Name: مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6 (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: اكتشف نموذج الفئران لدراسة التهاب القولون التحويلي باستخدام تقنية المورين القولوستومي القاصي. يتيح هذا البروتوكول فحص تفاعلات الجهاز المناعي مع الميكروبيوم دون الحاجة إلى حيوانات معدلة وراثياً.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

جميع الأساليب الموصوفة هنا أقرتها السلطة الحكومية البيطرية (لانديسامت für لاندويرتشافت und لبينسميتيلسيتشيرهيت مصائد الأسماك مكلينبيرج-فوربوميرن، (ﻷلف M-V)).
1-قبل الجراحة الرعاية وإعداد الحيوانات
<ol><li>لدى وصوله إلى مرفق الحيوانية، تقسيم الحيوانات (C57Bl/6) إلى مجموعات ذات حجم مماثل، قفص كل مجموعة معا، وإبقاء المجموعات ثابتة طوال هذه التجارب. ملاحظة: استخدام الحيوانات من نفس الجنس. تم الحصول على النتائج المذكورة مع الفئران الذكور. ملاحظة: إذا تم استخدام الحيوانات الذكور، مجموعات قفص بدءاً معا عندما تكون 7 أسابيع عمر حيث أنه يمكن إنشاء تسلسل هرمي، وبالتالي تقليل مخاطر السلوك العدواني خلال التجارب.</li>
	<li>أسبوع واحد على الأقل قبل الجراحة، قم بالتبديل إلى بالطاقة عالية (> 14 مللي جول/كغ)، ونسبة عالية من البروتين (> 20%) الأعلاف التي تحتوي على جميع العناصر النزرة الأساسية والفيتامينات (لمزيد من التفاصيل، انظر قائمة المواد). ملاحظة: أؤكد لجميع الفئران وزنها على الأقل 25 ز عندما يتم إجراء عملية جراحية.</li>
	<li>حمل التخدير والتسكين بالحقن داخل الكيتامين (القائمة 87 مغ/كغ) وهيدروكلوريد إكسيلازيني (القائمة 13 مغ/كغ). انتظر حتى تتسامح الفأرة الميكانيكية التحفيز، مثل الملعب أخمص القدمين، دون استجابة المحرك.</li>
	<li>تأمين الماوس ناركوتيزيد مع الأشرطة في موقف ضعيف في موضعها حرارة وضع مكتب العملية، وضمان تحديد المواقع أثناء عملية مستقرة وتجنب خسائر ساحقة من حرارة الجسم. ملاحظة: يجب أن يكون موضعها الحرارة درجة حرارة سطحية من 36 درجة مئوية إلى 40 درجة مئوية؛ يجب أن تكون درجة حرارة الغرفة التشغيل 21 درجة مئوية.</li>
</ol>2-القاصي كولوستومي العملية
<ol><li>حلق شعر البطن. قبل البدء بعملية جراحية، تطهير الحقل العملية ثلاث مرات باستخدام الكحول 70% وإيودوفور. ثني الميدانية العملية لضمان ظروف معقمة.</li>
	<li>القيام فتح البطن 15 ملم وسيط قبل إينسيسينج عضلات البطن والصفاق على طول ينيا ألبا، وبالتالي التقليل إلى أدنى حد من فقدان الدم.</li>
	<li>استخدام الملقط أتروماتيك دبغي اثنين، بعناية سحب الأعور والمحطة الطرفية الدقاق، وتصاعدي والقولون عرضية من التجويف الصفاقى. ملاحظة: كن حذراً تحد بشكل صارم التلاعب الميكانيكية للامعاء لمنع الإصابة بهياكل المساريقي العلوي.</li>
	<li>تحديد القطب سيكل وتصاعدي القولون والأمعاء (الأرقام 1a و 1b). ملاحظة: تحديد الهوية الصحيحة من القولون تصاعدي شرطا أساسيا للموضع الصحيح كولوستومي. في الحالات التي يكون فيها تشريح منطقة اللفائفيه غامضة، يحدد وجود البقع في بييير الأمعاء، ووجود البراز شكلت يميز القولون.</li>
	<li>استخدم مسطرة لتحديد موقف كولوستومي مستقبلا. ينبغي أن توضع 20 مم القاصي الصمام اللفائفيه كولوستومي البعيدة.</li>
	<li>جعل شق 3 مم ثانية في جدار البطن في الربع الأيمن العلوي. سحب الجزء القولون التي سبق تحديدها من خلال هذا الشق لتشكيل حلقة، مع الحرص على عدم تشويه في الحلقة.</li>
