Name: تحديد معدل إخصاب البيض من حيث دراسة استخدام تقنية الخلوية الوراثية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 24 s
Description: اكتشف تقنية الخلوية الوراثية باستخدام صبغة DAPI لتحديد معدل إخصاب البيض عند ذبابة البيضاء Bemisia tabaci. هذه الطريقة تُكمل خلال ثلاث ساعات وتُحسّن فهم السلوك والبيئة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم تمويل هذا البحث بمنحه جبهة الخلاص الوطني (ديب-1020460) إلى M.S.H. ومنحة وزارة الزراعة أفري (2010-03752) إلى M.S.H. يشكر المؤلفون زيهر برينان لتلطيخ بيض الذبابة بقدر كبير من المهارة وزين. يشكر المؤلفون مايك ريلي للسماح باستخدام مجهر فلوري له للتصوير. يشكر المؤلفون سوزان كيلي وماركو جيبيولا للصور البيض. يشكر المؤلفون كيلي سوزان وجيمي كونواي للعون في اللحظات الحاسمة من خلال التجارب.

ملاحظة: التأكد من أن جميع الأعمال تتم في درجة حرارة الغرفة في منطقة جيدة التهوية، أو تحت غطاء دخان. يتم تعريف كافة 'قطرات' في هذا البروتوكول ك 5 – 20 ميليلتر، اعتماداً على تفضيل للمشغل.
1-الإعداد الأولى
<ol><li>السماح للنساء ويتيفليس أوفيبوسيت على أوراق نظيفة. وتشمل الأمثلة للساحات أوفيبوسيتيون أقفاص القصاصة أو يترك قطع لتناسب في أجار في طبق بتري. جعل حفرة تغطيها في قفص القصاصة أو غطاء صحن بيتري إدراج وإزالة الكبار. وبدلاً من ذلك، وضع سفينة التي تم جمعها من الكبار بسرعة على الجليد، وثم إيداعها على الورقة. يحدد الوقت الذي بين أوفيبوسيشن والتثبيت البيض أن لا يزيد عن 60 دقيقة، لضمان مراقبة انتقال الحيوانات المنوية إلى برونوكليوس الأب في البيض. ملاحظة: يمكن تربيتها البيض لا إزالتها من الورقة إلى سن البلوغ لتسجيل النسب بين الجنسين البالغين.</li>
	<li>قبل أو أثناء أوفيبوسيشن الذبابة، إعداد شريحة مجهر بتنظيفه بالصابون والماء، تجفيف أنها جيدا ومن ثم تمتد قطعة من الفيلم البارافين نهاية واحدة، مع التأكد من عدم كسر سطح الفيلم البارافين (الشكل 1). ملاحظة: الفيلم البارافين مسعور والسماح للسوائل بشكل قطرات شبه معتمة، والبيض وأن ينظر إليها بسهولة أكبر.</li>
</ol>2-ديتشوريونيشن
<ol><li>مع زجاج باستور "الماصة؛"، إضافة قطرات من التبييض الحل (0.83% هيبوكلوريت الصوديوم) للفيلم البارافين. ملاحظة: أنه من الأسهل لتتبع البيض إلا إذا كان البيض 2-3 في كل قطره. وبدلاً من ذلك، لإدارة عدد كبير من بيض، جمع البيض في قطرات 1 × مخزنة الفوسفات المالحة (PBS). تنبيه: التبييض التآكل؛ ارتداء القفازات عند التعامل مع التبييض ولا يستنشق.</li>
	<li>إزالة ويتيفليس الكبار من الورقة.</li>
	<li>ضع ورقة تحت مجهر لرؤية البيض بوضوح وجمع البيض منفردة وعناية بتحقيق رقيقة. لإجراء تحقيق، أدخل pin نادل دقيقة في 45°، أو بزاوية عمل مريحة في تلميح ماصة المذابة (الشكل 2).</li>
	<li>نقل البيض للتبييض أو برنامج تلفزيوني 1 x. في حالة استخدام برنامج تلفزيوني x 1، قم بإزالة x 1 برنامج تلفزيوني مع كوب باستور "الماصة؛" مرة واحدة كل ما يتم جمع البيض، وثم إضافة التبييض للبيض. ملاحظة: عند جمع البيض، ببطء رفع البيض من قاعدته حتى تتم إزالة في عنيقة من الورقة. عنيقة لزجة، والبيض عادة سوف تتمسك بنصيحة التحقيق حتى أنه هو انخفض إلى المبيض. ملاحظة: ينصح باستخدام الزجاج منفصلة باستور الماصات لجميع المواد الكاشفة، ويمكن تعديله الماصات مع الحرارة لجعل النصائح أضيق والحد من خطر يسفط بيض الذبابة بطريق الخطأ. لمنع التلوث والمخلفات، تنظيف الممصات بالمياه بعد كل استعمال.</li>
