نموذج احتشاء عضلة القلب Murine باستخدام الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر

يسمح هذا النموذج من مخالفة عضلة القلب في مورين بمراقبة العمليات المرضية التي تحدث من انسداد الشريان التاجي إلى فشل القلب في مراحل متأخرة في أنسجة القلب المحلية والمستويات الجهازية. هذه الطريقة متوافقة مع أي قراءات تستخدم حاليا في علم الأحياء والقلب وعلم وظائف الأعضاء. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يستفيد من التنوع الهائل للنماذج الوراثية المورين.

اكتساب المهارات الجراحية الكافية يمكن أن يستغرق وقتاً لإتقان. أفضل طريقة تعلمها خطوة بخطوة مع باحث متمرس. عرض مرئي لهذا النموذج murine يسمح بمشاركة تلميحات التي يمكن أن تساعد في إجراء العمليات الجراحية وتسريع عملية التعلم.

استخدم شفرة حلاقة كهربائية لحلاقة ماوس مُجَنَّق بسرعة، من 25 إلى 30 جرامًا، ذكرًا، فأرًا C57-Black/6 على الحلق والجانب الأيسر من القفص الصدري. تأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع. تطبيق مرهم على عيون الحيوان.

ضع الفأر في موضعه الوبين على وسادة التدفئة، ووضع ضغط الشاش صغيرة تحت الرأس لتجنب ارتفاع درجة حرارة العينين. تأمين الأطراف مع شريط لاصق. تمرير حلقة من خياطة الحرير 5-0 تحت القاطع العلوي، وتأمين أقصى من حلقة على وسادة التدفئة للحفاظ على الفم مفتوحة أثناء التكبوس.

ضعي كريم إزالة الشعر على المناطق التي تم حلاقةها، وتدليك بلطف مع مسحة قطنية لمدة دقيقة واحدة. إزالة الفراء الزائد وكريم مع الشاش، وتنظيف الجلد المكشوف مع قطرات من محلول ملحي 0.9٪والشاش. ضعي قطعاً من الشاش المعقم على الحلق الحليق والصدر، ونقع الشاش مع الوبودوبفيدون.

تعيين جهاز التنفس الصناعي في حجم المد والجزر من سبعة ملليلتر لكل كيلوغرام ومعدل التهوية من 140 السكتات الدماغية في الدقيقة. حرك الماوس تحت مجهر ستيريو ميكروسورجيري. عقد الجلد في وسط الحلق، وجعل شق 0.5 سنتيمتر على طول الخط السدي / السيفال، وفصل فصوص الغدة اللعابية.

استخدام ملقط منحنية لفصل بلطف اللفافة من العضلات sternohyoid حتى الحنجرة والقصبة الهوائية مرئية. ثم قم بتأمين حواف الفتحة مع اشرطة متصلة بأربطة مرنة. بعد ذلك ، اسحب اللسان بلطف ، واستخدم ملقطًا لإدراج إبرة داخلية حادة من قنية قياس 16 في القصبة الهوائية.

تصور الإدراج الصحيح في القصبة الهوائية من خلال شق الحلق، وربط القنية بجهاز التنفس الصناعي. مكان معقمة 0.9٪ المالحة تكملها الشاش الملطخة بالويودبوفيدون على الشق للحفاظ على الأنسجة الرطب أثناء العملية. ثم ضع أنابيب العادم في الماء.

وجود فقاعات يشير إلى النوبات الناجحة. لـ الربط بين الشريان التاجي السفلي الأيسر، أو LAD، حرّك الماوس بعناية إلى وضعية الزّب الأيمن، ثمّ أعيدي الثقة بالطرف الأمامي الأيسر في الوضع الجديد. تحديد الخط بين عضلات الصدرية الصغيرة والكبرى اليسرى، وجعل شق الجلد منحرفة سنتيمتر واحد على طول الخط.

باستخدام مقص صغير متشريح صريح، وفصل اللفافة من عضلات الصدرية دون قطع الأنسجة، واستخدام الداورس تعلق على العصابات مرنة للحفاظ على الانفصال. تعيين جهاز التنفس الصناعي مع الضغط النهائي النهائي إيجابية من ثلاثة سنتيمترات من الماء. استخدم ملقطًا حادًا لفتح تجويف الصدر في الفضاء الوربي الثالث بين الأضلاع الثالثة والرابعة.

ضع اثنين من الداورسات في القفص الصدري، واحد على كل ضلع، واستخدم ملقطًا ناعمًا منحنيًا لإزالة الم pericardium بعناية دون إيذاء القلب والرئتين. حدد موقع LAD كخط أحمر ساطع سطحي يمتد من حافة الورقة اليسرى نحو القمة. استخدام حامل إبرة لتمرير خياطة الحرير 7-0 تحت LAD 2-3 ملليمتر تحت الأذين الأيسر.

سحب الحرير ببطء لتجنب تمزق أنسجة القلب، وربط الرباط مع ثلاث عقدة. الجزء الأيسر السفلي من البطين الأيسر سوف تتحول على الفور شاحب عند الربط. الآن الافراج عن الضوارق الضلع، وعقد الضلع الثالث مع ملقط، وجعل اثنين من التمريرات مع خياطة الحرير 6-0 تحت الأضلاع الثالثة والرابعة.

ضع ثلاث قطرات من محلول ملحي 37 درجة مئوية 0.9٪على الفتحة، وأغلق أنبوب العادم منتهية الصلاحية لدورتين أو ثلاث دورات تنفسية لتضخيم الرئتين بشكل صحيح. تشديد وتأمين خياطة مع رميتين، والافراج عن السحب عقد العضلات، مما يساعد العضلات العودة إلى موقعها التشريحية الصحيحة. ثم أغلق الجلد الصدري مع اثنين من غرز ورميتين من الحرير خياطة 5-0.

إغلاق جلد الحلق مع غرزة واحدة من 5-0 خياطة الحرير ورميتين. في نهاية الإجراء، وإزالة أشرطة الشريط من الأطراف، وتحويل بعناية الحيوان إلى decubitus فينترال على وسادة ضغط، ووضع ضغط على وسادة التدفئة على الجانب الأيمن من الحيوان. حقن intraperitoneally 0.3 ملليلتر من 37 درجة مئوية درجة حرارة 5٪ محلول الجلوكوز.

أوقف جهاز التنفس الصناعي. إذا كان الماوس يتنفس تلقائيا، وإزالة بحذر كانولا. حقن تحت الجلد 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين.

ضع الفأر في قفص 30 درجة مئوية تهوية مع 100٪ من الأكسجين لمدة ساعة واحدة على الأقل مع المراقبة. خلال اليومين الأولين بعد الجراحة، وتوفير الماوس مع اتباع نظام غذائي ناعم والماء الإعلانية libitum، والدفء الحيوان حسب الضرورة. بعد سبعة أيام من الجراحة ، لا تزال المناطق الإقفارية غير ملوثة بكلوريد ثلاثي الفينيلترازوليوم ، في حين أن الأنسجة الحية تلطخ اللون الأحمر بسبب وجود dehydrogenases.

ويمكن بعد ذلك حساب المناطق الإقفارية كنسبة مئوية من المساحة البيضاء للبطين الأيسر في برنامج التصوير. تحليل لطخة الغربية لـ ألفا على نحو سلس العضلات actin وSMAD2 الفوسفور، والتي هي على التوالي قراءات رئيسية من myofibroblasts وتحويل عامل النمو بيتا إشارة التنشيط، يمكن استخدامها لتحديد مدى التليف داخل الأنسجة عضلة القلب من القلوب المهات. في الوقت الحقيقي البوليميراز تحليل تفاعل سلسلة من التحول عامل النمو بيتا والمصب الهدف التعبير الرنا يمكن أيضا أن يؤديها لتقييم وجود تليف عضلة القلب.

عادة ما يتم العثور على مسارات الإشارة المؤيدة للالتهابات والتعبير عن الجينات المؤيدة للالتهابات ليتم تنشيطها في غضون الأسبوع الأول بعد احتشاء عضلة القلب. ويلاحظ أيضاً تعبير الرنا عن الجينات المؤيدة للالتهابات وعلامات أحادية الكيس/الضامة. ارتفاع الربط سوف تؤثر بشكل حاسم على البقاء على قيد الحياة وينبغي تكييفها مع كل سلالة أو نمط وراثي، كما قد تختلف التفريع LAD.

الثوابت في الربط هو المفتاح للحصول على نتائج قابلة للتكاثر. ويمكن أن يقترن هذا الإجراء مع أي طريقة تحليلية ويمكن أن يتبعها التحليل الوظيفي، تثبيت الأنسجة، خلية الثقافة، أو أي تقنية من الفائدة.