نموذج Xenograft مشتق من سرطان الجلد

وقد أحدثت PDX ثورة في دراسات السرطان التجريبية قبل السريرية. يمكننا الآن محاكاة، في المختبر، ما يحدث في المرضى. والآن يمكننا العمل على كيفية التغلب على المقاومة وكيف يمكننا، على المدى الطويل، زيادة بقاء المرضى.

إثبات الإجراء سيكون مين شياو. للبدء، نقل سابقا جمع أنسجة سرطان الجلد إلى طبق بيتري العقيمة. العمل مع مقص الجراحية، شفرة مشرط، والملقط، أولا إزالة الأنسجة الطبيعية من الأنسجة الطبيعية قدر الإمكان.

ثم إزالة الأنسجة النخرية التي حددتها الأنسجة البيضاء العش شاحب تقع مركزيا داخل الورم. ثم استخدم مشرط لتقسيم قطعة ورم أولية إلى قطع متساوية تقريبًا لزرع فأر جراحي. إذا كان نسيج الورم صعبًا جدًا على الانفصام الميكانيكي ، فاستخدم مشرطًا لتلخيط قطع الورم بدقة قدر الإمكان لتشكيل الطين.

نقل الطين في أنبوب 50 ملليلتر مع محلول الملح المتوازن هانك الباردة دون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم. أجهزة الطرد المركزي في 220 مرة ز لمدة أربع دقائق في أربع درجات مئوية. بعد إزالة المابير، إعادة تعليق الطين في 10 ملليلتر من الدافئة، وسائل الإعلام هضم الطازجة لكل غرام واحد من أنسجة الورم.

ضع الأنبوب في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة واخلطه بقوة كل خمس دقائق مع ماصة يمكن التخلص منها. اغسل الملاط باستخدام ما يصل إلى 50 ملليلتر من HBSS ، والطرد المركزي بمعدل 220 مرة ز لمدة أربع دقائق عند أربع درجات مئوية ، ثم قم بإزالة المابير الفائقة. إضافة خمسة ملليلتر من العازلة TEG قبل الدافئة لكل غرام واحد من أنسجة الورم، ويهز إلى بلطف إعادة تعليق، ووضع الأنبوب في 37 درجة مئوية لمدة دقيقتين، دون خلط.

لإخماد التربسين، إضافة واحد على الأقل على قدم المساواة حجم من وسائل الإعلام تلطيخ الباردة والطرد المركزي في 220 مرات ز لمدة أربع دقائق في أربع درجات مئوية. بعد إزالة ناظر، إضافة 10 ملليلتر من وسائل الإعلام تلطيخ لكل غرام واحد من أنسجة الورم، وإعادة تعليق بيليه عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا. تصفية من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 40 للحصول على تعليق خلية واحدة لحقن الماوس.

لزرع الختان الجراحي أو نسيج الخزعة الجراحية، حلق الشعر أولاً من أسفل الظهر من NSG ستة إلى ثمانية أسابيع الفئران تخدير عمرها، وترك ما يقرب من 1.5 سنتيمتر إلى ثلاثة سنتيمترات منطقة دون شعر. إعداد قطع الورم، وتقسيم الطين الورم في بيتري في تلال الفردية لزرع الجراحية. باستخدام شفرة مشرط، وجعل شق ما يقرب من خمسة ملليمتر طويلة على مركز الجزء الخلفي من الماوس.

مع زوج واحد من ملقط، والحياة حتى الجلد على جانب شق مقابل المشغل. مع مقص في اليد الأخرى، وفصل الجلد من طبقة العضلات عن طريق قطع بلطف الغشاء اللفافة مع مقص صغير التخفيضات، وبالتالي خلق جيب للأنسجة الورم. استخدام شفرة مشرط لالتقاط تشاك الورم واحد، فضلا عن تلة واحدة فردية من نسيج ملاط الورم، ووضع بلطف الأنسجة في الجيب الذي تم إنشاؤه.

ثم إضافة 100 ميكرولترات من مصفوفة خارج الخلية الاصطناعية على كومة أنسجة الورم في الجيب. باستخدام اثنين من أزواج من ملقط، وسحب ما يصل شق على كلا الطرفين بحيث حواف الجرح تأتي قريبة معا. ثم ضعي مقطعاً أو مقطعين من الجروح لإغلاق الجرح.

