تريدوهيل: "بروتوكول التدريب" الفاصل الزمني "ممارسة فعل بلطف" في melanogaster المورفولوجية

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث التمثيل الغذائي مثل تحديد ما إذا كانت تدخلات نمط حياة معينة مثل التمرين يمكن أن تفيد أفرادا معينين. غالبا ما يكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة من أجل تحديد اليرقات في مرحلة الطور الأولى. المفتاح هو جمع اليرقات بنفس حجم البيض تقريبا.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن استخدامها لتقييم تأثير التمرين عبر العديد من الظروف التجريبية والأنماط الجينية. أولا ، قم بتجميع غرف التمديد لكل مجموعة تجريبية. ضع القليل من معجون الخميرة على طبق أجار عصير التفاح وثب الطبق في زجاجة بلاستيكية سعة ستة أونصات.

تصنع أطباق أجار عصير التفاح عن طريق صنع محلول أجار بنسبة 3٪ في عصير التفاح الذي يتم شراؤه من المتجر. ثم ملء أطباق 35 × 10 ملم 3/4 من الطريق إلى أعلى الحائط. يصنع معجون الخميرة عن طريق خلط الخميرة الجافة النشطة التي يتم شراؤها من المتجر مع الماء بنسبة حوالي ملليلترين من الماء المقطر لكل جرام من الخميرة.

احتفظ بالمعجون مغطى بشكل غير محكم للسماح بإزالة الغازات وقم بتطبيق حوالي ثلاثة ملليمترات على كل طبق. يجب تحضير الزجاجة المصنوعة من مادة البولي بروبلين بفتحات صغيرة للتهوية. بعد تحضير مكونات الغرفة ، تابع التحميل في البالغين.

بمجرد أن يكون البالغون من النمط الجيني المطلوب في الزجاجة ، قم بتغطية الزجاجة باللوحة وقم بتأمين التجميع بالأربطة المطاطية. من المحتمل أن يتطلب ضمان أعداد كافية من الذباب البالغ لغرف التمديد البدء في بناء أعداد السكان قبل عدة أجيال من التجربة المخطط لها. الآن ، قم بتغيير أطباق أجار عصير التفاح مرتين في اليوم ، مرة في الصباح ومرة في المساء.

ثم اترك البيض يتطور على الصفائح المجمعة لمدة 12 إلى 24 ساعة في يرقات الطور الأول. لجمع هذه اليرقات ، استخدم فرشاة رسم رفيعة أو معول مصنوع من إبرة رفيعة مرنة ومقبض. لكل مجموعة تجريبية ، انقل 50 يرقة من الطور الأول إلى قارورة طعام طازجة واتركها تتطور إلى مرحلة البلوغ.

للتأكد من قدرتك على جمع ما يكفي من اليرقات لكل من النسخ المتماثلة الخاصة بك ، تأكد من وجود باحثين متاحين يتمتعون بالكفاءة في جمع اليرقات من أجل الحصول على الأرقام التي تحتاجها. عند التشرنق ، اجمع الشرانق عن طريق ترطيبها أولا باستخدام فرشاة رسم صغيرة رطبة. ثم اغرف الشرانق برفق من جوانب القوارير باستخدام ملعقة.

قم بتحميل الشرانق في قوارير فارغة. ثم ، عند الاستغلاق ، انقل البالغين إلى قوارير الطعام القياسية. بعد يوم إلى خمسة أيام من الإغلاق ، افصل الذباب بناء على الجنس وقسم كل جنس إلى مجموعتين ، تجريبية ومضبوطة.

حافظ على البالغين عند 50 ذبابة لكل قارورة. امنح الذباب قوارير طازجة مع الخميرة الحية كل يومين. في حين أنه من الممكن الحفاظ على البالغين دون مكملات الخميرة الحية ، فقد وجدنا أن أداء البالغين أفضل مع المكمل.

مكملات الخميرة الحية هي متغير يمكن للباحثين تعديله ليناسب أهدافهم البحثية المحددة. يستخدم جهاز التمرين نظاما بسيطا للحزام والبكرة مدعوما بمحرك متغير السرعة. قبل استخدام جهاز التمرين ، قم بإزالة أي قوارير متصلة به وقم بمعايرة سرعة محركه باستخدام مصدر الطاقة بحيث تكون فترة الدوران الكاملة 15 ثانية.

