منصة معالجة الخلية المتكاملة مقرونة بمسبار واحد لتحليل قياس الطيف الكتلي للأدوية والأيض في خلايا تعليق واحدة

منذ هذه الطريقة يحلل الخلايا من الحل، فإنه يمكن استخدامها لدراسة الخلايا في بيئة قريبة من الأم. وهذا يشمل تحليل عينات الخلايا المشتقة من المريض. هذه التقنية يتطلب القليل أو لا إعداد عينة من الخلايا.

لذلك، يمكننا تحليل الخلايا الفردية عبر الإنترنت في ظل الظروف المحيطة، مما يسمح لنا باستكشاف التغاير الخلوي. يمكن تطبيق هذه التقنية لدراسة الخزعات السائلة من مجموعة متنوعة من حالات المرض المختلفة ، لأنها يمكن أن تحليل أنواع مختلفة من الخلايا المعزولة مباشرة عن عينات المرضى. لتحويل واحد أنابيب الزجاج تتحمل إلى مسبار مدبب مع طرف حاد، المقام الأول أنبوب زجاجي واحد تتحمل في المشابك من حامل ماصة عمودي، مركزة الزجاج فيما يتعلق لفائف التدفئة وتشديد لتأمين أنبوب في مكان.

وتتألف لفائف التدفئة من 18 قياس النيكل الكروم المقاومة سلك ملفوف حول قضيب معدني 2.5 مرات. تعيين أنابيب الزجاج مع برنامج درجة الحرارة 19.5. تعيين المكبس اللولبي في أربعة.

الزناد اللولبي لسحب أنابيب الزجاج. هذه الخطوة يخلق اثنين من تحقيقات تنصهر في الطرف. استخدام البلوزات لقطع ما يقرب من ملليمتر واحد بعيدا عن غيض من كل مسبار، وخلق فتحة من حوالي 10 ميكرون في القطر في طرف التحقيق.

لثني مسبار الزجاج لالتيا اقتران سهلة إلى ICMP، SCMS التحقيق واحد إعداد. تعيين أول مسبار الزجاج سحبت في microforge. ضع الجزء العلوي حوالي ثلاثة ملليمترات فوق سلك التدفئة البلاتيني.

ثم، تحويل الحرارة على السلك البلاتيني إلى 30٪ من درجة الحرارة القصوى. ثني المسبار حوالي 45 درجة من الوضع الأصلي. ضع المجهر المقلوب في جهازي معالجة الخلايا على طاولة مزودة بمحركات لتسهيل اقترانها مع مطياف الكتلة.

لإعداد جهاز اختيار الخلايا الزجاجية ، أدخل مسبار اختيار الخلايا الزجاجية داخل حامل معدني من المنازن الصغير عن طريق وضع الشريحة الطويلة في حامل الشعيرات الدموية وتشديد المسمار لتأمين التحقيق في مكان. ضع نصائح المسبار بزاوية موازية للصحن المدفأ. تأمين حامل المعادن من الحقن الدقيقة في نظام التلاعب الخلية.

ثم ضع طرف المسبار بالقرب من منتصف ضوء المجهر المقلوب. تأمين الشريحة الزجاجية التي تحتوي على مسبار واحد في المشبك الذراع من نظام التلاعب الخلية. ربط المذيب توفير الشعرية إلى الاتحاد موصل عن طريق وضع الشعرية في كم من الضراوة البلاستيكية والاصبع تشديد المناسب.

ربط الجانب الآخر من الاتحاد موصل إلى الشعرية التي ترتبط بحقنة تحتوي على المذيبات أخذ العينات عن طريق وضع الشعيرات الدموية في الأكمام وتشديد المناسب. استخدام الأسيتونيتريل مع 0.1٪ حمض فشكل كمذيب أخذ العينات في هذه التجارب. تأمين الحقنة في مضخة الحقنة على مطياف الكتلة.

ضع تأين النانو أو نانو ESI الباعث ما يقرب من ملليمتر واحد إلى فتحة أنبوب نقل أيون الموسعة. استخدام نظام معالجة الخلية للسيطرة على الحركات spacial من التحقيق واحد ووضع نانو ESI باعث مركزيا أمام أنابيب نقل أيون الموسعة. Pipette الخلايا من قارورة زراعة الخلية إلى أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر.

تدور الخلايا في 400 مرة G في 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق والتخلص من افرا. resuspend الخلايا في أربعة ملليلترات من متوسطة RPMI تحتوي على مركب المخدرات في تركيز العلاج المطلوب. تخصيص المعلمات التجريبية لمطياف الكتلة.

ضمن عنوان وضع المسح الضوئي لبرنامج الجهاز، حدد تحديد الفحص. استخدام قرار من 60،000 في M عبر Z 400، واحد microscan 100 ميلي ثانية أقصى وقت الحقن والتحكم التلقائي في اكتساب. تحت مضخة حقنة، حدد معدل تدفق 150 نانولترز في الدقيقة الواحدة.

حدد مصدر NSI وتطبيق الجهد من حوالي 4.5 كيلوفولت. قم بتشغيل المجهر المقلوب عند التكبير 40 مرة المحدد لكل من اللوحة العلوية والعدسة السفلية. قم بتوصيله بمنفذ USB للكمبيوتر المحمول لالتقاط خلاصات الفيديو المباشرة.

بدوره على لوحة ساخنة وتعيينها إلى 37 درجة مئوية. على الكمبيوتر، انتقل إلى علامة التبويب الحصول على البيانات وحدد باستمرار ضمن الوقت المكتسبة. لإعداد العينة للتحليل، الماصات اثنين إلى ثلاثة من العينة في غطاء طبق بتري صغير.

ضع العينة في مركز الضوء من المجهر المقلوب على قمة اللوحة الساخنة. إعداد خلية الزجاج اختيار التحقيق للتحليل. استخدام نظام التلاعب الخلية لنقل التحقيق بحيث يتم التركيز على أعلى تحت microcsope مقلوب في نفس الطائرة كخلايا.

استخدم نظام معالجة الخلية لنقل تلميح مسبار تحديد الخلية إلى خلية مستهدفة للتحليل. يتم رصد هذه العملية باستخدام المجهر المقلوب. بدوره بلطف مقبض من المصبر لضبط موقف من الزيت المعدني داخل الأنابيب.

يتم توفير شفط لطيف من قبل الحقن المجهري لتأمين الخلية المستهدفة إلى طرف مسبار اختيار الخلية. استخدام نظام معالجة الخلية لنقل الخلية في الخلية تلميح التحقيق اختيار إلى طرف التحقيق واحد باستخدام المجهر الرقمي تركز على طرف التحقيق واحد لرصد هذه العملية. وتستخدم خلايا K-562 غير المعالجة لإنشاء طريقة تجريبية.

في تجربة SCMS نموذجية، يمكن ملاحظة تغيرات واضحة من أطياف الكتلة من نقل خلية أثناء الكشف عن محتويات الخلوية وبعد الانتهاء من القياس. ثلاث قمم مشتركة للدهون الخلوية بما في ذلك PC 34:4، PC 36:4، PC 38:5 يتم مراقبتها لضمان نقل الخلية بنجاح والكشف عن محتويات الخلوية. يتم تأكيد هوية العديد من أجهزة الكمبيوتر في نطاق كتلة من 750 إلى 850 باستخدام MSMS على عينات الخلايا غير المعالجة.

باستخدام المسبار المتعدد التشوّع ICMP الذي تم إعداده، تم اكتشاف Gemcitabine وSicol وOSW1 بعد الحضانة مع خلايا K-562. هذه النتائج تشير إلى أن هذه الطريقة يمكن استخدامها لدراسة الدهون داخل الخلايا, المخدرات, والايض على مستوى الخلية واحدة من الخلايا في حل في بيئة محلية قريبة. تذكر أن تضع بشكل آمن الخلية اختيار التحقيق في حامل ماصة العالمي بحيث يمكن تطبيقها على نحو كاف.

ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة على عينات المستمدة من المريض للتمييز بين الاختلافات بين الأيض الخلوية من مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا, الذي يسمح لنا للحصول على فهم أفضل لهذه الحالات المرض. بعد تطوير هذه الطريقة، يمكننا تنفيذ القياس الكمي لمركبات المخدرات على مستوى الخلية الواحدة. عند العمل مع الخلايا، من المهم أن يكون لديك معدات الحماية الشخصية المناسبة بما في ذلك معطف المختبر والقفازات.

ويمكن استخدام ارتداء العين إضافية عند العمل مع الزجاج.