حقن تحت الجلد 1-5 ملليغرام لكل كيلوغرام من مسكن. عندما يكون الشفاء تماما، بعد ما يقرب من سبعة أيام، وإزالة لقطات الجرح. مراقبة الفئران مرة واحدة أسبوعيا للتحقق من الأورام واضحة.

مرة واحدة الأورام تصل إلى حجم المطلوب، واستخدام ملقط الجراحية لرفع الجلد المجاورة للورم من الفأر القتل الرحيم وجعل قطع أفقي باستخدام مقص المنحني. استخدم تقنية فصل حادة لتعبئة الجلد على جانبي الورم وعلى الورم، مما يعرض الورم. استخدم المقص وشفرة مشرط لفصل الورم عن اللفافة.

قطع الورم ونقله إلى طبق بيتري العقيم. قطع الورم إلى قطع صغيرة وإزالة الأنسجة النخرية من الورم. للبنوك أنسجة الورم لزرعها في المستقبل، واتخاذ اثنين إلى ثلاث قطع ورم صغيرة و mince لهم إلى قطع أصغر من واحد في ملليمتر واحد.

نقل جميع الأنسجة المفروم إلى اثنين من المليلتر cryogenic الخسيس. إضافة ملليلتر واحد من تجميد وسائل الإعلام ومزيج جيد. ضع القنينات في حاوية تجميد الخلايا القائمة على الأيزوبروبانول التي تم تبريدها مسبقًا على الجليد الجاف، واحفظ الحاوية في ثلاجة ناقص 80 درجة مئوية بين عشية وضحاها، ثم نقل القنينات إلى تخزين النيتروجين السائل.

لالتقاط الأنسجة تجميد للمصب المقايسة، ووضع قطع أنسجة الورم في قارورة المبردة، ووضع الخسيس المبرد في النيتروجين السائل على الفور، وتخزين قوارير في ثلاجة ناقص 80 درجة مئوية. عندما تم مقارنة ثلاث طرق مختلفة لزراعة أنسجة الورم ، كان تعليق الخلايا المفردة للخلايا السرطانية مع استخدام الهضم الأنزيمي هو الأكثر نجاحًا. إلى جانب السماح لنمو الورم أكثر سرعة، كان كافيا أيضا لورم واحد أولي ليتم توسيعه إلى 10 إلى 20 الفئران، في حين أن الورم تشاك وطريقة الطين يمكن إلا أن يوسع إلى خمسة إلى 10 الفئران.

الميلانوما المريض المستمدة من نماذج xenograft غالبا ما تعكس حساسية المخدرات المريض عرض عندما على العلاج. A xenograft المستمدة من مريض سرطان الجلد الذي استجاب في البداية لمثبط BRAF، ولكن في نهاية المطاف انتكست، كما أظهرت حساسية أولية لتثبيط البروتين BRAF، بالإضافة إلى مثبطات كيناز MEK، ولكن الأورام انتكست في نهاية المطاف. من المهم للغاية توخي الحذر عند إعداد أنسجة PDX للبنوك ، لأن هذا سيضمن النجاح في توسعات PDX المستقبلية ، والتجارب العلاجية ، بالإضافة إلى التوصيف.

مع مواد PDX ، تسلسل RNA خلية واحدة ، تسلسل إكسوم كله ، وتوصيف البروتيوم ، هي من بين العديد من الطرق التي رواه مختبرنا لتشريح مقاومة العلاج. تسمح تقنية PDX للباحثين بالتحقيق في مقاومة العلاج باستخدام الخلايا السرطانية التي تُخص بيولوجيا الورم بشكل أفضل في مريض بشري نسبة إلى نماذج السرطان التقليدية التي تزرع على البلاستيك. هذه الميزة تسمح لمزيد من الرؤى التنبؤية.

يجب على الباحثين دائماً العناية واستخدام مستوى السلامة البيولوجية اثنين من الاحتياطات عند التعامل مع أنسجة الورم المستمدة من مريض بشري.