	<li>تمرير بعناية قنية رابعا 22-قياس مرونة من خلال ميسوكولون. الحرص على عدم إتلاف هياكل الأوعية الدموية المساريقي العلوي.</li>
	<li>عودة الأمعاء إلى التجويف الصفاقى.</li>
	<li>إصلاح طرفي أنبوب مرن للجلد باستخدام غرز بسيطة وخياطة ريسوربابل (مثلاً، بوليجلاكتين 910 أو بوليفيل 4-0 1/2 (ج)).</li>
	<li>قبل إغلاق فتح البطن، تؤدي السوائل الإنعاش باستخدام حقن المحلول الملحي 0.9% 0.5 مل داخل.</li>
	<li>إغلاق الصفاق وطبقة العضلات مع خياطة مستمر استخدام خياطة ريسوربابل (مثلاً، بوليجلاكتين 910 أو بوليفيل 4-0 1/2 (ج)). إغلاق الجلد بخياطة مستمرة استخدام خياطة ريسوربابل (على سبيل المثال، بوليجلاكتين 910 أو بوليفيل 4-0 1/2 (ج)).</li>
	<li>فتح حلقة القولون اكستيريوريزيد بأداء ترانسيكشن المجموع فرعي استخدام مقص ما يرام. تجنب كل ضرر مساريق. لا قطاع القولون تماما.</li>
	<li>إصلاح كل افتتاح كولوستومي باستخدام ثلاث غرز كامل-سمك واحد للصفاق والجلد استخدام مونوفيل، وخياطة قابلة للامتصاص (مثلاً، بوليديوكسانوني أو مونوفيل 6-0 3/8s). حلقة الزبائ، الذي نهاية-كولوستومي وظيفية، وحلقة ناقل، وناسور الأغشية المخاطية، يفصل بوضوح في هذه المرحلة (الشكل 1 ج). ملاحظة: يجب أن يكون وقت العملية أقل من 20 دقيقة للحد من الخسائر الحرارية والسوائل.</li>
	<li>بعد الانتهاء من الجراحة، وتطهير الأدوات استخدام حل خالية من ألدهيد تطهير في حمام الموجات فوق الصوتية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.</li>
</ol>3-الشام العملية (كولوتومي)
<ol><li>نفذ الخطوات 1.1. من خلال 2.4.</li>
	<li>استخدم مسطرة لتحديد موضع كولوتومي المستقبل. يجب أن ترحل إلى كولوتومي نفس المسافة من الصمام اللفائفيه كولوستومي في المجموعة التجريبية.</li>
	<li>فتح القولون على الأقل ثلثي محيط استخدام مقص جيد.</li>
	<li>إغلاق كولوتومي مع طبقة واحدة، توقف كامل-سمك خياطة استخدام مونوفيل، وخياطة قابلة للامتصاص (مثلاً، بوليديوكسانوني، مونوفيل 6-0 3/8s). ملاحظة: يجب أن يكون وقت العملية أقل من عشرين دقيقة على جراح جربت، الحد من الخسائر الحرارية والسوائل.</li>
	<li>نفذ الخطوات 2.10. ، 2.11. و 2.14.</li>
</ol>4-بعد العملية الجراحية الرعاية
<ol><li>إرجاع الحيوانات إلى اقفاصها. توفير مناخ جيد خفف من 37 درجة مئوية (مثلاً، مع مصباح الأشعة تحت حمراء) حتى الفئران مستيقظا تماما. وبعد ذلك، الحفاظ على الفئران في بيئة تنظيم درجة الحرارة والرطوبة (21 درجة مئوية؛ 30% ± 10% رطوبة نسبية). السماح بحرية الوصول إلى الغذاء ومياه الشرب. لتسهيل امتصاص السوائل، توفير العلف الحيواني إضافية غارقة في المياه.</li>
	<li>بدء التسكين بعد العملية الجراحية عن طريق حقن البوبرينورفين وزن الجسم 0.1 مغ/كغ الليبي عند الحيوانات تظهر استجابة للتحفيز الميكانيكي. كن حذراً لتجنب هبوط في التنفس.</li>
	<li>الملحق مياه الشرب مع ترامادول 1 ملغ/مل لاستمرار المسكنات خلال الأسبوع الأول بعد العملية الجراحية.</li>
	<li>للتعويض عن انخفاض كمية السائل نظراً لانخفاض التنقل، وتوفير "منصة متينة تشرب" في القفص خلال الأسبوع الأول بعد العملية الجراحية.</li>
	<li>وزن الحيوانات وسلوك الحيوانات نقاط يوميا خلال الأسبوع الأول، كل يوم الثاني خلال الفترة المتبقية الشهر الأول، وفي كل يوم الثالث خلال الشهر الثاني باستخدام درجة شدة المرض الموصوفة في كلينورت et al. 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

