مايو 27, 2018
يمكن أن يستحث التناوب ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس) ممارسة في melanogaster المورفولوجية من خلال التناوب أثناء قياس مقدار نشاط يقوم به الحيوانات في وقت واحد. هنا، يقدم تفاصيل عن كيفية قياس مستويات النشاط الحيوانات تعاني من العلاجات ممارسة التناوب REQS. باستخدام بروتوكول نقطة بنقطة
يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا التمرين ، مثل كيف تختلف استجابة التمرين للحيوانات من مختلف الأعمار وما هي المسارات الجينية التي تتحكم في استجابة التمرين. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح للباحثين ، لأول مرة ، بقياس النشاط في الذباب الذي يقوم بالتمرين الناجم عن الدوران في الوقت الفعلي. سيوضح الإجراء لويس باتريك واتانابي ، طالب دراسات عليا من مختبري.
قبل التجربة المخطط لها ، قم بإعداد تهجين من الذباب من الذكور والإناث بحيث يمكن جمع كل ذرية خاضعة للرقابة للتجربة. للبدء ، قم بتحميل ثمانية أنابيب عينة زجاجية مع 10 ذباب اختبار مخدر لكل قارورة. تتكون المجموعة التجريبية القياسية من 10 قوارير من 10 ذباب من كل جنس.
لتحميل القوارير في REQS ، أدخل القارورة في فتحة شاشة النشاط من الأمام. ثم ضع الغطاء الثاني على القارورة وقم بتوسيط القارورة ، وحرك الحلقة O حسب الحاجة. ضع REQS في حاضنة للظروف البيئية الخاضعة للرقابة.
اسمح للحيوانات بالتعافي من التخدير لمدة ساعة في هذه الحاضنة قبل المتابعة. بالنسبة للمقايسات التي تزيد عن ثماني ساعات ، يمكن استخدام قوارير تحتوي على طعام متصل بإحكام شديد بأحد طرفي الأنبوب. بعد فترة التأقلم ، قم بتشغيل الجهاز لبدء التناورات.
اضبط السرعة على السرعة المطلوبة ، مثل أربعة دورات في الدقيقة. يجب ألا يتلامس أي أنبوب مع السطح السفلي إذا تم وضعه بشكل صحيح. بالنسبة للفحص النموذجي ، ما عليك سوى بدء البرنامج وتسجيل النشاط للوقت المطلوب ، مثل ساعتين عند استخدام قوارير بدون طعام.
عند البدء ، يقوم البرنامج تلقائيا بحفظ البيانات في ملف نصي. في البرنامج ، يشير ضوء الاتصال الأخضر إلى أن البرنامج يقوم بجمع البيانات. يمكن ضبط تردد التسجيل ضمن علامة التبويب التفضيلات.
عادة ، يتم استخدام فواصل زمنية مدتها خمس دقائق. أثناء الفحص ، لا تفتح الحاضنة ، لأن حساسة جدا لأي اضطراب ومن المحتمل أن تستجيب بنشاط متزايد. في نهاية الفحص ، قم بإنهاء جمع البيانات عن طريق إغلاق البرنامج ، ثم قم بإيقاف تشغيل REQS وفحص الأنابيب.
يحيط علما بأي وفيات حدثت أثناء نظام التمرين. بشكل عام ، أربعة دورات في الدقيقة لمدة ساعتين ليست قاتلة للسلالات الصحية. أخيرا ، قم بتفريغ القوارير عن طريق تخدير الذباب بثاني أكسيد الكربون.
يمكن تحليل ملف البيانات بأي حزمة إحصائية. إذا كانت هناك نقاط زمنية يتم فيها تسجيل درجة نشاط صفرية لجميع المواضع ، فهناك انقطاع في الاتصال خلال هذه النقاط الزمنية. في حالة حدوث انقطاعات، قم بتثبيت التوصيلات المؤدية إلى مقبس الهاتف الدوار باستخدام شريط لاصق.
تم فحص أربعة خطوط ذبابة الفاكهة متميزة وراثيا باستخدام REQS باستخدام البروتوكول الموصوف. تتكون كل مجموعة من 100 ذبابة مقسمة إلى 10 قوارير. تم حساب متوسط النشاط في صناديق خمس دقائق على مدار ساعتين ، تم إجراؤها عند أربعة دورات في الدقيقة.
كان متوسط نشاط التمرين بين جميع الأنماط الجينية الأربعة مختلفا بشكل كبير ، ومع ذلك ، لم يتم العثور على فرق كبير بين الذباب البكر والإناث البكر ، لذلك يتم تقديم بياناتهم معا في هذا التحليل. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الوراثة للتمرين لاستكشاف استجابات التمرين المختلفة في ذبابة الفاكهة السوداء ودرسوا تأثير التمرين على سلوك وعلم وظائف الأعضاء. باتباع هذا الإجراء ، يمكن استخدام طرق أخرى ، مثل تحليل تكوين الجسم واختبارات الإجهاد واختبارات اللياقة البدنية للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بتأثيرات علاجات التمرين على.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
يُمكِّن نظام قياس التمارين الدورية (REQS) من إدخال التمارين في ذبابة الفاكهة من خلال الدوران مع قياس مستويات نشاطها. يوفر هذا البروتوكول نهجًا مفصلًا لتقييم نشاط الذباب الذي يخضع لمعالجات التمرين الدورانية.
Quantifying exercise-induced activity in Drosophila melanogaster using the Rotating Exercise Quantification System (REQS) enables precise measurement of behavioral phenotypes relevant to genetic and physiological studies. This capability supports early-stage target validation and mechanistic de-risking in discovery pipelines focused on exercise biology, metabolic regulation, and behavioral genetics. Standardized, quantitative outputs from REQS facilitate cross-strain and cross-condition comparisons, enhancing predictive confidence for translational research.
The REQS method integrates into the early discovery continuum, bridging genetic manipulation, behavioral phenotyping, and preclinical model development in exercise biology and related fields.