Name: بروتوكول لخلق الجروح المزمنة في الفئران السكري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: اكتشف بروتوكولًا لإنشاء جروح مزمنة في فئران db/db السكرية باستخدام الإجهاد التأكسدي وتثبيط الإنزيمات المضادة للأكسدة. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من دراسة آليات تكوّن الجروح المزمنة واختقار العلاجات الجديدة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وليس لدى أصحاب البلاغ أي اعتراف.

ويعلن صاحبا البلاغ أنهما ليس لديهما مصالح مالية متنافسة.

بمجرد إنشاء الجروح المزمنة على الفئران، يمكن استخدام النموذج لدراسة عمليات التئام الجروح المعاقة التي تنطوي عليها بداية المزمنة. ويمكن أيضا استخدام النموذج لاختبار فعالية مجموعة واسعة من المواد الكيميائية والأدوية التي يمكن أن تعكس تطور الجروح المزمنة وضعف الشفاء ويؤدي إلى إغلاق الجروح والشفاء. يمكن دراسة نقاط زمنية مختلفة بعد بداية المزمنة: على سبيل المثال، أيام 1-5 بعد الإصابة للبداية المبكرة للمزمنة والأيام 20 وما بعدها للجروح المزمنة كاملة القوة.
نموذج الجروح المزمنة هو أيضا نموذج...