أن تعلن جميع المؤلفين أن لديهم لا تضارب في المصالح.

نموذج مورين من العاصمة التي عرضت في هذا البروتوكول موثوق يستنسخ نسيجية ملامح العاصمة البشرية (مثلاً، و حيثياته تطوير المسام اللمفاوية في submucosa قطاعات الأمعاء الملتهبة وسرداب تقصير، والتخفيضات في أرقام الخلية قدح). وبصرف النظر عن هذه الميزة، هذا النموذج هو الناجمة عن عامل المسبّب مشابهة جداً ويقدم بدوره سريرية من متوسطة إلى خفيفة الشدة كما الحال في البشر الأكثر تضررا.
للحصول على النتائج استنساخه والفتك المحيطة بالجراحة مقبولة، بعض الممارسات في مجال تقنيات ميكروسورجيكال ضرو...

في السنوات الأخيرة، عدد كبير من الكيانات غير المعدية التهاب القولون مختلفة من أمراض التهاب الأمعاء الكلاسيكية (إيبدس؛ أي.، المرض أو التهاب القولون التقرحي كرون) اتسمت سريرياً وهيستوباثولوجيكالي في البشر. الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تؤدي إلى تطوير هذه أشكال التهاب القولون هي ليست مفهومة تماما جزئيا لأن المناسبة نماذج حيوانية نادرة. تسريب التهاب القولون واحد من هذه الكيانات وصف مؤخرا. على الرغم من أن المصطلح أطلق في عام 1980 من Glotzer1، وصف الأولى النمط الظاهري مماثلة قدمت في عام 1972 مورسون2. تطور المرض في 50% إلى 91% مرضى مع تحويل انتيروستومي، وتتفاوت شدته السريرية3،4. ونظرا للإصابة السنوية بحوالي 000 120 مريض كولوستومي في الولايات المتحدة الأمريكية، يشكل هذا الكيان المرض مشكلة صحية هامة.
وكان الهدف العام المتمثل في وضع هذا البروتوكول تقديم نموذج DC مورين التي تعتمد على الزناد التهاب القولون مشابهة للتي تشهدها العاصمة البشرية وأن يستنسخ الميزات نسيجية الأولية للأمراض البشرية. خلافا لنماذج أخرى مورين التهاب القولون، التهاب القولون التعريفي في نموذجنا لا تتطلب الحيوانات المحورة وراثيا (مثلالفئران المعدلة وراثيا إيل-7، N-كادهيرين الفئران السلبية السائدة أو الفئران-/- TGFβ)، التطبيق كيميائيا غضب من المواد (مثلاً, ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS)-التهاب القولون المستحث، أو حامض السلفونيك ترينيتروبينزيني (تنبس)-التي يسببها التهاب القولون)، أو نقل السكان خلية معينة في الفئران القصور المناعي (كما هو الحال في نقلعالية CD45RB نموذج لالتهاب القولون) (استعراض، انظر5). خلافا لنماذج أخرى، المناعي سليمة لنموذجنا DC يسمح تقييم الآلية المناعية التي تشارك في تطوير العاصمة. الحد التهاب الغشاء المخاطي للجزء المتعلق بالامعاء المستبعدة يسمح تقييم انعكاساتها على حصانة المخاطي في أجزاء أخرى من الجهاز الهضمي، في التوازن المناعي في المقصورات الأخرى محصنة من الأمعاء (مثلاً ، بير في بقع والغدد الليمفاوية ميسينتيريالي)، وفي التوازن المناعي في الحي كامل. وأخيراً، لدينا نموذج يشكل أداة مناسبة للتحقيق في آليات السيطرة المحلية المحفزات الالتهابات الناشئة عن التغيرات في البيئة المحلية العادية لكلا ميكروبيومي المحلية، فضلا عن المستضدات غير معروف.

