نموذج واجهة دماغ دم البشري لدراسة نقاط عبور الحاجز بمسببات الأمراض أو الأدوية وتفاعلاتها مع الدماغ

هذا الدم البشري في الدماغ نموذج واجهة مفيدة لدراسة نقل الجزيئات في النظام العصبي. وكذلك لدراسة الميكروبات تصل إلى ورم ألم الدماغ المصاب. إضافة الدماغ المصغرة إلى هذا حاجز الدم في الدماغ أو نموذج BBB يسمح لدراسة مسببات الأمراض لدينا والجزيئات التي تسبب BBB تتصرف في الدماغ.

سيكون إجراء الدكتوراه هو فلوريان باكاو، طالب الدكتوراه لمختبري. لإعداد BBB مصغرة غشاء البوليستر الدماغ ثقافة إدراج الجهاز، وتمييع الخلايا إلى خمس مرات 10 إلى الخلايا الرابعة لكل إدراج تركيز الخلايا البطانية غير مكتملة المتوسطة وإضافة الحجم المناسب من الخلايا إلى كل ثقافة غشاء البوليستر إدراج في لوحة 12 بئر. ثم ضع إدراج وحاضنة ثقافة الخلية حتى تصل الخلايا إلى 100٪ التقاء.

عقد لوحة 12 جيدا مع ملليلتر واحد من بولي دي ليسين لها جيدا لمدة أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة. تليها ملليلتر واحد من اللامينين في كل ليلة. استبدال laminin مع ملليلتر واحد من متوسطة الخلية البطانية تكملها 5٪ مصل البقر الجنين، أو FBS.

ضع المكان في حاضنة لمدة ساعة واحدة. لإعداد الحبوب المصغرة برفق تبسينيزي الخلايا العصبية البشرية في استنساخ CHME خمس خلايا. إقران الكريات الخلية مع خلية بطانةية كاملة المتوسطة.

بعد عد في 3.6 مرات 10 إلى الخلايا العصبية الخامسة والخلايا الفلكية إلى 0.4 مرات 10 إلى استنساخ CHME الخامس خمس خلايا في بئر لديها 12 لوحة جيدا. وبذر لوحة 12 جيدا. لبناء الدماغ مصغرة BBB 24 ساعة بعد البذر استبدال المتوسطة المستخدمة مع خلية بطانة كاملة جديدة المتوسطة ونقل الخلايا البطانية الأوعية الدموية الدقيقة الدماغية المغلفة البوليستر ثقافة الغشاء إدراج على خلايا الدماغ المصغرة.

ثم، ضع جهاز الدماغ BBB العديد في الحاضنة. للتحقق من صحة نفاذية الدماغ البطانية مصغرة BBB إضافة 1.5 ملليلتر من مخزن النقل في بئر إلى لوحة جديدة 12 جيدا. والوجه كل مرشح رأسا على عقب لإزالة بعناية المتوسطة دون التأثير على حاجز الخلية البطانية.

ضع كل مرشح في بئر واحد من لوحة النقل العازلة المملوءة، وإضافة 0.5 ملليلتر من لوسيفر الصفراء في كل بئر. ثم ضع اللوحة في الحاضنة لمدة 10 دقائق قبل نقل المرشحات إلى مخزن نقل مؤقت جديد ملأ 12 لوحة جيدة. بعد إعداد جهاز الدماغ BBB كثيرة كما هو موضح، إضافة 3500 وحدات platforming من سلالة الفيروس العصبي الفرنسية من فيروس الحمى الصفراء المخفف و 50 ميكرولترات من 2٪ FPS بطانة الخلايا المتوسطة، بعناية فائقة، على رأس المقصورة اللمب.

تلقيح السيطرة BBB الدماغ المصغرة مع 50 ميكرولترات من 2٪ FBS بطانة الخلايا المتوسطة دون فيروس. ثم وضع الفيروس كشف BBB العديد من أجهزة الدماغ في الحاضنة لمدة 24 ساعة. في اليوم التالي، قم بإزالة إدراج لتحديد نفاذية الخلية البطانية ورفيق كذلك كما أظهرت تماما.

حفظ ملليلتر واحد من عينة من كل بئر لتحديد titer الفيروس في المقصورة الوسطى. تحت إدراج بلطف لتجنب تسرب المقصورة الإنارة في المقصورات abluminal. لدراسة نقل الخلايا العصبية التي تستهدف الجزيئات الحيوية عبر حاجز الدم في الدماغ، إضافة جزيء الحيوي من الفائدة إلى إدراج وإعادة لوحة إلى الحاضنة ثقافة الخلية.

بعد 24 ساعة إدراج عن بعد وتحديد نفاذية البطانية. ثم وصمة عار العديد من خلايا الدماغ مع الجسم المضاد المناسب للكشف عن وجود جزيء الحيوي من الفائدة داخل الدماغ مصغرة. الخلايا الدموية الوعائية الدقيقة الدماغية البشرية تعبر عن جميع المجموعات الفرعية من rececptors، الناقلين Efflux أو الناقلين التي هي البروتينات الرئيسية ذات الصلة لوظائفها البيولوجية.

بعض سلالة الفيروس المداري العصبي الفرنسي من فيروس الحمى الصفراء يمكن أن تعبر حاجز الدم في الدماغ في 24 ساعة. ثم تضخّم الفيروسات خلال اليومين القادمين من خلال تكاثر الفيروس داخل خلايا الدماغ. وعلاوة على ذلك، يتم تحفيز التعبير عن المؤشرات الحيوية الفيروسية محددة عندما يتم تمرير هذه السكان الفيروسية الغازية العصبية تسلسليا على خلايا الدماغ المصغرة ويرتبط بدقة إلى الحمل الفيروسي.

بعد إضافتها إلى حد الخلية المقصورة اختراق جزيء Neuro-Tag Neurovita يعبر حاجز الدم في الدماغ وقادرة على استهداف الخلايا العصبية البشرية. الخلية اختراق جزيء العصبية علامة دلتا neurovita يعبر حاجز الخلايا البطانية، ولكن يستهدف أقل كفاءة الخلايا العصبية البشرية. بعد إضافته إلى المقصورة الوسطى الصغيرة ، تخترق الخلية جزيء Neuro-Tag Neurovita يعبر حاجز الدم في الدماغ وقادرة على تجديد محاور الخلايا العصبية البشرية ، بعد إصابتها.

على النقيض من الخلية اختراق جزيء العصبية الوسمة العصبية دلتا، شكل غير نشط من Neurovita. عند تطبيقها بعد خلية الخدش محور عصبي اختراق جزيء Neuro-Tag Neurovita يؤدي إلى الحماية العصبية من الخلايا العصبية الجرحى وتجديد x المناطق. بدقة من أجل الممارسات الجيدة.

لا أكثر من استخدام الممرات الخلية I. في محاولة للحفاظ على بعض مظاهر المتوسط والمناطق والتحقق من عدم وجود mycoplasma. التفاعلات بين الدماغ المصغر والأدوية هي الميكروبات ذات الأهمية يمكن دراسة المزيد من قبل النص الذي يُسمّى هذا علم الأحياء أو الكلاسيكي الذي يُسمى التقنيات.