يتضمن التئام الجروح العمليات الخلوية والجزيئية المعقدة التي يتم تنظيمها زمنياً ومكانياً، وتنظم في مراحل متتابعة ومتداخلة تشمل العديد من أنواع الخلايا المختلفة بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الاستجابة المناعية والأوعية الدموية النظام1. مباشرة بعد الجلد يعاني من إصابة، والعوامل وخلايا الدم تتجمع إلى موقع الجرح والشروع في تتالي تخثر لتشكيل جلطة. بعد تحقيق التوازن، تمدد الأوعية الدموية للسماح للأكسجين في موقع الجرح، والمواد الغذائية، والأنزيمات، والأجسام المضادة والعوامل الكيميائية التي تجذب الخلايا المتعددة الأشكال إلى إزالة الجرح من الحطام الأجنبي وإفراز الإنزيمات البروتيوليتيك 2.تفرز الصفائح الدموية المنشطة مجموعة متنوعة من عوامل النمو لتحفيز الخلايا الكيراتينية على حافة الجرح لإعادة epitheliliize المنطقة المصابة. الخلايا الأحادية التي تم تجنيدها إلى موقع الجرح تميز في الضامة التي البكتيريا phagocytose والعدلات الميتة وتفرز عوامل إضافية للحفاظ على إشارات الكيراتينية التكاثرية والمؤيدة للهجرة. في مرحلة الانتشار ، في حين تستمر إعادة الظهارة ، تستمر أنسجة التحبيب الجديدة المكونة من الخلايا الليفية ، والخلايا الأحادية /الضامة ، والخلايا الليمفاوية ، والخلايا البطانية في عملية إعادة البناء2. يتم تحفيز تكوين الأوعية الدموية من خلال تعزيز انتشار الخلايا البطانية والهجرة، مما يؤدي إلى تطوير سفينة جديدة. Epithelialization وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية بناء حاجز ضد البيئة. كما يشفي الجرح وتحبيب الأنسجة يتطور إلى ندبة، والمبرمج يزيل الخلايا الالتهابية، والخلايا الليفية، والخلايا البطانية دون التسبب في تلف الأنسجة إضافية. يتم تعزيز قوة الشد من الأنسجة عن طريق الخلايا الليفية إعادة عرض مكونات مختلفة من المصفوفة خارج الخلية، مثل الكولاجين، بحيث الأنسجة شكلت حديثا هو تقريبا قوية ومرنة مثل الجلد غير المصاب2.
أي انحراف عن هذا التقدم المتضافر للغاية نحو إغلاق الجرح يؤدي إلى ضعف و / أو الجروح المزمنة3. وتتميز الجروح المزمنة بزيادة الإجهاد التأكسدي، والتهاب مزمن، وmicrovasculature التالفة، ومصفوفة الكولاجين غير طبيعية في الجرح4. الإجهاد التأكسدي، وخاصة في الجرح، يمكن أن يؤخر إغلاق الجرح2،5. عندما، في المرحلة الأولى من التئام الجروح، تصبح المرحلة الالتهابية غير منظمة، والأنسجة المضيفة يفترض ضررا كبيرا بسبب التدفق المستمر للخلايا الالتهابية5 التي تطلق الإنزيمات السامة للخلايا، وزيادة في الجذور الأكسجين الحرة، و الوسطاء الالتهابية غير المنظمة، مما أدى إلى وفاة الخلية6،7.
في هذه البيئة الدقيقة المدمرة، البكتيريا التي تشكل biofilm الاستفادة من المواد الغذائية المضيفة والمساهمة في تلف الأنسجة المضيفة2. هذه biofilms من الصعب السيطرة عليها وإزالتها لأن المواد البوليمرية خارج الخلية رطبة تتكون من البروتينات، الحمض النووي، RNA، والسكريات يسمح البكتيريا التي تأوي داخل لتكون متسامحة مع العلاجات المضادات الحيوية التقليدية والتهرب من استجابة المناعة الفطريةوالتكيفية 2،8،9.
دراسة الجروح المزمنة أمر بالغ الأهمية لأنها تؤثر على ~ 6.5 مليون شخص وتكلف ~ 40 مليار دولار سنويا في الولايات المتحدة وحدها10. المرضى الذين يعانون من مرض السكري قد زادت من مخاطر الإصابة بالجروح المزمنة التي تتطلب بتر الأطراف من أجل احتواء انتشار العدوى. هؤلاء المرضى لديهم خطر الوفاة 50٪ في غضون 5 سنوات من البتر الذي يعزى إلى آلية الفيزيولوجيا المرضية لمرض السكري11. العلاقة بين الجهاز المناعي للمضيف والميكروبيوم في التئام الجروح هو موضوع حيوي من البحوث الجارية لأن عواقب الجروح المزمنة، إذا لم يتم حلها، وتشمل بتر والوفاة12.
على الرغم من أنه تم بذل جهد كبير في فهم كيفية تطور الجروح المزمنة في البشر، فإنه لا يزال من غير الواضح كيف ولماذا تشكل الجروح المزمنة. من الصعب إجراء تجارب لدراسة آليات ضعف الشفاء في البشر، ولا يرى أخصائيو التئام الجروح سوى المرضى الذين يعانون من الجروح المزمنة التي وصلت بالفعل إلى المزمنة لأسابيع إلى أشهر. وهكذا، فإن المتخصصين غير قادرين على دراسة ما هي العمليات التي ذهبت خطأ التي تؤدي إلى تطور الجرح لتصبح مزمنة2. هناك نقص في النماذج الحيوانية التي تلخص تعقيد الجروح البشرية المزمنة. وحتى تم تطوير نموذجنا، لم يكن هناك نموذج لدراسات الجروح المزمنة.
تم تطوير نموذج الجرح المزمن في الفئران التي لديها طفرة في مستقبلات اللبتين(db/db-/-)13. هذه الفئران هي السمنة والسكري، وتعاني من ضعف الشفاء ولكن لا تتطور الجروح المزمنة14. متوسط مستويات الجلوكوز في الدم حول 200 ملغ / دل, ولكن يمكن أن تكون عالية مثل 400 ملغ / دل15. عندما يتم حث مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي (OS) في أنسجة الجرح مباشرة بعد الجرح ، يصبح الجرحمزمنا 16. وتعتبر الجروح المزمنة لمدة 20 يوما ً وتبقى مفتوحة لمدة 60 يوماً أو أكثر. ويمكن رؤية Biofilm التي تنتجها البكتيريا النامية بداية ثلاثة أيام بعد الجرح. يمكن رؤية فيلم حيوي ناضج بعد 20 يوما من الإصابة ويستمر حتى إغلاق أي من الجرح. البكتيريا التي تشكل biofilm نجد في هذه الفئران وجدت أيضا في الجروح المزمنة السكري الإنسان.
يتم تحفيز الإجهاد التأكسدي عن طريق علاج الجروح مع اثنين من مثبطات الإنزيمات المضادة للأكسدة، كاتالاز والجلوتاثيون بيروكسيداز، وهما إنزيمان مع القدرة على كسر بيروكسيد الهيدروجين. بيروكسيد الهيدروجين هو نوع من الأكسجين التفاعلي ويمكن أن يسبب تلف الخلايا من خلال أكسدة البروتينات والدهون والحمض النووي. كاتالاز يحفز تحلل بيروكسيد الهيدروجين إلى مواد كيميائية أقل ضررا الأكسجين والماء. 3-أمينو-1,2,4-تريازول (ATZ) يمنع الكاتالاز عن طريق ربط على وجه التحديد وبشكل مشترك إلى المركز النشط للإنزيم، وتعطيله17،18،19. وقد استخدمت ATZ لدراسة آثار الإجهاد التأكسدي على حد سواء في المختبر وفي الجسم الحي من خلال تثبيط catalase20،21،22،23،24. الجلوتاثيون بيروكسيداز يحفز الحد من بيروكسيد الهيدروجين من خلال مضادات الأكسدة، الجلوتاثيون، وهو إنزيم مهم يحمي الخلية من الإجهاد التأكسدي25. حمض ميركابتوسوتشيك (MSA) يمنع الجلوتاثيون بيروكسيداز عن طريق ربط الموقع النشط سيلينوسيستين للإنزيم مع ثيول، وتعطيل ه26. وقد استخدمت MSA لدراسة آثار الإجهاد التأكسدي في المختبر وفي الجسم الحي وكذلك20،27،28.
هذا النموذج الجديد من الجروح المزمنة هو نموذج قوي للدراسة لأنه يشارك العديد من نفس الميزات التي لوحظت في الجروح المزمنة السكري البشري، بما في ذلك التهاب لفترات طويلة من زيادة نظام التشغيل وتشكيل biofilm الطبيعية من ميكروبيوم الجلد. وقد ضعفت الجروح التفاعل الجلدي والبشرة، وترسب المصفوفة غير الطبيعية، وضعف تكوين الأوعية الدموية والأوعية الدموية التالفة. سوف تتطور الجروح المزمنة في كل من الفئران الذكور والإناث، بحيث يمكن استخدام كلا الجنسين لدراسة الجروح المزمنة. ولذلك، فإن نموذج الجرح المزمن يمكن أن يسهم بشكل كبير في تعزيز الفهم الأساسي لكيفية بدء هذه الجروح. استخدام هذا النموذج الجروح المزمنة يمكن أن توفر إجابات على الأسئلة الأساسية حول كيفية بدء المزمنة / تحقيقها من خلال مساهمات من علم وظائف الأعضاء من ضعف التئام الجروح والميكروبيوم من المضيف.