<table><tbody><tr><td> مواد التشغيل</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>طبقة أساسية للحرارة ، 6 وات</td><td>ThermoLux ، Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول 70٪ (مع ميثيل إيثيل كيتون)</td> <td>صيدلية مستشفى جامعة Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أدوات تطبيق خشبية ، رأس قطني صغير من جانب واحد ، عصا خشبية ، بطول 150 مم</td><td>Centramed GmbH ، ألمانيا</td><td>8308370</td><td>لتطهير مجال العملية</td></tr><tr><td>مقص</td><td>Aesculap (BRAUN)</td> <td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>ملقط DeBakey الرضحي</td><td>Aesculap (BRAUN)</td> <td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة</td><td>Aesculap (BRAUN)</td> <td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety iv قنية 22G</td><td>Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 بنفسجي مضفر ؛ V-5 17 م 1/2 ج ؛ 70 سم</td><td>ETHICON، Inc.</td><td>VCP994H</td><td></td></tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil ؛ V-18 13 مم 3/8c ؛ 70 سم</td><td>ETHICON، Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 مل (محاقن بإبرة داخلية معقمة)</td> <td>BD</td><td>Medical 305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1،3-diamin)</td> <td>ANTISEPTICA ، ألمانيا</td><td>18824-01</td><td>تطهير الأدوات الجراحية في الحمام بالموجات فوق الصوتية</td></tr> <tr><td>الأدوية </td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>الكيتامين 10٪ ، 100 مجم / مل (هيدروكلوريد الكيتامين)</td> <td>Selectavet ، د. أوتو فيشر جي</td> إم بي <td>إتش 9089.01.00</td><td>87 مجم / كجم i.p.</td></tr> <tr><td>Xylasel ، 20 مجم / مل (زيلازين هيدروكلوريد)</td> <td>سيليكتافيت ، د. أوتو فيشر GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 مجم / كجم i.p.</td></tr> <tr><td>كلوريد الصوديوم 0.9٪</td> <td>براون ميلسونجن إيه جي ، ألمانيا</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>بوبرينوفيت 0.3 مجم / مل (بوبرينورفين)</td> <td>باير ، ألمانيا</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 مجم / كجم s.c.</td></tr> <tr><td>قطرات الترامال, 100 ملغ/مل (ترامادول هيدروكلوريد)غرام</td> <td>&uuml; nenthal GmbH ، ألمانيا</td><td>10116838</td><td>1 مجم / مل مياه شرب</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) &nbsp ؛</td><td>Cephasaar GmbH ، ألمانيا</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 مجم / كجم من وزن الجسم i.p.</td></tr><tr><td>metronidazole 5 مجم / مل</td><td>Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 مجم / كجم من وزن الجسم i.p</td></tr><tr><td>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Germany</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>مشروب صلب Dehyprev Vit BIO ، الحقائب</td><td>TripleATrading ، هولندا</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV ، ألمانيا</td><td></td><td>المجهر الخفيف</td></tr><tr><td>VetScan HM 5 & nbsp ؛</td><td>Abaxis ، الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>770-9000</td><td>محلل أمراض الدم البيطري من 50 & micro ؛ ل الوريدية EDTA-الدم</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (حمام بالموجات فوق الصوتية)</td><td>Bandelin الإلكترونيات, ألمانيا</td><td>RK 100 H</td><td>تطهير الأدوات الجراحية</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 البرمجيات</td><td>نيكون الأدوات أوروبا BV, ألمانيا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism الإصدار 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

تسريب التهاب القولون (DC) حالة سريرية متكررة التي تحدث في المرضى مع قطاعات الأمعاء مستبعدة من مجرى البراز نتيجة تحويل انتيروستومي. مسببات هذا المرض ما زال غير محددة، لكن يبدو أن تختلف عن تلك الأمراض الكلاسيكية التهاب الأمعاء مثل مرض كرون والتهاب القولون التقرحي. البحوث الرامية إلى فك الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تؤدي إلى تطور هذا المرض تعطلت بعدم وجود نموذج مورين مناسب. ينشئ هذا البروتوكول نموذج مورين من العاصمة التي تسهل دراسة دور النظام المناعي وتفاعله مع ميكروبيومي في وضع DC. في هذا النموذج باستخدام الحيوانات C57BL/6، تستبعد الأجزاء البعيدة من القولون من تيار البراز بإنشاء كولوستومي القاصي وأحداث تنمية خفيفة إلى معتدلة التهاب في قطاعات الأمعاء المستبعدة واستنساخ الآفات السمة المميزة للإنسان العاصمة مع استجابة التهابات الجهازية معتدلة. على النقيض من نموذج الفئران، تتوفر عدد كبير من نماذج مورين معدلة وراثيا على خلفية C57BL/6. المزيج من هذه الحيوانات مع نموذجنا يسمح الأدوار المحتملة للفرد السيتوكينات أو المستقطبات أو مستقبلات الجزيئات النشطة بيولوجيا (مثلاً، انترلوكين (إيل)-17؛ IL-10، تشيموكيني CXCL13، ومستقبلات تشيموكيني CXCR5 و CCR7، ومستقبلات سفينجوسيني-1-فوسفات 4) إلى تقييم في الآلية المرضية للعاصمة. توافر سلالات الماوس كونجينيك على خلفية C57BL/6 يسهل إلى حد كبير نقل التجارب تحديد دور كل من أنواع الخلايا المتميزة المشاركة في المسببات للعاصمة. وأخيراً، يقدم النموذج الفرصة لتقييم تأثيرات التدخلات المحلية (مثلاً، تعديل ميكروبيومي المحلية أو العلاج للالتهابات المحلية) على حصانة المخاطي في قطاعات الأمعاء المتضررة وغير المتضررة وفي التوازن المناعي الجهازية.

جراحة هو جيد التحمل في المجموعات الشام (كولوتومي) والتجريبية (كولوستومي) على حد سواء. الوفيات المحيطة بالجراحة يجب إلا تتجاوز 10% عندما يتم بشكل صحيح تنفيذ إدارة الجراحة والمحيطة بالجراحة. في الأسبوع الأول بعد الجراحة، يعتبر فقدان الوزن الكبير في كلتا المجموعتين التجريبية والشام. حيوانات مجموعة الشام بلوغ بهم نادر الوزن عادة نحو اليوم الرابع بعد العملية الجراحية، ولكن حدوثه يوم واحد في وقت لاحق في المجموعة التجريبية. فقدان الوزن هو أكثر وضوحاً في المجموعة التجريبية، وصلت إلى 21.7 في المائ...

مورين كولوستومي القاصي نموذجا مورين لالتهاب القولون تسريب البشرية، التهاب القولون الليمفاوي غالباً في الجزء القولون مستبعدة من مجرى البراز.