لتوقيت سرعة الدوران ، قم بتوصيل فرشاة رسم صغيرة بغطاء المحرك وضع الفرشاة بحيث تلامس أحد الأقواس الدوارة. ثم حدد وقت عدد الدورات التي تم إجراؤها عن طريق حساب جهات اتصال الفرشاة والقوس في الدقيقة. باستخدام آلة معايرة ، تابع اليوم الأول من التمرين ، عادة يوم الاثنين.

ادفع سدادات القارورة في القوارير. اترك الذباب سنتيمترا واحدا من المساحة في قوارير التحكم وستة سنتيمترات من المساحة في قوارير التمرين. الآن ضع القوارير في المشابك مع 10 دقائق للسماح للذباب بالتأقلم.

يمكن لجهاز التمرين استيعاب ما يصل إلى 48 قارورة. يجب أن تظل درجة حرارة الغرفة ثابتة طوال الإجراء الذي يستغرق عدة أيام أو يمكن أن يتناسب جهاز التمرين مع الحاضنة ، إذا رغبت في ذلك. يتكون التصميم التجريبي من خمسة أيام متتالية من التمرين في الأسبوع.

يحتوي كل يوم تمرين على فترات متناوبة من التمرين والراحة. في كل يوم ، تتم إضافة خمس دقائق إلى إحدى فترات التمرين بحيث تزيد فترات التمرين الأربع بمقدار خمس دقائق على مدار خمسة أيام في أسبوع العمل. بمجرد أن يتأقلم الذباب ، ابدأ فترة التمرين الأولى.

قم بتشغيل الجهاز لمدة 15 دقيقة. خلال فترة الراحة لمدة خمس دقائق ، اترك القوارير على المشابك. بعد الانتهاء من الدورة الرابعة من التمرين ، أعد سدادات قارورة الطعام إلى مواقعها الطبيعية وأعد الذباب إلى حاضنتها.

لتحديد ما إذا كان التمرين على TreadWheel يؤثر على سمات التمثيل الغذائي ، تم قياس تخزين الدهون الثلاثية في Oregon R والذباب الأبيض الأصفر وتطبيعه مقابل تركيز بروتين الذباب. كشف التحليل الإحصائي عن النمط الجيني الكبير عن طريق تفاعل التمرين الذي يؤثر على تخزين الدهون الثلاثية. كان هناك أيضا تأثير ثنائي الشكل جنسيا بشكل كبير حيث قام الذكور بتخزين الدهون الثلاثية أكثر من الإناث.

لدى إناث الذباب الممارس مستويات أقل بكثير من الدهون الثلاثية مقارنة بنظيراتها غير الممارسة. لم يلاحظ هذا عند الذكور. بعد ذلك ، تم تربية الذباب على أنظمة غذائية متغيرة ، ووضعه في نظام التمرين ، ثم اختباره على مقايسة جيوتاكس سلبية تشبه RING.

ارتفعت الإناث بشكل ملحوظ عند تربيتهن على نظام غذائي غني بالدهون مقارنة بأي من العلاجات الأخرى. بالنسبة للذكور ، لم تتحسن التمارين الرياضية إلا عندما نشأوا على نظام غذائي عادي. لم يكن للنظام الغذائي الغني بالدهون أي تأثير.

ومن المثير للاهتمام ، أنه كان هناك انخفاض في أداء التسلق بعد التمرين للإناث من خط DGRP 153 عند تربيتهن على نظام غذائي عادي. وبالتالي ، قد لا تكون التمرين تدخلا إيجابيا بشكل موحد لجميع الأنماط الجينية. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل فحوصات الجلوكوز الهيموليفي أو تحليلات العمر لتقييم تأثير التمرين على مرض السكري من النوع الثاني أو طول العمر.

تسمح هذه التقنية للباحثين في مجالات علم الوراثة والتمثيل الغذائي باستكشاف دور التمرين في الحفاظ على صحة التمثيل الغذائي في الكائن الحي النموذجي ، ذبابة الفاكهة.