<table><tbody><tr><td>ب 6. BKS(D)-Leprdb/J&nbsp;</td><td>مختبر جاكسون&nbsp;</td><td>00697</td><td>متماثل الزيجوت ومتغاير الزيجوت المتاحة&nbsp;</td></tr><tr><td>غسول مزيل الشعر ناير مع الصبار المهدئ واللانولين</td><td>ناير</td><td></td><td>مزيل شعر كيميائي</td></tr><tr><td>بوبرينيكس (بوبرينورفين هيدروكلورايدي) هنري</td> <td>شتاين لصحة</td><td>059122</td><td>0.3 مجم / مل ، الفئة 3</td></tr><tr><td>3-أمينو -1،2،4-تريازول (ATZ) TCI</td><td></td> <td>A0432</td><td></td></tr><tr><td>حمض ميركابتوسوكسينيك (MSA) ألدريتش</td><td></td> <td>88460</td><td></td></tr><tr><td>محلول عازلة الفوسفات (PBS)</td><td></td><td></td><td>الأوتوكلاف معقمة</td></tr>يجب أن يكون <tr><td>خزان الأكسجين</td><td></td><td></td><td></td>Isoflurane Henry Schein Animal Health 029405 NDC 11695-6776-2</tr><tr><td></td><td>متوافقا مع نظام التبخير</td>مبخر Isoflurane JA Baulch &<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> شركاه&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ماكينة قص الشعر Wahl</td><td></td><td></td><td>Lithium Ion Pro</td></tr><tr><td>Acu Punch 7mm خزعة الجلد Acuderm</td><td>Inc.</td><td>P750</td><td></td></tr><tr><td>Tegaderm&nbsp;</td><td>3M</td><td>Ref: 1624 واط</td><td>ضمادة فيلم شفافة (6 سم × 7 سم)</td></tr><tr><td>وسادة تسخين</td><td>Conair</td><td></td><td>وسادة تسخين جافة</td></tr> رطبة <tr><td>محاقن الأنسولين</td><td>BD</td><td></td><td>329461 0.35 مم (28 جم) × 12.7 مم (1/2 بوصة) 70</td></tr><tr><td>٪ إيثانول</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tweezers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>مقص</td> <td>جراحي شارب</td><td></td><td></td></tr><tr>ملعقة <td></td><td></td><td></td><td>معدنية رقيقة</td></tr><tr><td>أنابيب</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ماوس مخروط</td><td></td><td></td><td></td>الأنف</tr><tr><td>قفازات</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>حاويات بلاستيكية</td><td></td><td></td><td></td> صغيرة</tr></tbody></table>

بروتوكول لخلق الجروح المزمنة في الفئران السكري

Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

تتطور الجروح المزمنة نتيجة للتنظيم المعيب في واحدة أو أكثر من العمليات الخلوية والجزيئية المعقدة التي تنطوي على الشفاء السليم. أنها تؤثر على ~ 6.5M الناس وتكلفة ~ $40B / سنة في الولايات المتحدة وحدها. على الرغم من أنه تم بذل جهد كبير في فهم كيفية تطور الجروح المزمنة في البشر، لا تزال الأسئلة الأساسية دون إجابة. في الآونة الأخيرة، قمنا بتطوير نموذج فأر جديد للجروح المزمنة السكرية التي لها العديد من خصائص الجروح المزمنة البشرية. باستخدام db/db-/- الفئران، يمكننا توليد الجروح المزمنة عن طريق تحفيز مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي (OS) في أنسجة الجرح مباشرة بعد الإصابة، وذلك باستخدام علاج لمرة واحدة مع مثبطات محددة للإنزيمات المضادة للأكسدة catalase وcatalase الجلوتاثيون بيروكسيداز. هذه الجروح لديها مستويات عالية من نظام التشغيل، وتطوير biofilm بشكل طبيعي، وتصبح مزمنة تماما في غضون 20 يوما بعد العلاج، ويمكن أن تبقى مفتوحة أكثر لأكثر من 60 يوما. هذا النموذج الجديد لديه العديد من الميزات من الجروح المزمنة السكري في البشر، وبالتالي يمكن أن تسهم بشكل كبير في تعزيز الفهم الأساسي لكيفية الجروح تصبح مزمنة. وهذا إنجاز كبير لأن الجروح المزمنة في البشر تسبب آلاما وكربا كبيرة للمرضى وتؤدي إلى بتر الأطراف إذا لم تحل. وعلاوة على ذلك، فإن هذه الجروح مكلفة للغاية وتستغرق وقتا طويلا لعلاجها، وتؤدي إلى خسارة كبيرة في الدخل الشخصي للمرضى. التقدم في هذا المجال من الدراسة من خلال استخدام نموذج الجرح المزمن لدينا يمكن أن تحسن بشكل كبير الرعاية الصحية للملايين الذين يعانون في ظل هذه الحالة المنهكة. وفي هذا البروتوكول، نوصف بتفصيل كبير الإجراء الذي يسبب الجروح الحادة لتصبح مزمنة، وهو ما لم يحدث من قبل.

ويبين الشكل 5 مثالاً على جرح دون علاج مثبطات تتقدم نحو إغلاق الجرح وجرح مع علاج مثبطات تتقدم نحو المزمنة. وقد تركت خلع الملابس شفافة في مكان على الجرح المزمن بحيث يمكن رؤية biofilm وتراكم السوائل.
يتم بدء الجروح المزمنة في أقل من 6 ساعات ويتم تغيير هامش الجرح بشكل واضح من الإجهاد التأكسدي. الأدلة النسيجية لهذا الهامش الجرح يكشف أن الأنسجة نخرية ولن تشارك في التئام الجروح. يمكن للبكتيريا المكونة للأف...

يتم تطوير الجروح المزمنة من الجروح الحادة على نموذج الماوس السكري عن طريق تحفيز مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي بعد جرح جلدي كامل السماكة. يتم علاج الجرح مع مثبطات للكاتالاز والجلوتاثيون بيروكسيداز، مما أدى إلى ضعف الشفاء وتطوير biofilm من قبل البكتيريا الموجودة في ميكروبيوم الجلد.

