عزل ووصف البشرية المستمدة من الحبل السري الخلايا الجذعية الوسيطة من الخدج والرضع الناضجين

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مداولات UCMSC ، مثل أفضل مصدر لـ USMSC للعلاج الخلوي. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تمكن من العزلة المستمرة والانتشار القوي لـ UCMSC من الرضع قبل الأوان ومدى المواليد. الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد نحو علاج الأمراض المستعصية.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في مداولات UCMSC، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على مصادر أخرى MSC، مثل الأنسجة الدهنية، synovium، والجلد، لب الأسنان، وهلم جرا. عموما، سوف الفرد الجديد لهذه الطريقة النضال لأن هناك الكثير من الاختلاف في خطوات تشريح السرة وعزل الخلايا الجذعية mesenchymal. العرض التوضيحي المرئي لهذا الأسلوب أمر بالغ الأهمية لأن هذه الخطوات يصعب تعلمها لأن هناك عدة نقاط عرضة للتجاهل.

للبدء في تشريح الحبل السري ، قم أولاً بإعداد صينية معدنية ، ومقص معقمة ، وملقط ، وعشرة ماصة ملليلتر ، وماصات 25 ملليلتر ، وأطباقين لثقافة الأنسجة من 60 ملليمترًا. الاحماء برنامج تلفزيوني يمزج انزيم تنقية، 500 ملليلتر من متوسطة المصل منخفضة والثقافة المتوسطة، لدرجة حرارة الغرفة. إزالة الحبل السري المعزول سابقا من أنبوب 50 ملليلتر في ميم ألفا، ووضعها في علبة بلاستيكية.

وزن الحبل السري، ومن ثم استخدام مقص معقمة لتشريح خمسة غرامات من الحبل. لتعقيم الحبل السري، استخدم ماصة المليلتر عشرة لصب عشرة ملليلترات من الإيثانول 70 في المئة أكثر من ذلك. ثم غسل الحبل مرتين عن طريق إضافة عشرة ملليلتر من برنامج تلفزيوني مع ماصة 10 ملليلتر.

وضع الحبل السري غسلها في معقمة 60 ملليمتر طبق زراعة الأنسجة وإضافة عشرة ملليلتر انخفاض مصل المتوسطة و0.5 ملليلتر يمزج انزيم النقي. استخدام مقص معقمة ملقط لقطع الحبل إلى قطعتين إلى ثلاثة ملليمترات. ضع الطبق في حاضنة لثاني أكسيد الكربون بنسبة خمسة في المائة واحتضانه عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

ثم قطع القطع هضم جزئيا إلى قطع أصغر، واحتضان لهم في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون خمسة في المئة حتى يصبح متجانسة لزجة. وأخيرا، تأكد من أن تتدفق متجانسة بسهولة من خلال ماصة 25 ملليلتر. أولاً قم بإعداد أربعة أنابيب بلاستيكية 50 ملليلتر في زجاجة 500 ملليلتر من وسيط الثقافة.

استخدام ماصة 25 ملليلتر لتقسيم التجانس الحبل السري إلى اثنين, 50 أنابيب بلاستيكية ملليلتر مع ما يقرب من 7.5 ملليلتر في كل أنبوب. ثم إضافة 20 ملليلتر من المتوسطة الثقافة في كل أنبوب ومزيج جيد. جمع كل متجانس مع ماصة 25 ملليلتر وتصفية من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر وضعت على رأس أنبوب جمع 50 ملليلتر جديدة.

الطرد المركزي أنبوبين مع filtrates في 1000g لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد الانتهاء من الطرد المركزي، وpirate بعناية طاردة وتجاهل ذلك. إضافة خمسة ملليلتر من الثقافة المتوسطة لكل أنبوب، وإعادة تعليق الكريات الخلية.

نقل تعليق الخلية إلى لوحة جديدة 60 ملليمتر والثقافة في 37 درجة مئوية في حاضنة 5 في المئة ثاني أكسيد الكربون. لثقافة UCMSC، تدفئة برنامج تلفزيوني، التربسين EDTA، والثقافة المتوسطة، لدرجة حرارة الغرفة. عندما يتم إرفاق الخلايا إلى لوحة، وإزالة المتوسطة، وغسل مرتين مع خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني لإزالة الحطام وخلايا الدم الحمراء.

أضف الثقافة المتوسطة واحتضان في 37 درجة مئوية في حاضنة 5 في المئة ثاني أكسيد الكربون. استبدال المتوسطة مرتين في الأسبوع، وثقافة الخلايا حتى تصل إلى 90 إلى 100 في المئة التقاء. ثم غسل الخلايا مرتين مع خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني، إضافة 0.5 ملليلتر من التربسين EDTA، واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة خمس إلى عشر دقائق.

عندما تصبح الخلايا مدورة ومنفصلة، أضف تسعة ملليلترات من الوسط الثقافي، واخلط جيداً لإلغاء تنشيط التربسين. إضافة تعليق الخلية في لوحة جديدة 100 ملليمتر. تنمو الخلايا في 37 درجة مئوية في حاضنة 5 في المئة ثاني أكسيد الكربون حتى تصل إلى 90 إلى 100 في المئة التقاء.

كرر التربسينية وتقسيمها إلى لوحتين جديدتين، حتى المقطع العاشر. وقد استخدم تعبير علامة سطحية لـ UCMSC كمعيار لتوصيفها. عندما تحضن مع الأجسام المضادة المناسبة وتحليلها عن طريق تدفق الخلايا، تم العثور عليها إيجابية لعلامات التوقيع MSC، ولكن سلبية لجملة أحادية، سلبية للخلايا الجذعية الدموية وخلية ephithelial، سلبية للخلية B، سلبية لعلامات الكريات البيض عموم، والسلبية لعلامات معقدة الهسطية الرئيسية.

لتقييم قدرة تمايز الخط الثالوي لـ USCMSC من الخدج والرضّع، تم حث الخلايا على التفريق إلى الخلايا الشحمية، والخلايا العظمية، والزخردات. UCMSC في النجاح في تمييز الأنواع الثلاثة من الخلايا المتوسطية تؤكد قدرتها على التمايز. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن هناك أربع خطوات حاسمة.

قطع الحبل إلى قطعتين إلى ثلاثة سنتيمترات، وقطع إلى قطع أصغر، والتأكد من أن تتدفق متجانسة بسهولة من خلال ماصة 25 ملليلتر، وتصفية التجانس من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر.