الأخير في الصف الأخير من اختبار رقعة الشطرنج. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى لتحديد الجزيئات التآزرية من أجل تحديد التفاعلات الدوائية التآزرية الإضافية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام منهجية O2M لتحديد علامات التآزر المفترضة من أجل العثور على تفاعلات دوائية تآزرية مع الكائن الحي الذي تهمك. لا تنس أنه أثناء العمل مع بعض الجزيئات الصغيرة يمكن أن يكون خطيرا ويجب اتباع أي احتياطات في MSDS أثناء تنفيذ هذا البروتوكول.