	<li>انتظر لمدة 10 دقائق. إذا لم يكن هناك مصلحة في امبريوجينيسيس في البيض أقدم من ح 1، ترك البيض في التبييض لمدة تصل إلى 15 دقيقة. ملاحظة: للبيض أن ما يصل إلى 1 س القديمة، 10 دقيقة كافية.</li>
</ol>3-التثبيت
ملاحظة: يتم اتخاذ هذه الخطوات من بروتوكول هيمينوبتيران17.
<ol><li>إزالة المبيض (التي تحتوي على أجزاء المشيمة) مع كوب ماصة باستور وتجاهل ذلك. أضف قطرات حمض الخليك الجليدية مع كوب باستور "الماصة؛" وانتظر 3 دقائق. تنبيه: المضي قدما في هذه الخطوة تحت غطاء دخان. حمض الخليك الجليدية التآكل؛ ارتداء القفازين عند التعامل مع حمض الخليك الجليدية ولا يستنشق، لا سيما في تركيبة مع التبييض المتبقية.</li>
	<li>إزالة حمض الخليك الجليدية مع كوب ماصة باستور وإضافة قطرات حل كلارك (3:1 إيثانول المطلقة: حمض الخليك الجليدية) مع كوب باستور "الماصة؛". الانتظار حتى يتبخر معظم الحل (أو 10 دقائق كحد أقصى).</li>
	<li>إضافة قطرات الإيثانول 70% للبيض مع الزجاج ماصة باستور والانتظار حتى يتبخر معظم الإيثانول (أو ماكس 10 دقيقة).</li>
</ol>4-التلوين
<ol><li>إزالة أي الإيثانول المتبقية مع كوب ماصة باستور وإضافة قطرات من س 1 برنامج تلفزيوني للبيض مع كوب ماصة باستور للحصول على درجة الحموضة قريبة من 7.0. تعيين الشريحة المجهر في غرفة رطوبة لمنع الجفاف، على سبيل المثال، في مربع تلميح ماصة فارغة مع منشفة ورقية مبللة داخل (الشكل 3). انتظر 30 دقيقة على الأقل. ملاحظة: هذا هو أفضل نقطة إذا كانت هناك حاجة إلى وقفه، ما دام دائرة الرطوبة يمكن أن يمنع جفاف.</li>
	<li>إزالة برنامج تلفزيوني 1 x مع كوب ماصة باستور، وإضافة قطرات من 0.1 ميكروغرام/مل DAPI، وصمة عار فلورسنت الحمض النووي، ومع كوب باستور "الماصة؛". تعيين الشريحة المجهر في غرفة مظلمة رطوبة والانتظار 15 دقيقة على الأقل. تنبيه: DAPI مصدر إزعاج، وحتى التعامل معها مع القفازات.</li>
</ol>5-الغسيل
<ol><li>إزالة DAPI مع كوب ماصة باستور.</li>
	<li>إضافة قطرات 1 x TBST (5 x الحل مصنوعة من 43.8 غرام من كلوريد الصوديوم و 5 مل من بوليسوربيت 20، 30 جرام تريس وز 1.0 من نان3 [الرقم الهيدروجيني 7.5]، وأحضر إلى 1 لتر مياه الصف PCR) للبيض مع كوب باستور "الماصة؛". الانتظار مدة 5 دقائق قبل إزالة 1 x TBST مع كوب ماصة باستور. كرر هذه الخطوة 2 مرات.</li>
</ol>6-تركيب
<ol><li>بعد الغسيل النهائي، بعناية "الماصة؛" كل البيض من البارافين الفيلم على جزء نظيف من الشريحة المجهر. إزالة الزائدة 1 x TBST؛ ثم قم بإضافة 20 ميليلتر من تركيب وسائط (والغليسيرول 80% و 20% 1 x TBST مع 2% n-بروبيل-يبيغاللوكاتيشين) ووضع شريحة نظيفة غطاء فوق البيض.</li>
	<li>للتخزين على المدى الطويل، ختم غطاء الشريحة مع طلاء الأظافر واضحة، ثم، أما تخزين الشريحة في الظلام عند 2 درجة مئوية أو مشاهدته فورا تحت مجهر فلوري.</li>
</ol>

<ol><li>Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCharnov%2C+EL+%22The+Theory+of+Sex+Allocation%22">The Theory of Sex Allocation</a>. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).</li>
<li>Godfray, H. C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGodfray%2C+HCJ+%22Parasitoids%3A+behavioral+and+evolutionary+ecology%22">Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology</a>. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).</li>
<li>Bourke, A. F. G., Franks, N. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBourke%2C+AFG+%22Social+Evolution+in+Ants%22">Social Evolution in Ants</a>. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1995).</li>
<li>Pascal, S., Callejas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-+and+interspecific+competition+between+biotypes+B+and+Q+of+Bemisia+tabaci+%28Hemiptera%3A+Aleyrodidae%29+from+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Intra- and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) from Spain.</a> Bulletin of Entomological Research. 94 (4), 369-375 (2004).</li>
<li>Liu, S. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+mating+interactions+drive+widespread+invasion+and+displacement+in+a+whitefly%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Asymmetric mating interactions drive widespread invasion and displacement in a whitefly.</a> Science. 318 (5857), 1769-1772 (2007).</li>
<li>Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+discrimination+in+invasive+whitefly+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mate discrimination in invasive whitefly species.</a> Journal of Insect Behavior. 23 (5), 364-380 (2010).</li>
<li>Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+in+mating+behaviour+drives+asymmetric+reproductive+interference+in+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Plasticity in mating behaviour drives asymmetric reproductive interference in whiteflies.</a> Animal Behaviour. 79 (3), 579-587 (2010).</li>
<li>Tsueda, H., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+differences+between+Q+and+B+whiteflies%2C+Bemisia+tabaci%2C+on+three+host+plants+and+negative+interactions+in+mixed+cohorts%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Reproductive differences between Q and B whiteflies, Bemisia tabaci, on three host plants and negative interactions in mixed cohorts.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 141, 197-207 (2011).</li>
<li>Wang, P., Crowder, D. W., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+mating+behavioural+interactions+and+life+history+traits+in+the+competition+between+alien+and+indigenous+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of mating behavioural interactions and life history traits in the competition between alien and indigenous whiteflies.</a> Bulletin of Entomological Research. 102 (4), 395-405 (2012).</li>
<li>Sun, D. -B., Li, J., Liu, Y. -Q., Crowder, D. W., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reproductive+interference+on+the+competitive+displacement+between+two+invasive+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of reproductive interference on the competitive displacement between two invasive whiteflies.</a> Bulletin of Entomological Research. 104 (3), 334-346 (2014).</li>
<li>Liu, S. -S., Colvin, J., De Barro, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species+concepts+as+applied+to+the+whitefly+Bemisia+tabaci+systematics%3A+how+many+species+are+there%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Integrative+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: how many species are there?</a> Journal of Integrative Agriculture. 11 (2), 176-186 (2012).</li>
<li>Invasive Species Specialist Group. Global Invasive Species Database. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php">http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php</a> (2018).</li>
<li>Gilbertson, R. L., Batuman, O., Webster, C. G., Adkins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+insect+supervectors+Bemisia+tabaci+and+Frankliniella+occidentalis+in+the+emergence+and+global+spread+of+plant+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Role of the insect supervectors Bemisia tabaci and Frankliniella occidentalis in the emergence and global spread of plant viruses.</a> Annual Review of Virology. 2 (1), 67-93 (2015).</li>
<li>Giorgini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rickettsia+symbionts+cause+parthenogenetic+reproduction+in+the+parasitoid+wasp+Pingala+soemius+%28Hymenoptera%3A+Eulophidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rickettsia symbionts cause parthenogenetic reproduction in the parasitoid wasp Pingala soemius (Hymenoptera: Eulophidae).</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2589-2599 (2010).</li>
<li>Himler, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+spread+of+a+bacterial+symbiont+in+an+invasive+whitefly+is+driven+by+fitness+benefits+and+female+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias.</a> Science. 332 (6026), 254-256 (2011).</li>
<li>Cass, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+endosymbiont+Rickettsia+in+an+insect+pest%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Ecology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the endosymbiont Rickettsia in an insect pest.</a> Microbial Ecology. 70 (1), 287-297 (2015).</li>
<li>Vavre, F., de Jong, J. H., Stouthamer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytogenetic+mechanism+and+genetic+consequences+of+thelytoky+in+the+wasp+Trichogramma+cacoeciae%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Cytogenetic mechanism and genetic consequences of thelytoky in the wasp Trichogramma cacoeciae.</a> Heredity. 93 (6), 592-596 (2004).</li>
<li>Cass, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+fitness+benefits+of+the+Rickettsia+bacterial+symbiont+in+an+insect+pest%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Conditional fitness benefits of the Rickettsia bacterial symbiont in an insect pest.</a> Oecologia. 180 (1), 169-179 (2016).</li>
<li>Hunter, M. S., Asiimwe, P., Himler, A. G., Kelly, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+nuclear+genotype+influences+phenotype+of+a+conditional+mutualist+symbiont%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Host nuclear genotype influences phenotype of a conditional mutualist symbiont.</a> Journal of Evolutionary Biology. 30, 141-149 (2017).</li>
<li>Gottlieb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+intracellular+ecosystem%3A+symbiotic+bacteria+share+bacteriocytes+in+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Inherited intracellular ecosystem: symbiotic bacteria share bacteriocytes in whiteflies.</a> FASEB Journal. 22 (7), 2591-2599 (2008).</li>
<li>Luan, J., Sun, X., Fei, Z., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+inheritance+of+a+single+somatic+animal+cell+displayed+by+the+bacteriocyte+in+the+whitefly+Bemisia+tabaci%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Maternal inheritance of a single somatic animal cell displayed by the bacteriocyte in the whitefly Bemisia tabaci.</a> Current Biology. 28 (3), 459-465 (2018).</li>
<li>Guo, J. -Y., Cong, L., Wan, F. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+generation+effects+of+high+temperature+on+the+development+and+fecundity+of+Bemisia+tabaci+%28Gennadius%29+%28Hemiptera%3A+Aleyrodidae%29+biotype+B%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Multiple generation effects of high temperature on the development and fecundity of Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae) biotype B.</a> Insect Science. 20 (4), 541-549 (2013).</li>
<li>Cui, X., Wan, F., Xie, M., Liu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heat+shock+on+survival+and+reproduction+of+two+whitefly+species%2C+Trialeurodes+vaporariorum+and+Bemisia+tabaci+biotype+B%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of heat shock on survival and reproduction of two whitefly species, Trialeurodes vaporariorum and Bemisia tabaci biotype B.</a> Journal of Insect Science. 8 (24), (2008).</li>
<li>Boykin, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bemisia+tabaci+nomenclature%3A+Lessons+learned%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Bemisia tabaci nomenclature: Lessons learned.</a> Pest Management Science. 70 (10), 1454-1459 (2014).</li>
<li>Qin, L., Pan, L. -L., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+insight+into+reproductive+incompatibility+between+putative+cryptic+species+of+the+Bemisia+tabaci+whitefly+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Further insight into reproductive incompatibility between putative cryptic species of the Bemisia tabaci whitefly complex.</a> Insect Science. 23 (2), 215-224 (2016).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

