فحص الأنماط الجينية القطنية لمقاومة النيماتود الرينيفورم

ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في تطوير أصناف القطن المقاوم للنيماتودا. من خلال تحديد الأنماط الجينية المقاومة من أنواع قطنية أخرى وتقييم مجموعات التكاثر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر طريقة بسيطة وغير تدميرية لفحص النيفورمة الخيطية.

تبدأ عن طريق وضع كرة من القطن في الجزء السفلي من قطرها أربعة سنتيمترات واحد، 21 مركز ارتفاع وعاء البلاستيك المخروطية لكل البذور. وملء الأواني مع خليط التربة المبستر بالبخار إلى ما يقرب من سنتيمترين من أعلى القدر. وضع حصة من البلاستيك في كل وعاء تعيين النمط الجيني لزرع وزرع بذرة واحدة من المناسب المناسب من نوع وراثي القطن المقابلة في كل وعاء.

ملء كل وعاء مع التربة إضافية لتغطية البذور ووضع الأواني في غرفة النمو تعيين إلى درجة حرارة ثابتة من 28 درجة مئوية مع 16 ساعة الفلورسنت ومصباح المتوهجة فترة الصورة. ثم ضع باعثات المياه في كل وعاء واستخدم نظام سقي تلقائي لسقي الأواني مرتين يوميًا. بعد سبعة أيام من الزراعة ، قم بإنشاء منخفض صغير في التربة بجوار كل نبات وإضافة ملليلتر واحد من تعليق النيفورمات الخيطية في كل اكتئاب.

بعد التطعيم ، يجب التحكم بعناية في مياه الوعاء من أجل منع غسل الديدان الخيطية من منطقة الجذر. بعد 28 يوما من التطعيم، استخدم المقص لإزالة معظم الأوراق الموسعة بالكامل من النباتات قبل الضغط على كل وعاء والانزلاق التربة إلى يد واحدة لإزالة النباتات. يهيج بلطف نظام الجذر في ماء الصنبور في حاوية سعة 10 لتر لإزالة التربة من الجذور ، تليها شطف قصيرة في وعاء من مياه الصنبور النظيفة.

استخدام مقص لإزالة نظام الجذر تنظيفها من النبات ما يقرب من سنتيمتر واحد تحت خط التربة. وضع الجذور في حاوية 120 ملليلتر عينة غير معقمة من البلاستيك يمكن التخلص منها. المقبل، تماما تغطية نظام الجذر مع ما يقرب من 30 ملليلتر من محلول تلوين الطعام الأحمر ووضع حاوية العينة في فرن الميكروويف لتسخين من حل تلطيخ حتى يبدأ في الغليان.

عندما تبرد العينة إلى درجة حرارة الغرفة، استبدل محلول تلوين الطعام الأحمر بـ 100 ملليلتر من ماء الصنبور لإزالة أي بقعة زائدة. ثم ضع الغطاء على حاوية العينة واخزن العينة عند درجة مئوية أربع حتى تحليل العدوى الجذرية. لاستعادة النباتات لإنتاج البذور، ضع كرة من القطن في الجزء السفلي من وعاء بلاستيكي مخروطي جديد وملء الأواني جزئياً بموسط قهوة الطحالب الخث.

مكان نظام جذر واحد حصادها تبادل لاطلاق النار الخضري في وعاء وإضافة بحزم بوتينغ المتوسطة لملء وعاء. ضع حصة بلاستيكية جديدة تحمل علامة في كل وعاء لتعيين النمط الوراثي القطني ووضع صينية الأواني في حاوية بلاستيكية من الماء. لفترة وجيزة المياه النباتات لترطيب المتوسط بوتينغ ووضع الأواني في غرفة النمو تعيين إلى درجة حرارة ثابتة من 28 درجة مئوية وفترة صور 16 ساعة.

بعد ما يقرب من 30 يوما، وملء جزئيا واحد وعاء من البلاستيك ستة لتر في المصنع مع بوتينغ المتوسطة. نقل كل نبات في وعاء ستة لتر، مضيفا بحزم بوتينغ المتوسطة إلى كل وعاء كما يتم زرع كل الشتلات. ثم ضع النباتات في منزل زجاجي وإضافة الماء لترطيب وسط بوتينغ.

لتقييم عدوى الجذر R.reniformis، إزالة عينة الجذر من حاوية العينة. استخدام المجهر ستيريو لحساب عدد من الديدان الخيطية الإناث تعلق على نظام الجذر تحت 20X التكبير. يمكن أن تتأثر عدوى جذر الخيطية الناجحة بعدوى عدة عوامل، بما في ذلك جدوى الخيطية المستخدم في التلقيح والاختلاف الموسمي، حيث أن الديدان الخيطية أقل نشاطًا خلال أشهر الشتاء.

ثم ضع نظام الجذر على مناشف ورقية لمدة 10 دقائق تقريبًا لإزالة الرطوبة الزائدة. وزن نظام الجذر لتحديد الوزن الجذر الطازجة. الاختلافات في نمو الجذر شائعة بين الختان.

ويمكن أيضا ملاحظة هذه الاختلافات، كما تقاس بوزن الجذور الطازجة، بين النباتات من نفس النمط الجيني. عدد أقل نسبيا من النيماتودا الأنثى النيفورم قادرة على إنشاء موقع تغذية للنوع الوراثي القطن المقاوم مقارنة مع النمط الجيني المعرض. ويمكن استخدام بيانات الوزن الجذر الطازج لحساب عدد النيماتودا الأنثى رينيفورم لكل غرام من الأنسجة الجذرية لكل نوع جيني.

وعدد النيماتودا الأنثى في كل غرام من الجذر للنمط الوراثي المقاوم هو عموما أقل من 10، في حين أن الأنماط الجينية المعرضة للإصابة عادة ما يكون لها أكثر من 30 نعمة في كل غرام من الجذر. هنا، يتم عرض مجموعة فرعية من البيانات من مجموعة منفصلة F2 التي شملت 300 النباتات. هذه المدى في الاختلاف لنمو الجذر والنيماتودا للأنظمة الجذر لوحظت عادة لتقييمات الديدان الخيطية، مما يدل على قدرة هذا الإجراء على أن تستخدم لفحص عدد كبير من النباتات في تجربة واحدة، لتقليل هذا الاختلاف، وتسهيل تقييم دقيق لعلم الوراثة المقاومة.

بعد هذا الإجراء، يمكن تحديد علم الوراثة لمقاومة النيماتودا رينيفورم لتحديد علامات الحمض النووي المرتبطة بالمقاومة. ويمكن بعد ذلك استخدام هذه العلامات في التربية بمساعدة العلامة ونقل مقاومة الديدان الخيطية إلى القطن المرتفع. بعد تطورها، وفرت هذه التقنية طريقة غير مدمرة للسماح للباحثين باستعادة النباتات بعد إعادة فحص الديدان الخيطية للمساعدة في تربية أصناف القطن المقاوم.