بروتوكول السريرية لإنتاج كسر الأوعية الدموية Stromal المستمدة من الأنسجة الدهنية لتجديد الغضاريف المحتملة

هشاشة العظام هي واحدة من الاضطرابات المنهكة الأكثر شيوعا بين السكان المسنين. في الوقت الحاضر ، لا يوجد علاج محدد للأسباب الكامنة وراء هشاشة العظام. يصف هذا البروتوكول السريري إجراءً مبتكرًا لعلاج واعد، وبسيط، وبديلًا من التهاب المفاصل في الركبة البشرية عن طريق تجديد الغضروف مثل الأنسجة.

هشاشة العظام هي واحدة من الاضطرابات المنهكة الأكثر شيوعا بين السكان المسنين. في الوقت الحاضر، لا يوجد علاج محدد للأسباب التي تؤكد من هشاشة العظام. هذا البروتوكول السريري هو إجراء مبتكر لعلاج واعد، والحد الأدنى من الغازية، والعلاج البديل من هشاشة العظام في الركبة البشرية عن طريق تجديد الأنسجة الشبيهة بالغضاريف.

جلب المريض إلى غرفة العمليات مع غطاء محرك السيارة من الفئة A الخطر الحيوي، ووضع له أو لها في موقف supine. تنظيف منطقة البطن للمريض مع 5٪ بيتادين بوفيدين اليود والثناد المريض باستخدام تقنية معقمة، وتعريض منطقة نظيفة من البطن لشفط الدهون. تقريبا خمسة سنتيمترات [إيندبلو-ثريبي] من ال [أومبيليكوس], يُغزن اثنان موقعات, واحدة على اليسار وأخرى على الجانب يمني من ال [أومبيليكوس] الشق أن يكون جعلت.

باستخدام مليلتر من 2٪ ليدوكاين دون ادرينالين مع إبرة 1.5 بوصة قياس 25 في حقنة خمسة ملليلتر عن طريق حقن كل موقع على مستوى البشرة. تخدير موقع شق المراد إجراؤه باستخدام خمسة ملليلتر من محلول الطنين وحقنة 10 ملليلتر وإبرة قياس 25 1.5 بوصة. جعل شقين من 0.5 سم ما يقرب من خمسة سنتيمترات تحت umbilicus بشكل مشقى عن طريق معسر الجلد لرفع عمق مستوى تحت الجلد.

باستخدام شفرة رقم 11 ، تساعد الجلد المرفوع على اختراقه إلى المستوى تحت الجلد ولكن ليس لاختراق جدار البطن. باستخدام 20 سم 60 قياس القناء، تخدير مستوى تحت الجلد من منطقة البطن السفلي كله الذي هو أن يكون liposuctioned مع 700 إلى 800 ملليلتر من محلول tumescent. بعد الانتهاء من التسلل من البطن كله السفلي مع محلول tumescent، وإعداد جهاز شفط الدهون عن طريق ربط 3.0 ملليمتر cannula متصلة 60 ملليلتر أو 30 ملليلتر حقنة لشفط الدهون اليدوي أو مصممة خصيصا 3.0 ملليمتر القنب متصلة طقم الطرد المركزي.

حقنة نظام مغلق وضعت من قبل أنفسنا والتي وافقت عليها إدارة الأغذية والعقاقير CDRH لغرض الحفاظ على العقم متصلة آلة فراغ للفراغ ساعد شفط الدهون. تنفيذ شفط الدهون للحصول على 100 إلى 110 غرام من الأنسجة الدهنية باستثناء محلول tumescent. عند إجراء شفط الدهون، سيتم الحصول على الأنسجة الدهنية جنبا إلى جنب مع محلول tumescent ولكن ينبغي فصل وإزالتها.

لفصل حل الطنين أولاً عن طريق الجاذبية، يمكن نقل الأنسجة الدهنية في مجموعة أجهزة الطرد المركزي إلى حقنة 60 ملليلتر ووضع الحقنة أسفل. في المثال، الجزء الافتتاحي من الحقنة هو في الجزء السفلي. من خلال الانتظار من خمس إلى ست دقائق ، سيتم فصل الأنسجة الدهنية والمحلول الزندي.

إزالة السائل في الجزء السفلي من الحقنة عن طريق الضغط على الجزء العلوي من المكبس حقنة. تنفيذ الخطوات المذكورة أعلاه تسعة إلى 11 حتى المجموع من 100 غرام إلى 110 غرام من الدهنية الدهنية وقد تراكمت في الركبة. بعد فصل حل tumescent عن طريق الجاذبية وتراكم 50 غراما إلى 55 غراما من الدهون الpirate لكل 60 ملليلتر الطرد المركزي مجموعة طقم معقم مغلقة، ووضع اثنين من مجموعات الطرد المركزي في دلو حاوية الطرد المركزي وتدور في 1600 G لمدة خمس دقائق، وتكثيف الدهون الpirate وفصل السوائل من الأنسجة الدهنية.

هذه العملية تكثف مزيد من التعرق الدهون، ويمكن أن تنتج زيت دهنية في حالات معينة. الحرص على عدم اهتزاز، وإزالة غطاء السلامة والمكونات في الجزء السفلي من عدة أجهزة الطرد المركزي. إزالة السائل السفلي عن طريق دفع ببطء إلى أسفل على رأس المكبس من عدة أجهزة الطرد المركزي.

على حقنة منفصلة 60 ملليلتر، تذوب 10 ملليغرام من الكولاجيناز، خمسة ملليغرام collagenase محددة لالأنسجة الضامة، وخمسة ملليغرام من الكولاجين محددة للأنسجة الدهنية مع 50 ملليلتر من المالحة العادية. مزيج ما يقرب من 25 إلى 30 ملليلتر من التعرق الدهون المكثف مع الكولاجيناز الذائب، وخمسة ملليغرام من الكولاجين محددة لالأنسجة الضامة، وخمسة ملليغرام من الكولاجين محددة للأنسجة الدهنية بنسبة واحد إلى واحد، وحجم لحجم، عن طريق ربط حقنة 60 ملليلتر إلى عدة أجهزة الطرد المركزي باستخدام موصل متخصص. مزيج دقيق لتكثف التعرق والإعدادية وكولاجيناز عن طريق دفع المحتوى بين حقنة 60 ملليلتر ومجموعة أجهزة الطرد المركزي باستخدام قضيب أو دافع.

نقل خليط من الدهنية وكولاجيناز مرة أخرى إلى حقنة 60 ملليلتر. ربط كل حقنة 60 ملليلتر تحتوي على الخليط مع التجانس الأنسجة التي تحتوي على ريش. توصيل حقنة فارغة 60 ملليلتر إلى الطرف الآخر من المهيجين.

دفع الخليط إلى حقنة 60 ملليلتر أخرى من خلال التجانس لمدة أربع إلى ست مرات، مما أدى إلى قطع و mincing من التعرق الدهون. نقل التعرق الدهون المتجانسة والخليط الكولاجيني مرة أخرى إلى 60 ملليلتر الطرد المركزي عدة من خلال موصل متخصص. ضع أطقم أجهزة الطرد المركزي في حاوية توضع في حاضنة تم تسخينها مسبقاً عند 37 درجة مئوية.

احتضان مجموعات الطرد المركزي اثنين مع خليط متجانسة في 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة أثناء الدوران في 45 دورة في الدقيقة. بعد 40 دقيقة من الحضانة، وإزالة الحاوية من الحاضنة بطريقة عقيمة. ثم إزالة مجموعات أجهزة الطرد المركزي ووضعها في جهاز الطرد المركزي.

أجهزة الطرد المركزي الخلائط في 800 G لمدة خمس دقائق لفصل الدهنية الأنسجة المشتقة من SVF. بعد الطرد المركزي، يتم إزالة المكبر، الذي يتضمن الكولاجين والأنسجة الدهنية المهضمة من كل مجموعة أجهزة الطرد المركزي عن طريق إزالة غطاء الحقنة على رأس المكبس ووضع حقنة 30 ملليلتر على فتحة المكبس من خلال اتصال قفل الحقنة. اضغط ببطء على الجزء برميل من حقنة 30 ملليلتر لsupernatant لملء في حقنة 30 ملليلتر.

اضغط أسفل برميل حقنة 30 ملليلتر على طول الطريق إلى آخر ثلاثة إلى أربعة ملليلترات من الجزء السفلي من عدة أجهزة الطرد المركزي، وترك فقط آخر ثلاثة إلى أربعة ملليلترات من SVF المشتقة من الأنسجة الدهنية. المُندفع هو الإهمال إزالة حقنة 30 ملليلتر من الجزء العلوي من المكبس وملء حقنة مع 5٪ دكستروز حل الرنين، والمعروف أيضا باسم D5LR.

عن طريق إرفاق حقنة 30 ملليلتر مليئة D5LR على الجزء العلوي من فتحة المكبس، ملء مجموعات الطرد المركزي التي تحتوي على ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من SVF المشتقة من الأنسجة الدهنية مع D5LR تصل إلى 55 ملليلتر. ثم إزالة حقنة 30 ملليلتر، سقف فتح المكبس، والطرد المركزي مجموعات الطرد المركزي مرة أخرى في 300 G لمدة أربع دقائق تقريبا. كرر الخطوات رقم 17 إلى رقم 21 لما مجموعه أربع غسيلات.

بعد جهاز الطرد المركزي الرابع، من أجل الحصول على SVF النهائي للحقن، وإزالة سقف السلامة والمكونات في فتح أسفل مجموعة أجهزة الطرد المركزي دون اهتزاز أو تحويل مجموعة أجهزة الطرد المركزي. إرفاق حقنة 20 ملليلتر لفتح قاع مجموعة أجهزة الطرد المركزي باستخدام موصل مصمم خصيصًا. سحب المكبس من حقنة 20 ملليلتر عدة مرات ذهابا وإيابا لزعزعة الخلايا التي استقرت على الجزء السفلي من عدة أجهزة الطرد المركزي.

إزالة الحجم الإجمالي المطلوب من SVF التي تحتوي على كل من ASTs و ECM جنبا إلى جنب مع الخلايا والأنسجة الأخرى. عادة حوالي ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من كل طقم الطرد المركزي لحقن مفصل الركبة. فعلنا 30 ملليلتر من الدم الذاتي جنبا إلى جنب مع 2.5 ملليلتر من محلول كسيترويز رات تخثر.

ثم تم نقل الدم المسحوب إلى أطقم براميل الطرد المركزي سعة 60 ملليلتر. ثم تم الطرد في 730 الجاذبية لمدة خمس دقائق. وتمت إزالة المُتسرّع ووضع في مجموعة جديدة من أجهزة الطرد المركزي سعة 60 ملليلتر.

تم طرد المُتفوّض في 1350 جاذبية لمدة أربع دقائق، وحصل على 4.4 ملليلتر من PRP. تنظيف الركبة للمريض مع 5٪ بيتادين والستائر بطريقة عقيمة. Palpate الأمامي للركبة لمساحة مشتركة بين عظام التيبالي والفيمور.

تخدير موقع الحقن بشكل سطحي مع الليدوكائين المخفف، ملليلتر واحد من 1٪ ليدوكاين المخفف مع أربعة ملليلتر من المالحة العادية، من الجلد إلى خارج كبسولة مشتركة. ثم تخدير داخل كبسولة مشتركة مع ropivacain المخفف، واحد ملليلتر 0.75٪ ropivacain المخفف مع ثلاثة ملليلتر من المالحة العادية. مزيج مليلتر اثنين من HA إلى 6-8 ملليلتر من SVF الواردة في حقنة 20 ملليلتر من خلال حقنة لموصل الحقنة.