هذا البروتوكول هو الأول من التقاط معدل الإخصاب أو نسبة الجنس الأولية من حيث (ب). التحدي المتمثل في هذا البروتوكول أنه يتطلب الباحثين لمعرفة كيفية التعامل مع البيض الذبابة بسرعة وضمان أن لا أكثر من ح 1 انقضى منذ كانت أوفيبوسيتيد البيض حتى أنها ثابتة. أثناء تجارب أولية، البيض التي تم إصلاحها في ح 3 أو أكثر بوستوفيبوسيشن كانت قديمة جداً لمراقبة الإخصاب، كما قد حدث سينجامي وانقسامات فتيلية جارية. بين 1 إلى 3 ح، أخذت برونوكلي على شكل مستدير. بينما يشير إلى الوجود المبكر هما نواة البويضة مخصبة، قليلاً في وقت لاحق، بدل...

دراسة تخصيص الجنس أو الاستثمار النسبي في نسل الذكور والإناث، حجر زاوية في الإيكولوجيا السلوكية1،،من23. بالإضافة إلى قوتها لاختبار نماذج التكيف للسلوك، يمكن أن يحسن معرفة استراتيجية تخصيص الجنس كائن نماذج في ديناميات السكان. في كثير من الأنواع، وتخصيص الجنس يسيطر الأمهات. لتحديد تخصيص الجنس، من المهم تحديد نسبة الجنس الأساسي أو نسبة الإناث في وقت ترسب البيض. وفيات الإنمائية التفاضلية بين الأحداث من الذكور والإناث على الرغم من أن نسبة الجنس عند ظهور الكبار قد توفر أدلة على تخصيص الجنس، قد يشيع تحرف نسبة الجنس الكبار إلى حد كبير. في بعض الأنواع من غشائيات الأجنحة، ترتيب الحشرات يحتوي على النمل والنحل والزنابير، وقد تحدد نسبة الجنس الأولية مع فحوصات الخلوية الوراثية، تلطيخ الأجنة لعرض الحمض النووي الوراثي. لأن هيمينوبتيرانس هابلوديبلويد، بيض ذكور وليدة فرداني ويحتوي على برونوكليوس الإناث فقط (ن)، بينما البيض أنثى وليدة مثنوية وتحتوي على برونوكلي من الذكور والإناث (2n). على الرغم من أن الييروديداي، الأسرة ساب-تغذية صحيح الأخطاء (Hemiptera) المعروفة باسم ويتيفليس، أيضا هابلوديبلويد، هناك لم يكن مقايسة الراسخة العثور على نسبة الجنس الأساسي في هذه الحشرات. هذا ربما يثير الدهشة نظراً لكثافة دراسة الآفات الخطيرة عالمية قليلة في هذه الأسرة وأهمية النسب بين الجنسين في التفاعلات التنافسية ويتيفليس4،،من56،7 ،،من89،10 وديناميات السكان عموما. في الحشرات هابلوديبلويد جداً، يقيد النسب بين الجنسين بنظم تحديد الجنس، مما يتيح إمكانية الإخصاب انتقائية ومجا النسب بين الجنسين التي تختلف مع البيئة2. هنا نقدم تقنية لتحديد نسبة الجنس الأولية من الأنواع المعقدة المعروفة كالذبابة البطاطا، ويتيفليس حيث. هذا اسم واحد من الأنواع يشمل الأنواع في العالم أكثر من 2811ويتضمن بعض من ال12،الآفات الدخيلة العالمية13الأكثر ضررا. تطبيق هذه التقنية على تحديد أنماط تخصيص الجنس حيث (ب) وأخرى الييروديداي سيتيح إجراء تحقيق أكثر صرامة من المتغيرات، بما في ذلك درجة حرارة النبات المضيف، والبكتيريا اندوسيمبيوتيك أو النباتية/الذبابة مسببات الأمراض، التي قد تؤثر على النسب بين الجنسين الابتدائي الذبابة والديناميات السكانية الذبابة.
