إعداد نشط إيقاعي في الحبل الشوكي الدماغ القوارض الولدان المختبر وشريحة رقيقة

هذه الطريقة تسهل تشريح و تشريح الدماغ القوارض من أجل التحليل الملتقط لشبكة ميران Medullary التنفسية. هذه التقنية توفر مرونة تجريبية كبيرة، مما يجعل من الممكن إعداد إما في المختبر الافراج عن أو إعداد شريحة للتسجيل. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتجارب الفيزيولوجيا الكهربائية لاستكشاف دائرة التحكم العصبي التي تولد إيقاعات التنفس وفهم علم الأمراض وخلع تنظيم التنفس في القوارض المعدلة وراثيا.

بعد تشريح نيوراكسيس، بسرعة نقل الجذع المعزول للحيوان إلى غرفة تشريح التهوية تحت مجهر تشريح ووضع الأنسجة الظهرية الجانب، مع نهاية الرسترالية التي تواجه الجزء الأمامي من الغرفة. دبوس الأنسجة في الكتفين ونهاية معظم السد من الحبل الشوكي وجعل شق منتصف الجمجمة من خلال الجمجمة بعد خياطة الجدارية لتجنب إتلاف القشرة و الدماغ الكامنة في الجمجمة. بدءا من خياطة القوس والعمل على نحو جانبي، قص خياطة القذالي من الجمجمة لخلق اللوحات من العظام التي قد تنعكس ومثبتة لترسيخ وتثبيت الجزء الرسترالي من الجمجمة.

بعد أن تعكس كلا اللوحات الجمجمة، استئصال ما تبقى من قشرة الدماغ، وترك الجزءdal من المخيخ سليمة نسبيا لإجراء استئصال لامينكومي الظهرية. استخدام مقص الربيع الصغير والملقط لإزالة العضلات المحيطة الجمجمة وعمود الفقرات. إزالة الأنسجة على طول الجانب الظهري من القفص الصدري، وترك الأضلاع سليمة وقص بعناية بعيدا العمليات الجانبية من الصفيحة الفقرية.

بعد قطع أي نسيج الإفراط في اللبونات والنخاع، والفيرميس، المخيخ، البون وبداية الحبل الشوكي، وسوف تكون مرئية بوضوح. لإجراء استئصال لامينكومي البطني، ضع الأنسجة الظهرية الجانب إلى أسفل ودبوس في القفص الصدري والنهاية الأكثر كادال من العمود الفقري. استخدم رفرف الجمجمة لتثبيت الجانب التاجي من الأنسجة وإزالة النصف البطني من القفص الصدري، بما في ذلك القص وجميع أعضاء البطن.

تشريح بعيدا الأنسجة الرخوة تعلق على القفص الصدري لفضح الأضلاع والحبل الشوكي وإزالة اللسان والمريء والقصبة الهوائية والحنجرة وجميع الأنسجة الرخوة الأخرى والعضلات الإفراط في قاعدة الجمجمة والعمود الفقري. من أجل تحديد البليت الثابت، تشريح الأنسجة فوق هذا لوحة مستطيلة من العظام في قاعدة الجمجمة، والتي تشمل المسافة البادئة على شكل V. ثم قطع على طول خط الوسط من البليت، ورفع بعناية الأنسجة صعودا وتنفيذ قطع عرضية لإزالته.

لبدء استئصال لامينتك في البطن ، وإزالة lamina ، وتعريض السطح البطني للدم المدبر والحبل الشوكي من الفقرة العنقية الأولى إلى ما يقرب من الفقرة الصدرية سبعة وقصة من خمسة إلى 10 ملليمترات على طول جانبي العمود الفقري في لامينا. عندما تم الكشف عن الحبل الشوكي، قص rootlets ما يقرب من 20 إلى 25 ملليمتر ثنائيا، على طول العمود الفقري إلى T7 تقريبا ورفع بعناية الحافة الرسترالية من C1، C2 وC3 مع ملقط مدمن مخدرات أو عازمة للسماح القطع تحت العظام لإزالة الفقرات الثلاث. عندما تم عزل الطول المطلوب من الحبل الشوكي من العمود الفقري، وجعل قطع عرضية لإزالة أنسجة الحبل الشوكي.

بعد إزالة الجافا ، ضع جذع الدماغ في وسط منصة البارافين على كتلة القطع البلاستيكية واستخدم دبابيس الحشرات الدقيقة ، قلصت إلى ما لا يزيد عن سنتيمتر واحد في الطول لتثبيت نهاية النخاع من خلال الحبل الشوكي القعر. ثم محاذاة paraffin تغطية كتلة القطع مع جذع الدماغ المثبتة في حامل كتلة هزاز، بحيث شفرة سوف تقطع عمودي على الوجه الرسترالي من جذع الدماغ. المقبل، وجعل شريحة أولية لإزالة 200 إلى 300 ميكرومتر من الأنسجة الدخيلة غير المستوية على نهاية معظم الرسترالية من الأنسجة، وإجراء تعديلات صغيرة حسب الضرورة لضمان الخطية PARP والتخفيضات الصغيرة لإزالة أي أنسجة غير مستوية.

سوف تصبح الجذور البلعومة مرئية على الحافة الجانبيّة لعقل الدماغ، وتقطع شريحة 300 إلى 500 ميكرومتر من جذع الدماغ من هذه العلامات العصبية العصبية الرسترالية لالتقاط مجمع ما قبل البوتزينغر ودوائر الإرسال المرتبطة به. جميع خطوات إجراءات تشريح حاسمة لخلق قابلة للاستنساخ, شريحة قابلة للحياة, مع كل من الدوائر العصبية اللازمة في الاتجاه الصحيح لإنتاج إيقاع قوي. يمكن التقاط جميع عناصر الدائرة العصبية الضرورية للغاية لتوليد وإيقاع ملهم ونقله في شريحة رقيقة باستخدام هذه الطريقة.

بما في ذلك مجمع ما قبل بوتزينغر، الخلايا العصبية قبل الحركية إسقاط إلى الخلايا العصبية الحركية hypoglossal والجذرات العصبية hypoglossal. يمكن بعد ذلك استخدام مجمع ما قبل البوتزينغر، والجذيرات العصبية القحفية أو الـ 12ث والجذورات العصبية C4 للتسجيل الملهم. الجانب الرئيسي لهذا الإجراء هو العزل الدقيق للجذور والتأكيد على أن جذع الدماغ لا يتلف قبل قطع الشريحة النهائية.

بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربائية باستخدام أساليب المشبك التصحيح، التسجيلات الخلوية الإضافية أو أقطاب الشفط لتسجيل النشاط الكهربائي الذي تنتجه الشبكة. لم تقدم البروتوكولات المنشورة سابقًا سوى القليل من التفاصيل خطوة بخطوة ، مما يجعل من الصعب على الباحثين الجدد استخدام هذه الطريقة دون السفر إلى مختبر آخر وقضاء بعض الوقت مع محقق محنك.