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

يمكن لهذا النموذج الماوس تساعد في الإجابة على الأسئلة في المجال الطبي من مزمنة الجرح. الميزة الرئيسية لهذا النموذج هو أن الجروح المزمنة في الفئران تحاكي العديد من جوانب الجروح المزمنة في البشر. للبدء ، ضع الماوس على سطح نظيف والاحتفاظ به في مكانه عن طريق قرص قاعدة ذيله.ثم إعداد مقصات الشعر وتكون على استعداد لسحب بسرعة بعيدا إذا كان الماوس يجعل أي حركات مفاجئة. حلق كامل الظهر من الرقبة إلى الذيل بما في ذلك جميع أنحاء الذيل. تشغيل طفيفة شفرة ضد اتجاه نمو الشعر لقطع الأكثر كفاءة.لا تضغط على المقصات في عمق الجلد لأن هذا يمكن أن كدمة أو قطع. المقبل، وإعداد الجلد لتطبيق محلول إزالة الشعر. تبلّل الجلد بمنشفة ورقية منقوقة بالماء لمنع الحروق الكيميائية.اضغط بخفة مع ما يكفي من الضغط لتبلل قص الشعر إلى أسفل ضد الجلد. ثم في حين أن الجلد الرطب، فرك dollop صغيرة من محلول مزيل في المنطقة حلق لمدة 15 إلى 20 ثانية. بمجرد تطبيقها، دع محلول يتفاعل مع الجلد لمدة 20 إلى 45 ثانية.قبل الشطف قبالة محلول، مسح طفيفة بعيدا بعض محلول في مواقع مختلفة للتحقق من رد فعل. إذا كان الجلد ورديًا وبلا شعر ، فإن رد الفعل يكون كاملًا. ثم قبضة الماوس لغسله.استخدام اليد nondominant مع الإبهام اضغط أسفل قاعدة ذيله ضد النخيل وإغلاق الأصابع الأخرى. ثم مع أنف الفأر صعودا وبعيدا عن الماء، والسماح للمياه تشغيل أكثر من ظهر الحيوان. ثم بسرعة، ولكن بلطف، فرك الجزء الخلفي من الماوس مع اليد الأخرى لغسل غسول.بعد إزالة كل كريم إزالة الشعر، وتجفيف الجلد بمنشفة ورقية. من المهم عدم تطبيق محلول على الأذنين أو الذيل أو أي مكان بالقرب من الوجه. إذا كان هذا ينبغي أن يحدث، على الفور مسح محلول مع منشفة مبللة ثم تشغيل المياه فوق الماوس لمنع الأضرار التي لحقت هذه المناطق.إذا لاحظت أي بقع داكنة بعد استخدام كريم، إعادة تطبيق كريم لتلك المناطق. سوف تنمو بقع داكنة من الجلد الشعر أسرع طوال مدة التجربة. حتى مقطع الشعر القصير كل ثلاثة إلى خمسة أيام عند الضرورة.تصحيح أو اثنين التي ليست على مدى الجرح الموقع هو مقبول، ولكن إذا كان الجزء الخلفي من الماوس لديه بقع أكثر داكنة، لا تستخدم لنموذج الجرح المزمن. بعد إزالة الشعر، منزل الماوس وحده ليوم واحد على الأقل قبل الجرح لأن الجلد سوف تكون حساسة جدا من محلول إزالة الشعر. قبل 30 دقيقة من الجراحة، حقن الماوس مع 120 ميكرولتر من البوبرينورفين intraperitoneally في برنامج تلفزيوني عقيمة.تفترض كافة وحدات التخزين في هذا الإجراء ماوس 60 غرام. قبل 20 دقيقة من الجراحة، حقن الماوس مع 480 ميكرولترات من ATZ intraperitoneally في برنامج تلفزيوني عقيمة. تقسيم وحدة التخزين على جانبي البطن.بعد إدارة ATZ، ضع الماوس في حاوية بلاستيكية صغيرة فوق وسادة تدفئة دافئة حتى تبدأ الجراحة. غطي الحاوية الصغيرة بمنشفة ورقية للمساعدة في احتواء الحرارة. يجب أن تهدئة الماوس كما أنه يدفأ.بعد التأكد من حالة تخدير، المضي قدما في الجرح. لبدء الإجراء الجرح، رش مسحة كيمية مع 70٪ الإيثانول لمسح الجزء الخلفي من الماوس لتنظيف موقع الجرح وسطح الجلد. لا يمسح بشكل مفرط أو سيكون هناك خطر قتل البكتيريا الموجودة على الجلد.يعتمد نجاح نموذج الجرح المزمن على الظروف غير العقيمة. هذه الفئران ليست خالية من الجراثيم ويتم وضعها في فيفاريوم التقليدية. الميكروبيوم البكتيرية التي توجد على الجلد أمر بالغ الأهمية لبدء وتطوير الجروح المزمنة اللاحقة عند العلاج مع مثبطات الانزيمات المضادة للأكسدة.الآن النظر في مكان المكان الجرح. من الناحية المثالية، استخدم الجانب الظهري من الماوس مركزة وبعيدا عن بقع داكنة من الجلد. الآن تنفيذ الجرح إلى إجراء خلع الملابس في 30 إلى 45 ثانية.أولا اضغط بخفة على لكمة خزعة الجلد سبعة ملليمتر على موقع الجرح المطلوب وتحريف لكمة حول عميقة بما يكفي لترك انطباع من لكمة. ثم قم باستئصال الجلد المحدد عن طريق سحب ما يصل إلى مركز لكمة مع ملاقط وقطع على طول الخطوط العريضة مع مقص الجراحية. بمجرد الانتهاء، تغطية الجرح بحزم مع نصف قطعة من صلصة الفيلم شفافة.في غضون 10 دقائق من الجرح، وتطبيق 60 ميكرولتر aliquot من MSA في برنامج تلفزيوني عقيمة وإيداع MSA موضعيا على الجرح. في وقت لاحق، ست ساعات بعد الجراحة، وإدارة آخر يفعل من البوبرينورفين. ويمكن إعطاء جرعات إضافية حسب الحاجة.يحدث بدء الجروح المزمنة في أقل من ست ساعات ويتم تغيير هامش الجرح بشكل واضح من الإجهاد التأ المؤاكس. الجرح المزمن هو الجرح الذي لا يزال مفتوحا، الموسع مقارنة بالجرح الأولي ويحتوي على بيو فيلم. بعد 20 يوما، الجرح هو في كامل المزمنة.بيو فيلم تشكيل البكتيريا التي تهيمن على موقع الجرح وتشمل Pseudomonas aeruginosa، Enterobacter cloacae، ومختلف أنواع المكورات العنقودية وكورينباكتيريوم. وتوجد هذه البكتيريا أيضا في الجروح المزمنة البشرية. بعد مشاهدة هذا الفيديو يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية خلق الجروح المزمنة في الفئران.بمجرد أن تكون قد أنشأت هذه الجروح المزمنة ، يمكنك استخدامها بعد ذلك للتحقيق في العديد من الآليات الجزيئية الخلوية المشاركة في بدء مزمنة الجرح.

protocol-to-create-chronic-wounds-in-diabetic-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

قمنا بتطوير تقنية مينيملي لخلق أرنب جرح الأذن الدماغية نموذج بقسمة الشريان المركزي والأعصاب والحزمة الوعائية العصبية في الجمجمة. نفق تحت الجلد ثم يقطع كل الأنسجة تحت الجلد. هذا الإجراء يتسبب في تعطيل الحد الأدنى من الجلد ويمكن استخدامها بأمان في الحيوانات بداء السكري.

أسلوب مبسط لإنتاج نموذج الجرح الدماغية

نموذج الفئران من التئام الجروح الجلدية التي يمكن استخدامها لتقييم المركبات العلاجية في إعدادات الفسيولوجية والمرضية في جسم المريض.

نموذج الفئران من التئام الجروح

هي عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (الخزفية) وتحصد من الدهون الفئران العادية بسهولة. أوراق الرابطة يمكن إنشاؤها باستخدام هندسة الخلايا--ورقة ويمكن زرعها في زوكر الجرذان الدهنية السكري العارضة كامل-سمك الجلد العيوب مع العظام مكشوفة ومغطاة ثم بيلايير جلد الاصطناعي.

إنشاء وزرع للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) ورقة في نموذج التئام السكري

هنا يصف لنا نموذجا مورين السكري رواية استخدام الفئران أصلع للرصد في الوقت الحقيقي، وغير الغازية، من عدوى الجرح بيوفيلم من طرحه الزائفة الزّنجاريّة. هذا الأسلوب يمكن تكييفها لتقييم العدوى الأخرى أنواع البكتيريا والكائنات الدقيقة المحورة وراثيا، بما في ذلك الأغشية الحيوية المتعددة الأنواع، واختبار فعالية استراتيجيات أنتيبيوفيلم.

تأتي إلى "جانب الضوء": "في فيفو" الرصد الزائفة الزّنجاريّة بيوفيلم الالتهابات في "الجروح المزمنة" في "نموذج مورين أصلع السكري"

يصف لنا غير الغازية في فيفو التصوير البروتوكول تكون مبسطة وفعالة من حيث التكلفة، الاستفادة من L-012، تشيميلومينيسسينت لومينول النظير، تصور والتحديد الكمي للأنواع الأكسجين التفاعلية (روس) التي تم إنشاؤها في نموذج ماوس استئصالية الجرح.

في فيفو تصوير للأنواع الأكسجين التفاعلية في الفاري الجرح النموذجي

وقد استوفت سقالة DOX-CL المعدة الشروط المسبقة لارتداء ملابس DW مثالية في القوة الميكانيكية والمسامية وامتصاص المياه ومعدل التدهور والإفراج المستمر والتوافق البيولوجي المضاد للبكتيريا والخصائص المضادة للالتهابات ، والتي تعتبر ضرورية لاستعادة الأنسجة التالفة في DWs.

دوكسيسيكلين محملة الكولاجين-شيتوسان سقالة مركبة للشفاء المتسارع من الجروح السكري

يعد نموذج الجرح السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين في ذكور الفئران SD حاليا النموذج الأكثر استخداما لدراسة التئام الجروح في داء السكري من النوع الأول. يصف هذا البروتوكول الطرق المستخدمة لبناء هذا النموذج. كما يعرض ويعالج التحديات المحتملة ويفحص التقدم والخصائص الوعائية لجروح السكري.

بروتوكول لبناء نموذج جرح الفئران لمرض السكري من النوع 1

تمثل الجروح تحديا صحيا عالميا. طورت هذه الدراسة كشك صور موحد يستخدم المخطط الرقمي لتقليل تقلب قياس الجرح. كشفت مراقبة الجروح في الفئران على مدى 14 يوما عن زيادة أولية في مساحة الجرح ومحيطه ، تليها الإغلاق التدريجي. قد تساعد هذه المنهجية في تقييم حركية إغلاق الجرح في النماذج قبل السريرية.

المخطط الرقمي لتقييم حركية إغلاق الجرح في نموذج الماوس

وتصف هذه الورقة بروتوكول لارتفاع الحرارة في الجسم كله الفئران التي يمكن أن تحفز مثل الحمى ظروف تصل إلى 12-24 ساعة.

بروتوكول لونغ ارتفاع الحرارة المدة الجسم الجامع في الفئران

وصفنا كبدي الجدد جزيرة تشكيل في STZ (بالستربتوزوتوسين)-يسببها الفئران من السكري عن طريق نقل الجينات من Neurogenin3 (Ngn3) وBetacellulin (BTC) باستخدام المساعد التي تعتمد على ناقلات الغدانية (HDAd) وعكس ارتفاع السكر في الدم. لدينا أسلوب يأخذ مزايا المساعد التي تعتمد على ناقلات الغدانية مع كفاءة عالية في الجسم الحي تنبيغ والتعبير الجيني طويلة الأمد.

الجدد في جزيرة تشكيل الكبد من الفئران من السكري من مساعد التي تعتمد على الغدانية نقل الجينات بوساطة ناقلات

اكتشف بروتوكولًا لإنشاء جروح مزمنة في فئران db/db السكرية باستخدام الإجهاد التأكسدي وتثبيط الإنزيمات المضادة للأكسدة. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من دراسة آليات تكوّن الجروح المزمنة واختقار العلاجات الجديدة.

بروتوكول لخلق الجروح المزمنة في الفئران السكري

استكشف المزيد من الفيديوهات