ونحن غير مدركين لأي تقنيات تلوين البيض مماثلة حيث. البروتوكول مناسب بالمقارنة مع المصبوغة الأساليب المستخدمة ل بيض الحشرات الأخرى14 كما يحذف خطوة تثبيت بين عشية وضحاها، وعليه، يمكن أن تنجز في غضون ح 3. وكمثال على تطبيق، وبكتيريا اندوسيمبيوتيك، الريكتسية sp. nr. بيلي، يرتبط بالتحيز الإناث في خطوطنا المختبر حيث باء- 1 ثانوية الشرق الأوسط وآسيا (MEAM1)15،16. في MEAM1 حيث باء- مختبر سطر واحد ("MAC1،" التي تم جمعها من مركز الزراعية ماريكوبا)، نقوم باختبار ما إذا كان الريكتسية-تسميد المصابة (R+) الإناث البيض أكثر من الإناث (R–) غير مصاب.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x TBST</td><td>أي</td><td></td><td>محلول 5x مصنوع من 30 جم تريس ، 43.8 جم كلوريد الصوديوم ، 5 مل توين -20 و 1.0 جم NaN3 درجة الحموضة 7.5 ، ويتم إحضارها إلى 1 لتر مع ماء بدرجة PCR</td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Clorox</td><td></td><td>سيعمل أي مبيض منزلي طالما يمكن تخفيفه إلى 0.83٪ هيبوكلوريت الصوديوم</td></tr><tr><td>طلاء أظافر شفاف</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI ثنائي اللاكتات</td><td>سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية</td><td>sc300415</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول</td><td>أي</td><td></td><td>مخفف إلى 70٪ EtOH</td></tr><tr><td>مجهر فلوري</td><td>نيكون</td><td></td><td>نيكون Eclipse 50i تم استخدامه في هذه التجربة ، ولكن يمكن استخدام أي مجهر فلوري مع مرشح إثارة 340/380 نانومتر وتكبير 4-10x على الأقل يمكن استخدامه</td></tr><tr><td>حمض الخليك الجليدي</td><td>Mallinckrodt</td><td>UN2789</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td>تم استخدام <td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td> مجهر <td>Wild</td><td></td><td>A Wild M5A في هذه التجربة ، ولكن يمكن استخدام أي مجهر حيث يمكن للمشغل رؤية بيض الذبابة البيضاء بوضوح</td></tr> ، <tr><td>وأغطية شرائح المجهر</td> ، <td>أي</td><td></td><td>طرق لأغطية شرائح بحجم 18 مم × 18 مم. ستحتاج إلى إضافة المزيد من وسائط التركيب لأغطية الشرائح الأكبر.</td></tr><tr><td>شرائح المجهر أي</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>دبابيس Minuten nadel</td><td>BioQuip</td><td>1208SA</td><td>دبابيس Minuten nadel اختيارية للتشكيل كمجسات مع أطراف ماصة</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td></td><td></td><td></td></tr>أي <tr><td>n-propyl-gallate</td><td>Sigma / Santa Cruz Biotechnology</td><td>P3130 / sc-250794</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td> ماصات <td>بيميس</td><td></td><td></td></tr><tr><td>باستور</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>13-678-20A</td><td>فيشربراند ماصات باستور زجاجية يمكن التخلص منها 5.75 بوصة. قد تكون هناك حاجة أيضا إلى موقد بنسن إذا كان المشغل يرغب في إطالة وتضييق الماصات</td></tr><tr><td>من درجة الماء من فئة PCR</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أطراف ماصة</td><td>أي</td><td></td><td>أطراف ماصة اختيارية للتشكيل كمجسات مع دبابيس دقيقة</td></tr><tr><td>لمبة قطارة صغيرة</td><td>أي</td> يجب أن <td></td><td>تتناسب مع ماصة باستور</td></tr><tr><td>تريس</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>توين -20</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

