Name: توجيه نسب إعادة برمجة الماوس الكبار تنتجها الخلايا الليفية لموروث محمر (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: تعلم إعادة برمجة الخلايا الليفية للفئران إلى سلفات محمرة مُحفزة باستخدام عوامل النسخ. تُتيح هذه الطريقة دراسة تنظيم التعبير الجيني وتطور الخلايا المحمرة بكفاءة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونشكر وانغ إيفلين وهايد غريغوري (معهد وايتهيد، كامبريدج، ماجستير) للاستنساخ وهارفي لوديش (معهد وايتهيد) لتوفير العديد من البلازميدات المستخدمة لإنشاء مكتبة للفيروسات الرجعية. ونحن نشكر مجاهد سيفا وصوفي سينجبرانت (قسم الطب الجزيئي والعلاج الجيني، وجامعة لوند) وكارلسون غوران سونيجي شامية (قسم أمراض الدم الجزيئية، جامعة لوند) لأدوارها في وصف لإنتاج iEP. ونود أيضا تقر وأن تشكر بوليسيو جوليان (مركز الطب التجديدي، ومجمع البحوث الطبية الحيوية برشلونة)، فيوليتا رايون-استرادا (روكفلر جامعة نيويورك)، وكارل والكليي (معهد "البحوث الطبية في" سانت فنسنت و قسم للطب، مستشفى سانت فنسنت، جامعة ملبورن)، أنخل الراية (المؤسسة الكتلانية للبحوث والدراسات المتقدمة، برشلونة)، وفيجاي غ. سانكاران (معهد واسع من معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا وجامعة هارفارد، كمبردج ) لمساهماتها السابقة في هذا العمل. هذا العمل كان يدعمها راغنار سودربيرغ المؤسسة (J.F.)؛ البحوث السويدية مجلس (J.F.)؛ هيروكي ستيفتيلسين انجكفيست Byggmästare (إلى J.F.)؛ المؤسسة السويدية للبحوث الاستراتيجية (ل J.F.)؛ المؤسسة أك ويبيرج (J.F.)؛ ماري كوري تكامل منحة (J.F.).