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تسهيل دراسة دور الجهاز المناعي وتفاعله مع الميكروبيوم في تطور التهاب القولون التحويلي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بالتهاب القولون التحويلي الذي يحدث في كلا الجزأين المستبعدين من تيار البراز ويؤثر على ما يصل إلى 90٪ من المرضى الذين يعانون من فغر الأمعاء المحول. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها لا تتطلب معدلة وراثيا ، أو استخدام مواد مهيجة كيميائيا أو نقل مجموعات خلايا معينة إلى الفئران التي تعاني من نقص المناعة للحث على التهاب القولون.عند الوصول إلى منشأة ، قسم الفئران إلى مجموعات متشابهة الحجم. قم بوضع كل مجموعة معا وحافظ على ثبات المجموعات طوال التجارب. قبل أسبوع واحد على الأقل من الجراحة ، قم بالتبديل إلى تغذية عالية الطاقة وغنية بالبروتين تحتوي على جميع العناصر النزرة والفيتامينات الأساسية.للتحضير للجراحة بعد تخدير وفقا لبروتوكول النص ، استخدم شريطا لتثبيت في وضع ضعيف على وسادة تدفئة لمنع فقدان حرارة الجسم. بعد ذلك ، تأكد من أن الفأر يتحمل التحفيز الميكانيكي ، مثل قرصة إصبع القدم دون استجابة حركية.قبل البدء في الجراحة ، قم بتطهير مجال العملية ثلاث مرات باستخدام الكحول 70٪ و iota 4. ثنى مجال التشغيل لضمان الظروف المعقمة. قم بإجراء بضع البطن المتوسط 15 مم عن طريق شق عضلات البطن والصفاق على طول الخط الصغير وبالتالي تقليل فقدان الدم.بعد ذلك ، باستخدام ملقطين غير رضحيين ، اسحب الأعور بعناية ، الدقاق الطرفي والقولون الهابط والعرضي من التجويف البريتوني. احرص على الحد من التلاعب الميكانيكي للأمعاء لتجنب إصابة الهياكل المساريقية والحفاظ على الوفرة المثلى للأمعاء. بعد ذلك ، حدد القطب الأعرج والقولون الصاعد والأمعاء الدقيقة.إذا كان تشريح المنطقة اللفائفية غامضا ، فإن وجود بقع باير يحدد الأمعاء الدقيقة ووجود أشكال يميز القولون. استخدم مسطرة لتحديد موضع فغر القولون في المستقبل. يجب وضعه على بعد 20 مم من الصمام اللفائفي لفغر القولون البعيد.قم بعمل شق ثان بطول 3 مم في جدار البطن في الربع الأيمن العلوي. بعد ذلك ، اسحب الجزء القولون المحدد مسبقا من خلال هذا الشق لتشكيل حلقة ، مع الحرص على عدم تشويه الحلقة. مرر بعناية قنية وريدية مرنة بمقياس 22 عبر القولون المتوسط ، مع الحرص على عدم إتلاف هياكل الأوعية الدموية المساريقية.ثم أعد الأمعاء إلى التجويف البريتوني. باستخدام غرز بسيطة وخياطة قابلة للامتصاص ، قم بتثبيت طرفي الأنبوب المرن على الجلد. قبل إغلاق شق البطن ، قم بإجراء إنعاش السوائل باستخدام حقن داخل الصفاق بمقدار 0.5 مل من محلول ملحي 0.9٪.أغلق الصفاق وطبقة العضلات بخياطة مستمرة قابلة للامتصاص. ثم أغلق الجلد بطريقة مماثلة. باستخدام مقص دقيق ، افتح حلقة القولون الخارجية عن طريق إجراء قطع فرعي.تجنب كل إصابات المساريق ولا تقم بتحويل القولون بالكامل. باستخدام خياطة أحادية قابلة للامتصاص ، قم بتثبيت كل فتحة لفغر القولون باستخدام ثلاث غرز مفردة كاملة السماكة على الصفاق والجلد. يتم فصل الحلقة الواردة ، وهي فغر القولون الوظيفي والحلقة الصادرة ، وهي ناسور مخاطي ، بوضوح في هذه المرحلة.