تحديد "معدل إخصاب البيض" من حيث دراسة استخدام "تقنية الخلوية الوراثية"

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

أنواع قليلة من مص ساب ويتيفليس هي بعض من الآفات الأرضية الأكثر ضررا في العالم بسبب أنها تلحق الضرر المحاصيل وفيروسات النباتات أنها متجهة. على الرغم من العديد من الدراسات لعلم الأحياء من هذه الأنواع في البيئات المختلفة، معلمة تاريخ حياته رئيسية، ذرية النسب بين الجنسين، تلقي اهتماما قليلاً، وهو بعد هام للتنبؤ بالديناميات السكانية. نسبة الجنس الأولية (نسبة الجنس في أوفيبوسيشن) من حيث دراسة قط أبلغ ولكن يمكن العثور عليها بتحديد معدل إخصاب البيض من هذه الحشرة هابلوديبلويد. الأسلوب الذي ينطوي على ديتشوريونيشن البيض مع التبييض، وسلسلة من خطوات التثبيت، والتطبيق العام الحمض النووي الفلورسنت وصمة عار، DAPI (4، 6-دياميدينو-2-فينيليندولي، وصبغة فلورسنت الحمض النووي ملزم)، لربط برونوكلي الذكور والإناث. نقدم هنا، التقنية، ومثالا لتطبيقه، اختبار ما إذا كان بكتيريا اندوسيمبيوتيك، الريكتسية sp. nr. بيلي، تتأثر نسبة الجنس الأولية من حيث (ب). قد يساعد هذا الأسلوب في الدراسات السكانية من ويتيفليس، أو في تحديد ما إذا كان يوجد تخصيص الجنس مع بعض المحفزات البيئية.

لاختبار ما إذا كان الريكتسية يؤثر معدل الإخصاب حيث MEAM1 الإناث، نحن تربى الريكتسية-إصابة (R+) أو وقاية (R–) حيث (ب) على نباتات اللوبيا (Vigna unguiculata) في فصل أقفاص في 27 درجة مئوية ورطوبة نسبية 70% من ضوء/8 ح 16 ح كبيرة مظلمة. R+ ويتيفليس الطور الرابع ص– بعناية إزالة من أوراق ومعزولة في 200 ميليلتر قطاع أنابيب. عندما ظهرت الكبار، أنها جمعت في مجموعات من الإناث 50% ونقل إلى أوراق نظيفة في أطباق بت...

نقدم تقنية الخلوية الوراثية بسيطة باستخدام 4, 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) لتحديد معدل الإخصاب والابتدائي نسبة الجنس من الآفات هابلوديبلويد الغازية حيث دراسة.

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

البروتوكول الذي وضعته (ليز) يسمح لنا بتحديد معدل الإخصاب بالرفف الأبيض تطبيق هذه التقنية سوف يحسن فهمنا لسلوك وإيكولوجيا الذباب الأبيض. الذباب الأبيض هي haplodiploid، وبالتالي فإن معدل الإخصاب يساوي نسبة الجنس في oviposition.هذا البروتوكول هو أول وصف للذباب الأبيض ، على حد علمنا ، ويمكن الانتهاء منه في غضون ثلاث ساعات. للبدء، جعل حفرة قابلة للغطاء في غطاء طبق بيتري لإدراج وإزالة الذباب الأبيض الكبار. قم بإعداد غرفة الرطوبة وأزياء مسبار عن طريق إدخال دبوس رفيع في زاوية عمل مريحة في طرف ماصة ذائبة لجعل مسبار رقيق.اختياريا، نصائح الماصات الزجاج المائل مع الحرارة لتسهيل التعامل مع بيضرفل الأبيض. ثم، السماح للذباب الأبيض الإناث لoviposit على ورقة نظيفة، وقطع لتناسب على أجار في طبق بيتري. خلال oviposition الfly، تنظيف شريحة المجهر مع الصابون والماء.جففه جيدا وتمتد قطعة من فيلم البارافين على نهاية واحدة للسماح للسوائل لتشكيل قطرات والبيض أن ينظر إليه بسهولة أكبر. لإزالة البيض، استخدم ماصة باستور الزجاجية لإضافة قطرات من محلول تبييض هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 83٪ إلى فيلم البارافين قبل إزالة الكبار وجمع البيض. التبييض وحمض الخليك الجليدي كلاهما تآكل.وينبغي التعامل معها مع قفازات في غطاء محرك السيارة أو منطقة جيدة التهوية. DAPI هو أيضا مهيجة وينبغي التعامل معها مع قفازات. ثم، إزالة الذباب الأبيض الكبار من ورقة ووضع ورقة تحت المجهر.رفع بعناية كل بيضة من قاعدتها حتى تتم إزالة pedicel من ورقة. ممارسة على العديد من البيض قبل تنفيذ هذا البروتوكول. رفع البيض ببطء من القاعدة ورفعه تماما من ورقة بمجرد أن تتمكن من رؤية أن يتم إزالة pedicel البيض من ورقة.نقل اثنين إلى ثلاثة بيضات إلى كل قطرة من التبييض وتركها لمدة 10 دقائق. لإصلاح البيض، استخدم ماصة زجاجية لتجاهل التبييض. ثم، إضافة قطرات من حمض الخليك الجليدية وانتظر ثلاث دقائق.بعد ذلك، إزالة حمض الخليك الجليدية وإضافة قطرات من حل كلارك. ثم انتظر 10 دقائق حتى تبخر معظم الحل. إضافة قطرات من 70٪ الإيثانول وانتظر مرة أخرى لمدة 10 دقائق.لتلطيخ البيض، أولا إزالة أي الإيثانول المتبقية. ثم، إضافة قطرات من 1xPBS إلى البيض للحصول على ما يقرب من 7. وضع شريحة المجهر في غرفة الرطوبة لمنع جفاف.بعد 30 دقيقة، قم بإزالة 1xPBS وأضف قطرات من 1 ميكروغرام لكل ملليلتر DAPI. ضع شريحة المجهر في غرفة رطوبة داكنة وانتظر 15 دقيقة على الأقل. لغسل البيض، قم أولاً بإزالة محلول DAPI.ثم تضاف قطرات من 1xTBST إلى البيض. بعد خمس دقائق، قم بإزالة 1xTBST. كرر هذا غسل مرتين أكثر من ذلك لما مجموعه ثلاثة يغسل.بعد الغسيل النهائي، ماصة بعناية جميع البيض من parafilm على جزء نظيف من شريحة المجهر. إزالة TBST الزائدة وإضافة 20 ميكرولترات من تصاعد وسائل الإعلام. وأخيراً، ضع شريحة غطاء نظيفة فوق البيض، وختم شريحة الغطاء بطلاء أظافر واضح للتخزين على المدى الطويل، واشرع في التصوير باستخدام مجهر فلوري.سمح تدنيس البيض الذي يليه التلطيخ النووي DAPI بتخصيص الإخصاب والجنس الجنيني عندما لوحظ مع مجهر فلوري. الأنثى البرونوي بالقرب من مركز كل من البويضة الأنثوية المخصبة وبيضة الذكور غير المخصبة، والحيوانات المنوية مرئية كطنس مشرق بالقرب من قمة البويضة الأنثوية فقط. أحد تطبيقات هذه التقنية هو تحديد ما إذا كان الإندوسومبيونات البكتيرية تؤثر على نسب الجنس الأولية للذباب الأبيض.على سبيل المثال، لم تظهر النسب الأساسية للجنس من البيض التي وضعتها ريكيتسيا المصابة وغير المصابة بالأبيض B.tabici أي فرق كبير بين نسبة الجنس في العلاجين. أما بالنسبة للبويضات التي تربى حتى سن البلوغ، فقد شوهدت نتائج مماثلة للبالغين المصابين بالريكتسيا وغير المصابين، ولم تقدم أي دليل، على الأقل في هذه الدراسة، على معدلات تخصيب أكبر من قبل الإناث المصابات بالريكتسيا. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن للمرء تحديد ما إذا كان يمكن للحيوانات المنوية بين خصوصية تخصيب البويضات.إذا لم يلاحظ أي تخصيب، يمكن للمرء أن احتياطي ونتطلع لمعرفة ما إذا كان يتم نقل الحيوانات المنوية أثناء التزاوج من خلال النظر في الحيوانات المنوية للأنثى. وإذا حدث الإخصاب، يمكن مقارنة نسبة البالغين بين الجنسين ومعدل الإخصاب لتحديد جدوى نمو النسل الهجين.

determining-egg-fertilization-rate-bemisia-tabaci-using-cytogenetic

Research

JoVE Journal

Genetics

علم الوراثة

الفرق الحيوانات المنوية القدرة التنافسية...

تقييم الاختلافات في القدرة التنافسية في الحيوانات المنوية<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

هنا، نقدم بروتوكول لعزل إندوسيمبيونتس من الذبابة البيضاء بيميسيا تاباسي من خلال تشريح والترشيح. بعد التضخيم، عينات الحمض النووي هي مناسبة لتسلسل لاحق ودراسة التبادلية بين إندوسيمبيونتس والذبابة البيضاء.