1-إنشاء وصيانة ذيل الماوس الأساسي تلميح الثقافات تنتجها الخلايا الليفية
<ol><li>إعداد أطباق الجيلاتين المغلفة (يوصي طبق 10 سم للذيل واحد) التي تغطي السطح مع الجيلاتين 0.1% وحضانة الأطباق لمدة 20 دقيقة تقريبا في 37 درجة مئوية. نضح الحل الجيلاتين من الطبق والسماح لها الجاف ح 2 على الأقل.</li>
	<li>Euthanize الفئران بخلع عنق الرحم. قم بإزالة الذيل مع مقص، قص عند قاعدة الذيل. وضع الذيل في الفوسفات مخزنة المالحة دولبيكو (دببس) بنسبة 2% مصل بقرى الجنين (FBS) حتى جاهزة للاستخدام. ملاحظة: للحصول على أفضل النتائج، ذيول ينبغي أن تؤخذ من الفئران حوالي 6 إلى 8 أسابيع من العمر. يمكن أن تؤخذ ذيول من الفئران أقدم من 8 أسابيع عمر، ومع ذلك، كسن الفئران، والقدرة على الانتشار الخلايا الليفية وكفاءة إعادة برمجة انخفاض11.</li>
	<li>تنفيذ كافة الخطوات اللاحقة من هذا البروتوكول في غطاء زراعة الأنسجة تحت ظروف معقمة. تعد حلاً التربسين مخفف 0.02% التربسين-يدتا في دببس وإضافة 5 مل في طبق غير مصقول 10 سم.</li>
	<li>أغسل الذيل، أولاً في الإيثانول 70%، ثم في دببس. في طبق، مكان الذيل مسطح واستخدام الملقط لأنه عقد في المكان. إجراء شق في الذيل على طول محورها الطولي من القاعدة إلى الحافة.</li>
	<li>فهم الذيل مع زوج واحد من الملقط وأنه عقد عمودياً. استخدام زوج ثاني من الملقط، قبضة الجلد بجوار الشق في القاعدة الذيل وقشر مرة أخرى. القيام بذلك في كلا الجانبين من الشق حتى يمكن خلع الجلد عن طريق سحب أسفل تجاه طرف الذيل.</li>
	<li>اضغط الذيل مقشرة مع الملقط على الطبق الذي يحتوي على الحل التربسين وقطع الذيل إلى حوالي 1 سم قطع طويلة. مع قطع ذيل في حل التربسين، استخدام مقص لتفتيت القطع إلى أجزاء أصغر. احتضان قطعة الذيل في حل التربسين في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. ملاحظة: يفضل أصغر القطع بغية توفير كل قطعة مساحة سطحية عالية لنسبة الحجم.</li>
	<li>آرو التربسين استخدام وحدات التخزين 2 متوسطة التوسع (FEX) تنتجها الخلايا الليفية (عالية-الجلوكوز دولبيكو تعديل النسر المتوسطة (دميم) مع 15% FBS، مم 2 لتر-الجلوتامين والأحماض الأمينية الأساسية عدم (نيا) 100 يو/مليلتر البنسلين/ستربتوميسين).</li>
	<li>جمع محتويات الطبق في أنبوب 50 مل وأجهزة الطرد المركزي في 350 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. نضح المادة طافية وريسوسبيند أجزاء الذيل في 10 مل من جديد FEX المتوسطة.</li>
	<li>نقل أجزاء الذيل في المتوسط إلى طبق المغلفة بالجيلاتين واحتضان في 37 درجة مئوية في 5% CO2 و 4% س2، إضافة جديدة FEX المتوسطة كل يومين. ملاحظة: بعد خمسة إلى سبعة أيام، شظايا الذيل قد تعلق في الجزء السفلي من الطبق ويمكن رؤية الليفية تتحرك بعيداً عنها.</li>
	<li>متى تم اكتشاف مجموعات من الخلايا الليفية، بلطف يهز الطبق إزاحة قطعة الذيل ونضح على المديين المتوسط وجميع أجزاء العظام ترك الليفية تعلق على اللوحة. إضافة جديد FEX المتوسطة والثقافة الليفية حتى روافد.</li>
	<li>لضمان لا تلوث الليفية بفروعه المكونة للدم، فصل الخلايا من لوحة باستخدام 1 x التربسين-يدتا لمدة 5 دقائق وجمع الخلايا. المستنفدة للخلايا معربا عن علامات المكونة للدم (CD117، CD5، CD45R (B220)، CD11b، ومكافحة-غرام-1 (Ly-ز 6/ج)، 7-4، ومكررا ثانيا-119) باستخدام نظام فصل مغناطيسي10.</li>
</ol>2-لفي الإنتاج
<ol><li>بذور الخلايا التغليف للفيروس في حوالي 2.5 × 104 خلايا/سم2 (2.0 × 106 خلايا لطبق 10 سم) طبق تعامل زراعة الأنسجة (بفراغ-الغاز البلازما) والثقافة بين عشية وضحاها في دميم عالية-الجلوكوز مع 10% FBS، 10 مم الصوديوم بيروفات، و 100 يو/مليلتر البنسلين/ستربتوميسين CO 37 درجة مئوية و 5%2.</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، تغيير المتوسطة دميم مع أي إضافات استخدام نصف حجم استخدامها للثقافة بين عشية وضحاها (5 مل لطبق 10 سم). في فترة ما بعد الظهر، تحقق من أن الخلايا هي روافد 70-80% وتبدأ في تعداء.</li>
	<li>لكل عامل من عوامل إعادة برمجة، Gata1، Tal1، Lmo2، و حركة ج، وإعداد خليط 2:1 ناقل التعبير (بمكس) وناقلات مساعد (التي تحتوي على جينات هفوة وبول). لطبق 10 سم الخلايا الليفية، استخدام 6 ميكروغرام من ناقلات التعبير و 3 ميكروغرام لناقل مساعد في وحدة تخزين نهائي من 100 ميليلتر في المتوسط دميم.</li>
	<li>لكل عامل من عوامل إعادة برمجة، إعداد 300 ميليلتر من درجة حرارة الغرفة (RT) دميم في أنبوب البوليستيرين عقيمة وإضافة 27 ميليلتر من كاشف تعداء التجارية بعناية. ملاحظة: ينبغي أن تعرض RT قبل استخدام الكاشف تعداء ويجب إضافة مباشرة في المتوسط كما يمكن أن تجعل خصائص الالكتروستاتيكي المجمع من التمسك بجدار الأنبوبة البلاستيكية.</li>
	<li>إضافة مزيج بلازميد في أنبوب يحتوي على كاشف تعداء، دوامة بإيجاز واحتضان خليط كاشف-الحمض النووي تعداء لمدة 15 دقيقة في "الرايت بإيجاز" دوامة الخليط وإضافة دروبويسي إلى الخلايا التغليف للفيروس حيث تعداء مزيج الحمض النووي كاشف تنتشر بشكل متساو على الثقافة واحتضان في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.</li>
	<li>24 ساعة بعد تعداء، تغيير المتوسطة دميم مع 20% FBS والبنسلين يو/مليلتر 100/ستربتوميسين. ح 48 بعد تعداء، جمع المادة طافية وتصفيته من خلال عامل تصفية حقنه حجم المسام 0.22 ميكرومتر. ملاحظة: يمكن المجمدة إلى-80 درجة مئوية سوبيرناتانتس الفيروسية وأبقى حتى المطلوبة، على الرغم من أن نقل أكثر كفاءة إذا تم استخدام المادة طافية الفيروسية الطازجة.</li>
</ol>3-جتلم توصيل والحصاد iEP
<ol><li>أطباق في المتوسط FEX البذور الذيل تلميح الليفية في 1 × 104 خلايا/سم2 على 0.1% الجيلاتين المغلفة مسبقاً واحتضانها في 37 درجة مئوية ح 24.</li>
	<li>وفي اليوم التالي إعداد خليط توصيل كما يلي.<ol>
<li>إضافة المجلد 1 من المادة طافية الفيروسية لكل عامل من عوامل إعادة برمجة وتستكمل مع 4 ميكروغرام/مل من كاشف (40 ٪) من الإصابة بالفيروس إلى 6 مجلدات من FEX المتوسطة (60%).</li>
		<li>بالنسبة لطبق 10 سم الخلايا الليفية، إضافة 1 مل من كل المادة طافية الفيروسية (4 × الفيروسات = 4 مل) تستكمل مع 4 ميكروغرام/مل من كاشف عدوى الفيروس إلى 6 مل من FEX المتوسطة، أي ما مجموعة 10 مل توصيل خليط.</li>
	</ol>
</li>
	<li>نضح FEX المتوسطة من ثقافة تنتجها الخلايا الليفية واستبداله بخليط توصيل. احتضان توصيل ح 4 في 37 درجة مئوية في ظروف التاكسج (5% CO2 و 4% س2).</li>
	<li>نضح الخليط توصيل واستبداله بالمتوسطة إعادة برمجة جديدة (توسيع خالية من المصل المتوسطة (سفيم)، 100 يو/ملبينيسيلين/ستربتوميسين، 100 نانوغرام/مليلتر مورين "الخلايا الجذعية عامل" (سوف)، 10 نانوغرام/مل مورين انترلوكين-3 (IL3)، 2 يو/مليلتر الإنسان المؤتلف الاريثروبويتين (هريبو)، و 100 نانومتر الديكساميتازون).</li>
	<li>احتضانها ديسات 8 37 درجة مئوية في ظروف التاكسج، مضيفاً المتوسطة إعادة برمجة جديدة كل يومين. بعد خمسة إلى ثمانية أيام، سوف تسفر إعادة برمجة ناجحة عن مجموعات من الخلايا التي قد فصل من اللوحة.</li>
	<li>جمع الخلايا أعيدت برمجتها للتحليل، بلطف "الماصة؛" صعودا وهبوطاً حصادها مباشرة من الطبق. حصاد أونترانسدوسيد الليفية للمقارنة، فصل الخلايا من لوحة باستخدام 1 x التربسين-يدتا وجمع.</li>
</ol>

<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+We+Really+Vastly+Outnumbered%3F+Revisiting+the+Ratio+of+Bacterial+to+Host+Cells+in+Humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Are We Really Vastly Outnumbered? Revisiting the Ratio of Bacterial to Host Cells in Humans.</a> Cell. 164 (3), 337-340 (2016).</li>
<li>Lujan, E., Chanda, S., Ahlenius, H., Sudhof, T. C., Wernig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+conversion+of+mouse+fibroblasts+to+self-renewing%2C+tripotent+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Direct conversion of mouse fibroblasts to self-renewing, tripotent neural precursor cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (7), 2527-2532 (2012).</li>
<li>Szabo, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21057492">Direct conversion of human fibroblasts to multilineage blood progenitors.</a> Nature. 468 (7323), 521-526 (2010).</li>
<li>Pereira, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+hemogenic+program+in+mouse+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of a hemogenic program in mouse fibroblasts.</a> Cell Stem Cell. 13 (2), 205-218 (2013).</li>
<li>Batta, K., Florkowska, M., Kouskoff, V., Lacaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+reprogramming+of+murine+fibroblasts+to+hematopoietic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct reprogramming of murine fibroblasts to hematopoietic progenitor cells.</a> Cell Reports. 9 (5), 1871-1884 (2014).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+fibroblasts+into+bipotential+hepatic+stem+cells+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming fibroblasts into bipotential hepatic stem cells by defined factors.</a> Cell Stem Cell. 13 (3), 328-340 (2013).</li>
<li>Hendry, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+transcriptional+reprogramming+of+adult+cells+to+embryonic+nephron+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Direct transcriptional reprogramming of adult cells to embryonic nephron progenitors.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 24 (9), 1424-1434 (2013).</li>
<li>Vierbuchen, T., Wernig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+lineage+conversions%3A+unnatural+but+useful%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Direct lineage conversions: unnatural but useful.</a> Nature Biotechnology. 29 (10), 892-907 (2011).</li>
<li>Capellera-Garcia, S., Flygare, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+lineage+reprogramming%3A+a+useful+addition+to+the+blood+cell+research+toolbox%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Hematology%22%5BJournal%5D)">Direct lineage reprogramming: a useful addition to the blood cell research toolbox.</a> Expert Review of Hematology. 10 (2), 107-109 (2017).</li>
<li>Capellera-Garcia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+Minimal+Factors+Required+for+Erythropoiesis+through+Direct+Lineage+Conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Defining the Minimal Factors Required for Erythropoiesis through Direct Lineage Conversion.</a> Cell Reports. 15 (11), 2550-2562 (2016).</li>
<li>Mahmoudi, S., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+reprogramming%3A+a+two-way+street%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinions+in+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Aging and reprogramming: a two-way street.</a> Current Opinions in Cellular Biology. 24 (6), 744-756 (2012).</li>
<li>Singbrant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+couples+erythropoiesis%2C+B-lymphopoiesis%2C+and+bone+homeostasis+within+the+bone+marrow+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin couples erythropoiesis, B-lymphopoiesis, and bone homeostasis within the bone marrow microenvironment.</a> Blood. 117 (21), 5631-5642 (2011).</li>
<li>Heinrich, A. C., Pelanda, R., Klingmuller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+visualization+and+conditional+mutations+in+the+erythroid+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A mouse model for visualization and conditional mutations in the erythroid lineage.</a> Blood. 104 (3), 659-666 (2004).</li>
<li>Gautier, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-expression+profiles+and+transcriptional+regulatory+pathways+that+underlie+the+identity+and+diversity+of+mouse+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages.</a> Nature Immunology. 13 (11), 1118-1128 (2012).</li>
<li>Psaila, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiling+of+human+megakaryocyte-erythroid+progenitors+identifies+distinct+megakaryocyte+and+erythroid+differentiation+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiling of human megakaryocyte-erythroid progenitors identifies distinct megakaryocyte and erythroid differentiation pathways.</a> Genome Biology. 17 (1), 83(2016).</li>
<li>Pulecio, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Conversion+of+Fibroblasts+to+Megakaryocyte+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Reports. 17 (3), 671-683 (2016).</li>
<li>Kurita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+immortalized+human+erythroid+progenitor+cell+lines+able+to+produce+enucleated+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines able to produce enucleated red blood cells.</a> PLoS One. 8 (3), 59890(2013).</li>
</ol>

الكتاب قد لا يوجد تضارب في التقرير.

Overexpression كوكتيل أربعة معامل، GATA1، TAL1، LMO2، و ج-حركة (جتلم)، غير كافية لإعادة برمجة الخلايا الليفية مورين والبشرية مباشرة إلى المقدمة10. الخلايا محمر أعيدت برمجتها تشبه إلى حد كبير حسن النية محمر موروث من حيث مورفولوجيا والنمط الظاهري، والتعبير الجيني، والقدرة على تشكيل مستعمرة. ويؤكد هذا الاستنتاج أن الأساس المنطقي لاستخدام إعادة برمجة المباشر كأداة لتحديد العوامل التنموية ف...

خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) ضرورية في جميع الفقاريات ويشكلون نسبة 84 في المائة من كافة الخلايا من الهيئات البشرية1. من الجنينية إلى حياة الكبار، صحتنا تعتمد اعتماداً كبيرا على التنظيم الدقيق للتوازن ربك. من المعروف استمرار الإنتاج لكرات الدم الحمراء الناضجة في جميع أنحاء التنمية في مرحلة البلوغ تكون الكريات الحمر. تحديا رئيسيا في تكون الكريات الحمر للبحث هو تحديد الجهات التنظيمية الرئيسية التي تنسق التنمية ربك والتبديل بين البدائية ونهائية تكون الكريات الحمر. النسب المباشر إعادة برمجة المتكفل محمر فرصة لزيادة فهم التنمية محمر في فيفو.
النسب المباشر برمجة (DLR)، المعروفة أيضا باسم ترانسديفيرينتييشن، هو عملية إعادة برمجة واحدة من نوع الخلية مباشرة إلى آخر، تجاوز pluripotent ومراحل السلف مولتيبوتينت. وقد استخدمت حتى الآن DLR لإنتاج العديد من أنواع الخلايا بما في ذلك العصبية2و المكونة للدم3،،من45، والكبد6 والكلوية7، خلايا السلف. لعلماء الأحياء التنموي، أصبح DLR أداة هامة لاستجواب جوانب الالتزام بالنسب والتمايز المحطة الطرفية عمليات8،9. يمكن تكمل DLR واستبدال جزئيا في فيفو دراسات لفهم آليات لمصير الخلية العوامل المحددة أثناء التطوير. وينص البروتوكول DLR لإعادة برمجة لموروث محمر المبينة في هذه الورقة الحقل طريقة مجانية للدراسات التنموية لتكون الكريات الحمر.
وقد أثبتنا سابقا أن overexpression كوكتيل أربعة معامل، GATA1، TAL1، LMO2، و ج-حركة (جتلم)، كافية لإعادة برمجة الليفية مورين والبشرية على السواء مباشرة إلى فروعه محمر المستحث (المقدمة) 10-الخلايا محمر "جتلم" برمجة يشابه إلى حد كبير حسن النية محمر البدائية موروث من حيث التعبير مورفولوجيا والنمط الظاهري والجيني10. وهكذا المقدمة قد حدت من قدرة الانتشار وناضجة للكريات الحمراء المنواه مماثلة لتلك التي تنتجها عابر في الجنين المبكر قبل بداية نهائي تكون الكريات الحمر. عن طريق إجراء تغييرات في شروط إعادة برمجة (مثل الطفرات في إعادة برمجة العوامل أو إضافة عوامل أخرى)، يمكننا أن نفهم كيف يؤدي ذلك إلى تغييرات في التنمية محمر والتمايز. ونحن على سبيل المثال أظهرت أن Klf1 أو Myb بالإضافة إلى كوكتيل جتلم تغيير نمط التعبير جلوبين من الدرجة الأولى الجنينية (البدائية) للكبار أساسا (نهائي). وهذا الاستنتاج يؤكد صلاحية استخدام DLR كأداة لتحديد العوامل التنموية في تكون الكريات الحمر.
هنا، فإننا مخطط عملية توليد المقدمة من ذيل الماوس نصيحة الليفية (الصناديق الاستئمانية). في نتائج تمثيلية، أجرينا إعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران تتبع النسب محمر (ابور-لجنة المساواة العرقية R26-ايفب) الذي يعرب عن البروتين نيون أصفر (ايفب) من محور Rosa26 في جميع الخلايا التي أعرب عن مستقبلات ارثروبويتين، السماح للتصور من السهل الالتزام بنسب محمر. باستخدام هذا الأسلوب، يفب الإيجابية (+ ابور) خلايا موجودة لها في أقرب وقت بعد توصيل خمسة أيام. ويوفر هذا البروتوكول، ولذلك، تقنية سريعة وقوية لتوليد محمر فروعه في المختبر.

<table><tbody><tr><td>DMEM بدون بيروفات الصوديوم</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30022.01</td> وسائط <td>زراعة لخلايا PhGP</td></tr><tr><td>DMEM مع بيروفات الصوديوم</td><td>GE Life</td><td>Sciences SH30243.01</td><td>وسائط زراعة للأرومات الليفية ذات طرف الذيل</td></tr><tr><td>StemSpan مصل خالية من التوسع وسائل الإعلام (SFEM)</td> <td>تقنيات الخلايا الجذعية</td><td>9650</td><td>إعادة برمجة الوسائط &nbsp;</td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني HyClone</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30071.03HI</td><td>عامل النمو</td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين HyClone (100x)</td> <td>Ge Life Sciences</td><td>SV30010</td> الأحماض الأمينية غير الأساسية <td>المضادة للحيوية</td></tr><tr><td>(100x)</td> يتم تزويد وسائط <td>Thermo Fisher</td><td>11140050</td><td>SNL مع عامل</td></tr><tr><td>تفكك</td> <td>الخلايا Trypsin HyClone (1x)</td> <td>GE Life Sciences</td><td>SH30042.01</td></tr><tr><td>عامل الخلايا الجذعية للفأر (mSCF)</td><td>تمت إضافة Peprotech</td><td>250-03</td><td>إلى إعادة برمجة الوسائط</td></tr><tr><td>المؤتلف Murine Il-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13</td><td>تمت إضافته إلى إعادة برمجة الوسائط</td></tr><tr><td>الإريثروبويتين البشري المؤتلف (hrEPO)</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td>تمت إضافته إلى إعادة برمجة الوسائط</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma</td><td>50-02-2 & nbsp ؛ &nbsp;</td><td>تمت الإضافة إلى إعادة برمجة الوسائط</td></tr><tr><td>الجيلاتين من جلد الخنازير</td><td>Sigma</td><td>9000-70-8 &nbsp;</td><td>تفكيك في dH2O وتستخدم لطلاء الألواح. تأكد من التعقيم قبل الاستخدام.</td></tr><tr><td>Blasticidin S هيدروكلوريد</td><td>سيجما</td><td>3/9/3513</td><td>اختيار المضادات الحيوية. يؤثر على كل من الخلايا المؤيدة وحقيقية النواة</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td><td>Ge Life Sciences</td><td>SH30850.03</td><td>تستخدم لغسل الخطوات</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Merck</td><td>TR-1003-G</td><td>Infection / Transfection&nbsp; كاشف</td></tr><tr><td>كاشف التعداء FuGENE HD</td><td>Promega</td><td>E2311</td><td>كاشف التعداء لخط خلية PhGP</td></tr><tr><td>وحدة تصفية حقنة Millex-GP 0.22 & micro ؛ m</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td>تستخدم لتصفية المواد الطافية للفيروس</td></tr><tr><td>BD Emerald تحت الجلد حقنة</td><td>Becton Dickinson</td><td>SKU: 307736</td><td>تستخدم لتصفية المواد الطافية للفيروس</td></tr><tr><td>100 مم</td> طبق <td>الثقافة Corning</td><td>430167</td><td>زراعة الخلايا</td></tr><tr><td>6 آبار لوحة</td><td>Falcon</td><td>10799541</td><td>ثقافة الخلايا</td></tr><tr><td>ملقط الجواهري # 5</td><td>Sklar</td><td>66-7642</td><td>تستخدم ل التعامل مع شظايا الذيل الصغيرة</td></tr><tr><td>Sklarlite Iris Scissors</td><td>Sklar</td><td>23-1149</td><td>تستخدم لتقطيع الذيل إلى قطع</td></tr><tr><td>صغيرة مجموعة استنفاد خلايا النسب ، الفأر</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-858</td><td>لاستنفاد الخلايا المكونة للدم في مزارع الخلايا الليفية</td></tr><tr><td>CD117 MicroBeads ، الفأر</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-224</td><td>لاستنفاد الخلايا المكونة للدم في مزارع</td></tr> <tr><td>الخلايا الليفيةخلايا PheonixGP</td><td>ATCC</td><td>CRL-3215</td><td>خط خلية التعبئة والتغليف الفيروسي القهقري</td></tr> ناقل <tr><td>EcoPAC (pCL-Eco) &nbsp;</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-29540</td> ناقل <td>مساعد فيروسات قهقرية يحتوي على جينات الكمامة والبول</td></tr><tr><td>pMX-Gata1</td><td>مستنسخ في المختبر</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-Tal1</td><td>مستنسخ في المختبر</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-Lmo2</td><td>مستنسخ في المختبر</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-cMyc</td><td>مستنسخ في المختبر</td><td></td><td></td></tr><tr><td>برنامج CellSens Standard 1.6 &nbsp;</td><td></td><td></td><td>برنامج تحليل Cytospin</td></tr></tbody></table>

توجيه نسب إعادة برمجة الماوس الكبار تنتجها الخلايا الليفية لموروث محمر

Direct Lineage Reprogramming of Adult Mouse Fibroblast to Erythroid Progenitors

الالتزام خلية محمر والتمايز المضي قدما من خلال تفعيل شبكة النسخي مقيدة بالنسب مدبرة من قبل مجموعة من مصير الخلية تحديد ونضج العوامل. ونحن المبينة سابقا لتحديد الحد الأدنى لعدد من العوامل اللازمة لإرشاد وتطوير خلايا الدم الحمراء باستخدام النسب المباشر إعادة برمجة الخلايا الليفية في محمر المستحث المتكفل/السلائف (المقدمة). لقد أظهرنا أن overexpression من Gata1، Tal1، Lmo2، و جيم-حركة (جتلم) يمكن سرعة تحويل موريني والبشرية الليفية مباشرة إلى المقدمة التي تشبه الخلايا محمر حسن النية من حيث التشكل، النمط الظاهري، والتعبير الجيني. ونحن نعتزم أن المقدمة ستوفر أداة لا تقدر بثمن لدراسة اللائحة مصير تكون الكريات الحمر والخلية. هنا يصف لنا عملية تدريجية لتحويل ذيل موريني نصيحة الليفية في المقدمة عن طريق النسخ يحركها عامل مباشرة نسب إعادة برمجة (DLR). في هذا المثال، نقوم بإعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران محمر تتبع النسب التي تعبر عن البروتين نيون أصفر (يفب) تحت سيطرة المروج الجينات (ابور) مستقبلات ارثروبويتين، تمكين التصور خلية محمر مصير الحث على إعادة برمجة. وفي أعقاب هذا البروتوكول، يمكن أن تعاد برمجتها الليفية في المقدمة في غضون خمسة إلى ثمانية أيام.
بينما لا يزال يمكن إدخال تحسينات على العملية، ونحن تبين أن جتلم بوساطة إعادة برمجة عملية سريعة ومباشرة، مما أسفر عن الخلايا التي تحتوي على خصائص من حسن النية الخلايا السلف والسلائف محمر.

وهنا يقدم بروتوكول استنساخه لإنتاج المقدمة من الكبار الليفية استخدام النسخ DLR يحركها عامل. نقوم بتقييم الخلية إعادة برمجة استخدام التدفق الخلوي وتشكيل مستعمرة فحوصات والجينات تحليل التعبير. وللمساعدة في تصور التحويل إلى مصير الخلية محمر، أجرينا إعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران تتبع النسب محمر (ابور-لجنة المساواة العرقية R26-ايفب) الذي يعرب عن البروتين نيون أصفر (ايفب) من موضع Rosa26 في كافة الخلايا التي يتم التعبير عن مستقبلات الاريثروبويتين (ابور<...