باستخدام حقنة لموصل الحقنة، إضافة 0.4 ملليلتر من كلوريد الكالسيوم إلى ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من PRP الذاتية التي تم إعدادها بالفعل ويجري جاهزة في حقنة خمسة ملليلتر. الجمع بين 3.5 إلى 4.5 ملليلتر PRP كلوريد الكالسيوم في حقنة خمسة ملليلتر مع 8-10 ملليلتر من خليط HA-SVF في حقنة 20 ملليلتر من خلال حقنة لموصل الحقنة. حقن على الفور الخليط، حوالي 12 إلى 15 ملليلتر، ببطء في المفصل الريبالي الفخذي الأمامي للركبة، وذلك باستخدام 38 ملليمتر 18 مقياس إبرة مع أو بدون التوجيه الموجات فوق الصوتية.

بعد الحقن، ضمادة موقع الحقن مع الضغط عن طريق طي شاش القطن 4x4 أربع مرات ووضع الأشرطة على الشاش 4x4 مطوية. تعليمات المريض أن يبقى لا يزال لمدة 60 دقيقة للسماح لمرفق الخلية. تعليمات المريض للحد من الأنشطة لمدة لا أدنى من أسبوع واحد بعد الخروج من العيادة.

العودة إلى العيادة للحصول على ثلاث حقن إضافية من PRP تفعيلها من كلوريد الكالسيوم على مدى ثلاثة أسابيع. تلقى المريض مع المرحلة الثالثة OA العلاج كما هو موضح في قسم البروتوكول. بعد الأسبوع الثاني من حقن خليط ASV-ECM ، تحسن ألم المريض وROM.

بحلول الأسبوع 16th, الألم المريض وROM تحسنت بشكل ملحوظ أكثر من 70٪ ما بعد العلاج MRI, التي اتخذت بعد الأسبوع 16, أظهرت زيادة سماكة الأنسجة الشبيهة بالغضاريف على الجانب المتوسط من الركبة. تلقى مريض آخر مع المرحلة الثالثة OA العلاج كما هو موضح في قسم البروتوكول. بعد الأسبوع الثاني من حقن خليط ASV-ECM ، تحسن ألم المريض وROM.

وبحلول الأسبوع الثامن عشر، تحسن الألم والذاكرة ROM بشكل ملحوظ إلى 80٪ التصوير بالرنين المغناطيسي المتكرر الذي تم التقاطه بعد الأسبوع الثامن عشر أظهر زيادة في ارتفاع الأنسجة الشبيهة بالغضاريف على الجانب الأمامي من الركبة. وتلقى المريض الثالث الذي أصيب بالمرحلة الثالثة من العلاج كما هو موضح في قسم البروتوكول. بعد الأسبوع الثاني من حقن خليط ASV-ECM، تحسن ألم المريض وROM بنسبة 50٪ تقريبًا في الأسبوع الثاني والعشرين، تحسن الألم واللّص ROM بشكل ملحوظ أكثر من 80٪ التصوير بالرنين المغناطيسي المتكرر الذي تم التقاطه بعد الأسبوع الثاني والعشرين أظهر زيادة في ارتفاع الأنسجة الشبيهة بالغضاريف على الجانب الوسيط من الركبة.

لا يتوفر حاليا أي علاج علاجي لعلاج الزراعة العضوية. ومع ذلك، حقن عن طريق الجلد من العلاج بالخلايا الجذعية مع ASCs وECM متجانسة جنبا إلى جنب مع HA وPRP مماثلة تفعيلها مع كلوريد الكالسيوم قد توفر بديلا للعلاج الحالي للعلاج من علاج الزراعة العضوية في الركبة.