طرق استخراج إندوسيمبيونتس من الذبابة البيضاء<em&gt; بيميسيا تاباسي</em

السماح بالتحديد الكمي لمصادر ومعدلات الوفيات في السكان الحشرات جداول الحياة والإسهام في الفهم والتنبؤ ومعالجة الديناميات السكانية في النظم الإيكولوجية الزراعية. وترد أساليب لإجراء وتحليل الجداول المستندة إلى فوج الحياة في الحقل لحشرة مع مراحل الحياة غير ناضجة لاطئة.

منهجية "وضع جداول الحياة" "الحشرات لاطئة" في "الحقل باستخدام" الذبابة،، حيث دراسةفي "القطن كنموذج النظام"

لتقارير هذه الورقة البروتوكول المتعلق مقايسة التعرف سريع حيث دراسة تستند إلى تقنية التضخيم متحاور بوساطة حلقة (المصباح). البروتوكول يتطلب التدريب المختبري الحد الأدنى، ويمكن، لذلك، تنفيذ في الموقع عند نقاط الدخول للواردات النباتية مثل الموانئ والمطارات.

مقايسة متحاور تضخيم (مصباح) بوساطة حلقة "التعرف السريع على" دراسة حيث

في هذا البروتوكول، ويرد وصف أساليب إجراء الاستيلاد الصلبان، وتقييم مدى نجاح تلك الصلبان، للنمل عمري فولينهوفيا. هذه البروتوكولات هامة لإجراء تجارب تهدف إلى فهم الأساس الجيني لنظم تحديد الجنس في غشائيات الأجنحة.

الاستقراء والتقييم من الصلبان الاستيلاد استخدام النمل، عمري فولينهوفيا

الموصوفة هي طريقة لتوفير الوقت والمكان لحساب البيض وتحديد معدلات فقس البعوض الفردية باستخدام 24 لوحات زراعة أنسجة الآبار، والتي يمكن أن تزيد بشكل كبير من حجم وسرعة البراز والخصوبة المقايسات.

تحسين Fecundity والخصوبة المقايسة لAedes aegypti باستخدام 24 لوحات زراعة أنسجة البئر (لوحات EAgaL)

هنا، نقدم بروتوكولا لدراسة القدرة التنافسية التزاوج من الذكور Aedes aegypti باستخدام صبغة الفلورسنت كعلامة. وتتعرض البعوض الإناث للذكور على حد سواء ملحوظ وغير ملحوظ لcopulation. بعد التزاوج ، يتم فحص الحيوانات المنوية تحت المجهر الفلوري لتحديد شريكهم في التزاوج.

باستخدام صبغة الفلورسنت، رودامين B، لدراسة القدرة التنافسية التزاوج في الذكور Aedes aegypti البعوض

يصف هذا البروتوكول طريقة تربية حشرات الآفات التورتسيد في المختبرات. يتم تحديد إجراءات التمييز بين جنس الحشرات واستخراج الأحماض النووية لتسلسل الإنتاجية العالية باستخدام آفتين ممزقتين.

التربية الجماعية والدراسات الجزيئية في حشرات آفات Tortricidae

هنا ، نقدم طريقة عامة لتحديد الصلاحية الجنينية والعدد الإجمالي للأجنة المنتجة (الحضنة) باستخدام الكائن الحي النموذجي C. elegans.

قياس الصلاحية الجنينية وحجم الحضنة في Caenorhabditis elegans

يصف هذا البروتوكول كيفية قياس بيانات معلمات الحياة الشائعة في بعوض الزاعجة المصرية ، بما في ذلك الخصوبة ، وحجم الجناح ، والخصوبة ، ونسبة الجنس ، والقدرة على البقاء ، وأوقات النمو ، ومساهمة الذكور ، وطول عمر البالغين. يمكن استخدام هذه القياسات لتقييم لياقة البعوض المعدل وراثيا.

القياس الكمي لتكاليف اللياقة البدنية في بعوض الزاعجة المصرية المعدلة وراثيا

يصف هذا البروتوكول تداخل الحمض النووي الريبي ومقايسة ChIP لدراسة الوراثة اللاجينية للإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي وتعديلات الكروماتين المرتبطة به في C. elegans.

تحليل الوراثة اللاجينية عبر الأجيال في C. elegans باستخدام مراسل الفلورسنت والترسيب المناعي للكروماتين (ChIP)

اكتشف تقنية الخلوية الوراثية باستخدام صبغة DAPI لتحديد معدل إخصاب البيض عند ذبابة البيضاء Bemisia tabaci. هذه الطريقة تُكمل خلال ثلاث ساعات وتُحسّن فهم السلوك والبيئة.

تحديد "معدل إخصاب البيض" من حيث دراسة استخدام "تقنية الخلوية الوراثية"

استكشف المزيد من الفيديوهات