راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس

يصف هذا البروتوكول كيفية تطبيق منهجية محددة الهدف مسبقاً على العلاج الإشعاعي المستهدف من xenographs السرطان في نموذج الماوس. يسمح لنا العلاج الإشعاعي أو PRIT المحاصل مسبقًا بحقن الأجسام المضادة والليغا الإشعاعي بشكل منفصل ، والسماح للاثنين بالجمع في الجسم الحي باستخدام كيمياء النقر. في حين أننا نقدم PRIT باستخدام نموذج xenograph من سرطان القولون والمستقيم، يمكن تطبيق هذه التقنية على أي مستضد سطح يستهدف الأجسام المضادة.

من المهم اختيار مستضد لا يستوعب بسرعة أو يتساقط على نطاق واسع لأن هذه يمكن أن تقلل من فعالية النهج. لتوليف huA33-TCO أولاً إعداد حل ميكرولتر 125 من 40 ملليغرام لكل ملليلتر TCO-NHS في الميثيلفورماميد الجافة في أنبوب microcentuge 1.7 ملليلتر. ويمكن أن يقتبس هذا الحل وتجميدها عند 80 درجة مئوية لاستخدامها في التجارب المستقبلية.

في منفصلة 1.7 ملليلتر microcentrifuge أنبوب إعداد خمسة مليغرام لكل مليلتر حل huA33 في ملليلتر واحد من الفوسفات المالحة المخزنة. باستخدام اسكوت صغير من 0.1 من كربونات الصوديوم الصوديوم، ضبط درجة اله من حل الأجسام المضادة إلى ما بين 8.8 و 9.0. استخدام إما ورقة الرقم الH أو مقياس الرقم الH مع microelectrode لمراقبة الرقم الH، وممارسة الرعاية أن الرقم الH لا يتجاوز 9.0.

إضافة حجم المقابلة ل40 معادلة المول من TCO-NHS إلى حل الأجسام المضادة. لمنع هطول الأمطار من TCO-NHS مسعور، إضافته ببطء ومع الانفعالات. السماح لرد فعل لاحتضان في 25 درجة مئوية على خلاط حراري لمدة ساعة واحدة مع الانفعالات خفيفة.

قبل تنقية huA33-TCO من دون العادة باستخدام عمود استبعاد الكميات القابلة للتخلص من التعبئة المسبقة، قم بتكبيل عمود استبعاد الحجم كما وصفه المورد لإزالة أي مواد حافظة موجودة في العمود أثناء التخزين والذي يتضمن عادة غسل العمود خمس مرات مع حجم من برنامج تلفزيوني يتوافق مع حجم العمود. إضافة خليط التفاعل إلى عمود استبعاد حجم، مع الإشارة إلى حجم خليط التفاعل. بعد دخول خليط التفاعل العمود إضافة كمية مناسبة من برنامج تلفزيوني لتحقيق الحجم الإجمالي للحل المضافة إلى العمود حتى 2.5 ملليلتر.

جمع المنتج باستخدام مليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني كما eluent. قياس تركيز HUA33-TCO باستخدام مطياف الأشعة فوق البنفسجية في رصد الطول الموجي في 280 نانومتر. إذا كان الحل مع تركيز أعلى من مناعة هو المطلوب التركيز huA33-TCO الحل باستخدام وحدة فلتر الطرد المركزي مع 50، 000 قطع الوزن الجزيئية بعد تعليمات الشركة المصنعة.

تخزين الانتهاء huA33-TCO من الناحية المناعية في 4 درجة مئوية في الظلام. إذا كان لاستخدامها أكثر من أربعة أيام في المستقبل تخزين في 80 درجة مئوية في الظلام. في أنبوب الطرد المركزي 1.7 ملليلتر إضافة 200 ميكرولترات من 0.25 أسيتات الأمونيوم الوليار العازلة المعدلة إلى 5.5 pH.

إضافة الكمية المطلوبة من كلوريد لوتيتيوم-177 إلى محلول العازلة. وسيتوقف المبلغ المضاف على عدد الأشخاص الذين تجرى تجربتهم، والجرعات المشعة التي تُعطى. إضافة Tetrazine PEG7-DOTA في DMSO إلى الخليط المشع.

يعتمد المبلغ المضاف على عدد الموضوعات التي يتم اختبارها. السماح للحل لاحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. تحقق من اكتمال الايراد باستخدام الراديو instant-instant-thin-طبقة اللونية مع 50 ملليمولار EDTA pH 5.5 كمرحلة متنقلة.

وTeetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine المسمى سيبقى عند خط الأساس في حين أن Lutetium-177 الحرة سيتم تنسيقها من قبل EDTA والسفر مع الجبهة المذيبات. من المهم أن لا يتعارض وضع الأورام تحت الجلد مع تقنية ضبط النفس. أوصي بوضعها على الجانب الجناح الذي هو عكس يدك التقييد.

منذ أن كبحت مع يدي اليسرى لقد اخترت لوضع الأورام على الجناح الأيمن. فرز الفئران عارية الإناث مع سرطان القولون والمستقيم xenograph، بحيث متوسط حجم الورم في كل فوج يساوي تقريبا. للقيام بذلك، قم بإدراج أرقام تعريف الحيوان ونمط درجة الأذن وحجم الورم في ثلاثة أعمدة منفصلة لبرنامج جدول البيانات.

فرز البيانات من أصغر حجم الورم إلى أكبر حجم. في عمود رابع يعيّن كلّ قفص رقم. دورة من خلال الأقفاص في نمط يشبه ثعبان حتى يتم تعيين جميع الحيوانات قفص.

مرة واحدة يتم تعيين الأقفاص فرز البيانات عن طريق رقم القفص. لحقن جرعة السحب المناعية من 150 ميكرولترات من حل huA33-TCO في المحاقن المعالجة المسبقة مع 1٪ من الألبومات المصل البقرية في PBS، وتخزين هذه الحقن على الجليد. لحقن radioligand، أول سحب جرعات في 150 ميكرولترات من 0.9٪ ملحي عقيمة تحتوي على 1.1 معادلة المولر من Tetrazine-PEG7-DOTA ذات الاسم الإشعاعي نسبة إلى كمية huA33-TCO تدار.

استخدام الفرجار لقياس أطول جانب من ورم مستطيل، فضلا عن العرض الذي هو عمودي على طول. تزن كل الماوس على التوازن لتتبع زيادة الوزن أو فقدان الوزن على مر الزمن. وأخيراً، حساب وحدة التخزين باستخدام الصيغة لوحدة التخزين من الإهليلجي على افتراض أن الارتفاع يساوي تقريباً إلى العرض.

يظهر هنا هو التوزيع البيولوجي من في الجسم الحي pretargeting مع huA33-TCO وLutetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine في الفئران عارية athymic تحمل SW12222 تحت الجلد الأورام العنابر القولون والمستقيم الإنسان. جميع فترات الحقن تنتج تركيزات عالية النشاط في أنسجة الورم، فضلا عن تركيزات نشاط منخفض في الأجهزة السليمة. الفاصل الزمني حقن 24 ساعة يتيح أعلى امتصاص الورم في 120 ساعة بعد الحقن.

بناء على هذه النتائج تم اختيار فاصل زمني 24 ساعة لدراسة العلاج الطولي اللاحقة. يظهر هنا هو دراسة العلاج الطولي من خمس مجموعات من الفئران تحمل الأورام تحت الجلد SW1222 صورت في متوسط حجم الورم كدالة من الزمن، وحجم الورم تطبيعها إلى الحجم الأولي كدالة من الزمن. هناك فرق صارخ في استجابة الأفواج التجريبية بالمقارنة مع مجموعات التحكم.

في حين أن الأورام في الفئران تلقي عنصر واحد فقط من استراتيجية العلاج الإشعاعي المستهدفة مسبقا واصلت تنمو دون رادع، والأورام من الفئران تلقي كامل نظام العلاج الإشعاعي المستهدفة توقف النمو وتقلصت في نهاية المطاف. الأهم من ذلك، لم يلاحظ أي آثار جانبية سامة، وحافظت جميع الحيوانات على وزن في حدود 20٪ من كتلتها الأولية. ومن اللافت للنظر أن فئران الأفواج التجريبية كان لديها سجل مثالي للبقاء على قيد الحياة في نهاية التحقيق.

عند محاولة هذا الإجراء هو من الأهمية القصوى لقياس بدقة وتكرار للأورام. عند العمل مع النشاط الإشعاعي استشر مسؤول السلامة الإشعاعية في مؤسستك لتطوير بروتوكولات ومرافق آمنة. وجود ضوابط السلامة المناسبة في مكان الحد من التعرض الخاص بك وتجنب التلوث.

يوفر التوجيه المسبق جرعة إشعاعية أقل للأعضاء الخلفية من العلاج الإشعاعي التقليدي. ومن خلال مشاركة هذا البروتوكول، نأمل أن يتمكن الآخرون من اختبار نماذجهم وأفكارهم الخاصة التي من شأنها أن تؤدي إلى تقدم جديد ومثير لعلاج المرضى.