هنا نقدم لدينا بروتوكول لإنتاج فعل المباشر المتكفل محمر (المقدمة) من الماوس الليفية الكبار استخدام النسخ التي يحركها عامل النسب إعادة برمجة (DLR).

Erythroid cell commitment and differentiation proceed through activation of a lineage-restricted transcriptional network orchestrated by a group of cell ...

إعادة برمجة النسب المباشر من الخلايا الليفية إلى خلايا السلفة الاريثيرويدية. انها طريقة جديدة قمنا بتطويرها في مختبرنا من أجل دراسة أفضل لعمليات التنظيم النسخي تحديد مصير الخلايا الاريثرويد. الميزة الرئيسية مع استخدام إعادة برمجة النسب المباشر لدراسة التنمية هو أنه تقنية واضحة جدا.لذلك بالمقارنة مع، على سبيل المثال، فقدان دراسات الدالة داخل الفئران خروج المغلوب، وهنا يمكننا بسهولة جدا التعامل مع عامل، الإفراط في التعبير عنه في نقطة زمنية معينة، ومن ثم الحصول بسهولة على ما يكفي من المواد لدراسة آثار المصب مثل التعديلات الكروماتين أو التغيرات التعبير الجيني. في حين أن هذه الطريقة تركز على إعادة برمجة الخلايا الليفية ذيل طرف الماوس إلى النسل erythroid، ويمكن أيضا أن تطبق على أنواع الخلايا الليفية الأخرى، وعلى الكائنات الحية الأخرى بما في ذلك البشر. الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد نحو نقل الدم في أنه يمهد الطريق نحو إنتاج خلايا الدم الحمراء في المختبر.إثبات الإجراء سيكون (ألبان يوهانسون) من مجموعتي البحثية تبدأ من خلال تغطية سطح الأطباق مع 0.1٪ الجيلاتين. احتضانهم في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة تقريبا.التعرق الحل الجيلاتين والسماح للأطباق لتجف. استخدام مقص لقطع في قاعدة ذيل الماوس القتل الرحيم لإزالته. ضع الذيل في DPBS مع 2٪ FBS حتى تصبح جاهزة للاستخدام.في غطاء لثقافة الأنسجة في ظروف معقمة ، أعد محلول التربسين المخفف بنسبة 0.02٪ التربسين EDTA في DPBS وأضف 5 ملليلترات في طبق غير مصقول طوله 10 سنتيمترات. في غطاء محرك السيارة ثقافة الأنسجة، وغسل الذيل في ما يكفي من الإيثانول 70٪في أنبوب 15 ملليلتر لتغطية ذلك ومن ثم في DPBS. وضع شقة الذيل في طبق واستخدام ملقط لعقد ذلك في مكانه.استخدام مشرط لإجراء شق على الذيل على طول محور طولي من القاعدة إلى الطرف. استخدام زوج من ملقط لفهم الذيل وعقد عموديا واستخدام الزوج الثاني لقبضة الجلد بجانب شق في قاعدة الذيل وقشر مرة أخرى. قم بإجراء هذا على جانبي الشق حتى يمكن تقشير الجلد عن طريق السحب إلى الأسفل نحو طرف الذيل.عقد ذيل مقشر مع ملقط على الطبق التي تحتوي على حل التربسين. استخدام مقص تشريح لقطع الذيل إلى قطع صغيرة. استخدام مقص لتفتيت هذه القطع في حل التربسين إلى قطع أصغر حجما ثم احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.لإخماد التربسين، إضافة مجلدين من FEX المتوسطة، DMEM مع المكملات الغذائية والمضادات الحيوية. جمع محتويات كاملة من الطبق في أنبوب 50 ملليلتر. جهاز طرد مركزي الأنبوب في 350 مرة G لمدة خمس دقائق في أربع درجات مئوية.تعرق و resuspend بيليه التي تحتوي على شظايا الذيل في 10 ملليلتر من FEX المتوسطة الطازجة. نقل هذا التعليق إلى طبق مغلفة الجيلاتين. احتضان في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 4٪ الأكسجين، إضافة الطازجة FEX المتوسطة كل يومين.مراقبة الثقافة بعد خمسة إلى سبعة أيام، والتي قد تعلق شظايا الذيل في الجزء السفلي من الطبق، والالخلايا الليفية تتحرك بعيدا عنهم. مرة واحدة مجموعات من الخلايا الليفية مرئية، يهز بلطف الطبق لطرد القطع الذيل. استلهم الوسط مع جميع شظايا العظام ، وترك الخلايا الليفية تعلق على لوحة.إضافة 10 ملليلتر من FEX المتوسطة الطازجة والثقافة الخلايا الليفية حتى التقاء. لضمان عدم وجود تلوث من قبل البروتينات الارتباطية في ثقافة الخلايا الليفية، افصل الخلايا عن الصفيحة باستخدام التربسين EDTA كما هو موضح في المخطوطة. إضافة المتوسطة وجمع الخلايا، وإضافة الخرز المغناطيسي مع الأجسام المضادة.استخدام نظام فصل مغناطيسي لإزالة الخلايا التي تعبر عن علامات الدم. إن تضمين هذه الخطوة أمر حيوي للغاية لأنها تقضي على أي مراكز الممارسات المنسقة التي قد تكون موجودة في الثقافة وبالتالي احتمال وجود أي إيجابيات كاذبة في يوم تحليل FACS. بذور خلايا التعبئة والتغليف الفيروسية في حوالي 25،000 خلية لكل سنتيمتر مربع على طبق معالجة ثقافة الأنسجة.احتضان الخلايا في DMEM عالية الجلوكوز في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، قم بإزالة الوسيطة وإضافة نصف الحجم المستخدم لثقافة بين عشية وضحاها من DMEM مع عدم وجود إضافات. في فترة ما بعد الظهر، تحقق من الخلايا ل 70 إلى 80٪ التقاء اللازمة لtransfefection.ابدأ عملية النقل عن طريق إعداد خليط من اثنين إلى واحد من ستة ميكروغرامات من متجه التعبير PMX وثلاثة ميكروغرامات من متجه المساعد الذي يحتوي على Gag و Pol ومغلف للجينات لكل عامل إعادة برمجة. بعد ذلك ، لكل عامل إعادة برمجة ، أضف 300 ميكرولترات من DMEM درجة حرارة الغرفة في أنبوب البوليسترين العقيم. ثم قم بإضافة 27 ميكرولترات بعناية من كاشف النقل التجاري في درجة حرارة الغرفة مباشرة إلى الوسط لتجنب الاتصال بجدار الأنبوب.أضف مزيج البلازميد إلى كاشف نقل يحتوي على أنبوب. دوامة لفترة وجيزة واحتضان الخليط لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. دوامة مُكْوّدَةُ الـ DNA مجدداً.إضافته دروبا إلى خلايا التعبئة والتغليف الرجعية بحيث يتم توزيعها بالتساوي على الثقافة واحتضان في 37 درجة مئوية. 24 ساعة بعد transfection، وإزالة المتوسطة وإضافة DMEM مع 20٪ FBS و 100 وحدة لكل ملليلتر البنسلين الستريبتوميسين. بعد 48 ساعة من عملية الانتراق، اجمع المُندفع وتصفية ذلك من خلال مُرشاح مُحقن بحجم مُيكرومتر 0.22.بدء عملية النقل عن طريق البذر الذيل تلميح الخلايا الليفية في 10، 000 الخلايا لكل سنتيمتر مربع على 0.1٪ الجيلاتين قبل المغلفة الأطباق في FEX المتوسطة. احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. وعند تنفيذ هذه الخطوة، من المهم إضافة الأربعة من كبرى الفيروسات الرجعية بنسبة متساوية لضمان أن تسهم جميع المواد المتحولة الأربع على قدم المساواة في عملية إعادة البرمجة.في اليوم التالي، أعد خليط تحويلي عن طريق إضافة أول حجم واحد من الفيروسية فائقة لكل عامل إعادة برمجة تكملها أربعة ميكروغرام لكل ملليلتر من مُكشف عدوى الفيروسات الرجعية إلى ستة مجلدات من FEX المتوسطة. بعد ذلك، التعرق المتوسطة FEX من ثقافة الخلايا الليفية وإضافة خليط transduction. احتضان تفاعل النقل لمدة أربع ساعات في 37 درجة مئوية في ظروف نقص الأكسجة في 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 4٪ الأكسجين.بعد أربع ساعات، يُطرّح خليط النقل وأضف طازجًا من إعادة البرمجة. احتضان في 37 درجة مئوية في ظروف نقص الأكسجة لمدة ثمانية أيام، مضيفا جديدة إعادة برمجة المتوسطة كل يومين. مراقبة إعادة برمجة ناجحة مع الكتل المنتجة من الخلايا المنفصلة عن اللوحة.لحصاد الخلايا المبرمجة من الطبق لمزيد من التحليل، ماص بلطف لهم صعودا وهبوطا ومن ثم جمع الخلايا. بعد إعادة برمجة ناجحة من iEPs، الخلايا الإيجابية YFP يمكن ملاحظتها في وقت مبكر قبل خمسة أيام بعد عملية النقل. تصبح مستديرة، وترفع من سطح اللوحة، وتبدأ في تشكيل مجموعات، وتعرض مورفولوجيا السلائف الشبيهة بالجرثرويد.الهيموغلوبينية لبعض الخلايا واضح من خلال تلطيخ البنزيدين الإيجابي. ويعبر جزء صغير عن علامة السطح الخاصة بالريثيرويد TER-119. وفي اليوم الثامن، يمكن رؤية مجموعات كبيرة إيجابية من YFP.اليوم الثامن iEPs لديها أكثر تميزا النمط الظاهري من iEPs اليوم الخامس. فهي أصغر بكثير، وقد تراكمت أكثر الهيموغلوبين، وتظهر زيادة التعبير عن TER-119. تحليل التعبير الجيني من قبل qPCR من iEPs التي تم جمعها في اليوم الثامن يظهر أنها قد أغلقت تقريبا التعبير عن الجينات الليفية و upregulated العديد من الجينات الإريثرويد.بعد إجراء مقايسات تشكيل مستعمرة BFU-e على الخلايا التي أعيد برمجتها، تشكل iEPs اليوم الثامن نوعين من المستعمرات، حمراء بشكل واضح وليست حمراء بشكل واضح. في حين أن الخلايا من المستعمرات الحمراء عرض مورفولوجيا اريثروبابلاست، لم خلايا من المستعمرات غير الحمراء. تقريبا واحدة في 1, 000 يوم خمسة شكّل مستعمرات حمراء بينما فقط تقريبا واحدة في 10,000 مستعمرات يشكّل من يوم ثمانية iEPs.وتتأثر كفاءة إعادة برمجة من الذيل طرف في الخلايا الليفية أو TTFs من رقم مرور. وأظهرت صناديق TTFs التي تم تمريرها تسع مرات انخفاضًا كبيرًا في القدرة على إنتاج مجموعات من الفئات IEPs مقارنة بالخلايا التي تم تمريرها ثلاث مرات. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تؤثر ظروف الثقافة المختلفة على كفاءة إعادة البرمجة.12- وتُزرع في نورموكسيا في 10 أيام أبطأ بكثير في إعادة البرمجة، كما أن مجموعات IEP تُلاحظ بعد 10 أيام بدلاً من خمسة إلى ثمانية أيام. بعد هذا الإجراء، يمكن تطبيق أساليب مثل مقايسات تشكيل مستعمرة، تحليل qPCR وFACS من أجل تحديد حالة تمايز الخلية. منذ تطورها ، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الإريثروبويس في فهم التبديل بين الخلايا الإريثرويدية البدائية والنهائية في الماوس والإنسان.

direct-lineage-reprogramming-adult-mouse-fibroblast-to-erythroid

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

هذا الفيديو يبين الداخلي الناجم عن توليد الخلايا الجذعية المحفزة باستخدام الفيروسة البطيئة التي تعبر عن محرض Oct4 ، Sox2 ، ج Myc وKlf4.

توليد خلايا الجذع من خلال التعبير MEFS القسري لل2 - سوكس ، أكتوبر 4 ، ج Myc وKlf4

نقدم لبروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الجسدية من كفاءة الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) وتحديد hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة.

اختيار وعزل المستعمرات من صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة برمجتها من الخلايا الليفية الكبار

استهداف الخلايا المقيمين في الدماغ لإعادة برمجة المباشر النسب-يقدم آفاقا جديدة للإصلاح الدماغ. نحن هنا وصف بروتوكول لكيفية إعداد الثقافات المخصب لpericytes المقيمين في الدماغ من الكبار قشرة الدماغ البشري وتحويل هذه الخلايا العصبية إلى الناجمة عن الفيروس الارتجاعي بوساطة تعبير عن عوامل النسخ Sox2 وAscl1.

النسب-إعادة برمجة الخلايا المشتقة من خلية حوطية الدماغ البشري الكبار في الخلايا العصبية المستحثة

يمكن إعادة برمجة الخلايا الليفية الجنينية للفأر إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات بكفاءة منخفضة عن طريق التعبير القسري عن عوامل النسخ Oct-4 و Sox-2 و Klf-4 و c-Myc. المواد الوسيطة النادرة لتفاعل إعادة البرمجة هي FACS معزولة عن طريق وضع العلامات بالأجسام المضادة ضد صانعي سطح الخلية Thy-1.2 و Ssea-1 و Epcam.

ماركر الخلايا السطحية تنقية بوساطة من الجذع الوسطيات خلية من نموذج قابل للبرمجة ماوس

جيل من الخلايا الجذعية المحفزة يوفر فرص رائعة لاشتقاق زرع ذاتي. ومع ذلك، تقدم من خلال دولة المحفزة وشاقة إعادة التمايز لا يزال يعيق ترجمة السريرية. نحن هنا وصف اشتقاق الخلايا الليفية الإنسان الكبار وتحويلها مباشرة إلى الخلايا الاصلية العصبية التي يسببها والتفريق لاحق في الأنساب العصبية.

الاشتقاق من الكبار الخلايا الليفية الإنسان والتحويل المباشر إلى داخل الخلايا العصبية للتوسيع السلف

يوضح البروتوكول الموصوف هنا بالتفصيل تحريض برنامج متولد الدم في الخلايا الليفية الجنينية للفأر عن طريق الإفراط في التعبير عن مجموعة ضئيلة من عوامل النسخ. يمكن ترجمة هذه التقنية إلى الجهاز البشري لتوفير منصات للدراسة المستقبلية لتكون الدم وأمراض الدم وزرع الخلايا الجذعية المكونة للدم.

إعادة برمجة الخلايا الليفية الفأر الجنينية مع عوامل النسخ للحث على برنامج مكون للدم

في حين يتم تجنيد البلاعم تسلل باستمرار إلى أنسجة الكبار من السلائف تعميم، والبذور المقيمين البذور الأنسجة أثناء التنمية، حيث يتم الحفاظ عليها دون مزيد من المدخلات من الأسلاف. تم تحديد الأسلاف للبلاعم المقيمين مؤخرا. هنا، نقدم أساليب لتخطيط مصير الجينات من الأسلاف بلعم المقيمين.

تحديد أسلاف ريدثروميلويد وذريتهم في الجنين الماوس عن طريق التدفق الخلوي

نقدم هنا طريقة قوية لإعادة برمجة الخلايا الليفية الجنينية الأولية في cardiomyocytes الوظيفية من خلال أوفيريكسبريشن من GATA4، Hand2، Mef2c، Tbx5، مير-1، ومير-133 (GHMT2m) جنبا إلى جنب مع تثبيط الإشارات TGF-β. يولد لدينا بروتوكول cardiomyocytes الضرب أقرب وقت توصيل بعد 7 أيام بنسبة تصل إلى 60% الكفاءة.

قمع الإشارات برو تليفية يقوي التي تعالج بوساطة معامل إعادة برمجة الخلايا الليفية الجنينية الماوس في Cardiomyocytes المستحث

هذا البروتوكول يدل علي التحريض من برنامج الأرقاء في الخلايا الليفية الجلدية البشرية عن طريق التعبير القسري من عوامل النسخ GATA2 ، GFI1B و FOS لتوليد الخلايا الجذعية التي تكون الدم و سلف.

الأرقاء أعاده برمجه الخلايا الليفية البشرية عن طريق التعبير القسري من عوامل النسخ

هنا ، نصف نظام إعادة برمجة مباشر محسن للخلايا الصباغية ونظام تعبئة فيروسات عالي الكفاءة ومركز يضمن إعادة برمجة مباشرة سلسة.

إعادة البرمجة المباشرة للخلايا الليفية للفأر في الخلايا الصباغية

تعلم إعادة برمجة الخلايا الليفية للفئران إلى سلفات محمرة مُحفزة باستخدام عوامل النسخ. تُتيح هذه الطريقة دراسة تنظيم التعبير الجيني وتطور الخلايا المحمرة بكفاءة عالية.

توجيه نسب إعادة برمجة الماوس الكبار تنتجها الخلايا الليفية لموروث محمر

استكشف المزيد من الفيديوهات