لإجراء بضع القولون ، بعد تحديد القطب الرأسي والقولون الصاعد والأمعاء الدقيقة كما هو موضح في فغر القولون البعيد ، استخدم مسطرة لتحديد موضع بضع القولون المستقبلي الذي يجب وضعه على نفس المسافة من الصمام اللفائفي مثل فغر القولون. باستخدام مقص ناعم ، افتح القولون ثلثي محيطه على الأقل. باستخدام خياطة أحادية الامتصاص ، أغلق استئصال القولون بخياطة متقطعة بسماكة كاملة قبل إجراء إنعاش السوائل وإغلاق الصفاق والجلد كما كان من قبل.بعد الإجراء ، أعد إلى أقفاصها وضعها تحت مصباح الأشعة تحت الحمراء عند 37 درجة مئوية حتى تستيقظ تماما قبل إعادتها إلى بيئة يتم التحكم فيها بدرجة الحرارة والرطوبة. عندما تظهر استجابة للتحفيز الميكانيكي ، ابدأ التسكين بعد الجراحة ، عن طريق حقن 0.1 مجم لكل كيلوغرام من وزن الجسم ، بوبرينورفين SC. تحقق بعناية من علامات تثبيط الجهاز التنفسي. استكمل مياه الشرب ب 1 ملغ لكل مل من الترامادول لاستمرار التسكين خلال الأسبوع الأول بعد الجراحة.للتعويض عن انخفاض تناول السوائل بسبب قلة الحركة ، قم بتوفير وسادة شراب صلبة في القفص خلال الأسبوع الأول بعد الجراحة. أخيرا ، قم بوزن وقم بتسجيل سلوك يوميا خلال الأسبوع الأول ، وكل يومين خلال الفترة المتبقية من الشهر الأول ، وكل يوم ثالث خلال الشهر الثاني. الجراحة جيدة التحمل في كل من المجموعات التجريبية والزائفة.يكون فقدان الوزن أكثر وضوحا في المجموعة التجريبية التي تصل إلى 21.7٪ من وزن الجسم الأولي. في المقابل ، تفقد الوهمية 10.8٪ من وزن الجسم الأولي. يبلغ إجمالي معدل الوفيات خلال أول 60 يوما بعد الجراحة حوالي 40٪ في مجموعة فغر القولون وحوالي 10٪ في المجموعة الوهمية.حدثت معظم الوفيات خلال الأسبوع الأول بعد الجراحة ، مع ظهور أسباب الوفاة في هذا الشكل. يؤدي فغر القولون البعيد في الفئران إلى تطور التهاب القولون الليمفاوي في الغالب ، مما يؤدي إلى استنساخ السمات النسيجية المميزة للتيار المستمر البشري ، ويتم تقصير طول القبو بشكل كبير في أجزاء الأمعاء المستبعدة ويصل إلى دلالة إحصائية بعد 14 يوما من تحويل البراز. يتم تقليل طول القبو الحامل لخلية الكأس بعد 30 يوما في أجزاء الأمعاء المستبعدة.يتم أيضا تقليل أعداد خلايا الكأس المطلقة بشكل كبير في الخبايا في الجزء الأمعاء المستبعد بعد 14 يوما بعد الجراحة. تتطلب الآفة المميزة ل DC ، تطور البصيلات اللمفاوية في الغشاء المخاطي مدة أطول من انحراف البراز. على الرغم من أنه يمكن ملاحظة زيادة عدد البصيلات اللمفاوية في وقت مبكر يصل إلى أسبوعين ، إلا أن الاختلافات تصبح كبيرة بعد شهرين.بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء فغر القولون البعيد الفئر. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من 20 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. يمكن دمج هذا النموذج مع نماذج أخرى معدلة وراثيا أو تجارب النقل في سلالات الفئران المنشأة ، من أجل معالجة دور الوسطاء الالتهابيين لمجموعات خلايا معينة ، والتسبب في التهاب القولون التحويلي.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

ديكستران سلفات الصوديوم (DSS) في إدارة مياه الشرب هو تأسيس نموذج إصابة الفئران التهاب التهاب القولون الحاد. هذا البروتوكول يحدد طريقة لمعالجة مفاجآت صيف دبي ، وإعداد الأنسجة.

النمذجة باستخدام الفئران التهاب القولون ديكستران سلفات الصوديوم (DSS)

ونحن يبرهن على وجود بروتوكول الذي azoxymethane إدارة كيل سمية جينية (AOM)، يليه ثلاث دورات من الصوديوم وكيل الموالية للالتهابات كبريتات ديكستران (DSS) بسرعة وباستمرار يولد أورام القولون في الفئران مع التشابه المورفولوجي والجزيئي لتلك التي ظهرت في التهاب القولون الإنسان المرتبطة بالسرطان.

النمذجة التهاب القولون المتعاونة مع السرطان مع Azoxymethane (AOM) ودكستران كبريتات الصوديوم (DSS)

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لتوليد حلقة القولون القريبة من الفأر أو مقطع pcLoop متبوعا بالحقن داخل اللمعة لعلامات الفلورسنت في الجزء لدراسة نفاذية الظهارة المعوية.

توليد نموذج حلقة القولون القريب للفأر: إجراء جراحي لتوليد حلقة القولون القريبة وقياس نفاذية الأمعاء عن طريق الكشف عن علامات الفلورسنت في المصل بعد الحقن داخل اللمعة

يوضح هذا الفيديو تقنية لتوليد نموذج الفئران الناجم عن المواد الكيميائية لالتهاب القولون — وهو مرض التهاب في الأمعاء. يسمح للفأر باستهلاك محلول كبريتات الصوديوم (DSS) لمدة كافية. عند الاستهلاك، يتلف DSS حاجز المخاط والطبقة الظهارية في القولون، مما يسمح لميكروبات الأمعاء بدخول الأنسجة الأساسية — حيث يتم استشعارها بواسطة الخلايا المناعية المقيمة للتوسط في استجابة مناعية مبالغ فيها، مما يؤدي إلى الالتهاب.

تقنية لتوليد نموذج الفئران لالتهاب القولون الناجم عن كبريتات الصوديوم ديكستران

الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة الالتهابات البكتيرية المعوية وكذلك استضافة الاستجابات المناعية والتهاب القولون في الفئران. هذا البروتوكول يحدد قياس سلامة الحاجز، تحميل الممرض والأضرار النسيجية السماح للتوصيف دقيق للمساهمات الممرض والمضيف لالتهاب القولون المعدية الفئران.

ال<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; نموذج الفأر: دراسة العوامل الممرضة والمضيفة المساهمات في التهاب القولون المعدية

على مدى السنوات القليلة الماضية، ظهرت المناظير الجيل الجديد كمساعدات البحوث التشخيصية الهامة لتقييم التهاب القولون وأورام القولون والمستقيم الفئران. نقدم هنا بروتوكول مفصلة لتقييم بالمنظار لأورام القولون والمستقيم والتهاب في الفئران، فضلا عن نظام التهديف الرواية التي تستخدم معرفات العشرية لتوثيق شدة التهاب القولون بالمنظار وأورام القولون والمستقيم.

تنظير القولون في الفئران مرنة لتقييم شدة التهاب القولون والقولون والمستقيم الأورام باستخدام نظام التحقق من صحة بالمنظار التهديف

ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.

نموذج الفأر المهندسة وراثيا لسرطان القولون والمستقيم المتفرقة

العراقيل المعوية هي انسداد جزئي أو كامل للامعاء التي يمكن أن تتسبب في الأم شديدة في البطن، الغثيان والقيء، ومنع مرور البراز. ويتم هذا الإجراء لخلق أوبسروكتيونس الجزئي المعوية في الفئران يمكن الاعتماد عليها في دراسة الآليات الأساسية لنمو الخلايا المرضية والوفاة في الأمعاء.

نموذج الفأر من انسداد الأمعاء الجزئي

تسرب أناستوموتيك أو انهيار بعد الجراحة سبب رئيسي للوفيات والمراضة بعد العملية الجراحية. لدينا الجراحة لخلق ملامسة colonic طريقة موثوقة واستنساخه لدراسة آليات الشفاء من أناستوموسيس.

إنشاء ملامسة Colonic في الفئران

يصف البروتوكول المعروض إزالة جراحية سهلة للتذييل (تصحيح caecal) في فأر يتبعه تحريض سرطان القولون والمستقيم المرتبط بمرض الأمعاء الالتهابي. هذا النموذج استئصال الزائدة الدودية murine تمكن من التحقيق في الدور البيولوجي للتذييل في مسببات الأمراض من أمراض الجهاز الهضمي البشري.

نموذج استئصال الزائدة الدودية Murine من التهاب القولون المزمن المرتبطة سرطان القولون والمستقيم عن طريق توطين دقيق من التصحيح Caecal

نصف نموذج الفئران للعلص بعد الجراحة الناتج عن التلاعب المعوي. تم تقييم وظيفة العبور المعدي المعوي والتغيرات المرضية وتنشيط الخلايا المناعية بعد 24 ساعة من الجراحة.

نموذج العنقوص بعد الجراحة

اكتشف نموذج الفئران لدراسة التهاب القولون التحويلي باستخدام تقنية المورين القولوستومي القاصي. يتيح هذا البروتوكول فحص تفاعلات الجهاز المناعي مع الميكروبيوم دون الحاجة إلى حيوانات معدلة وراثياً.

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6

استكشف المزيد من الفيديوهات