Name: إعداد عينة لمسبار Electrospray قياس الطيف الكتلي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: تعلم إعداد عينات الأنسجة والسوائل لتحليل طيف الكتلة Ambient Mass Spectrometry بدون معالجة مسبقة. هذه التقنية تتيح تحليل العينات الحيوية في دقيقة واحدة مع الحفاظ على المكونات البيولوجية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر أيومي إيزوكا لتشغيلها PESI-MS وكازوكو سوا-نوبوري على مساعدتها في مجال السكرتارية. نشكر برونوين غاردنر، دكتوراه، من مجموعة إدانز (www.edanzediting.com/ac) لتحريرمسودة هذه المخطوطة.

وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات في جامعة ياماناشي على جميع البروتوكولات واستخدام الحيوانات التجريبية المذكورة هنا. تمت الموافقة على استخدام العينات البشرية من قبل مجلس الأخلاقيات المؤسسية في جامعة ياماناشي.
1. إعداد الأنسجة الصلبة
ملاحظة: يجب الاحتفاظ بالعينات على الجليد بعد إزالتها من جسم الحيوان أو الإنسان للحفاظ على نضارة الأنسجة. إذا كانت القياسات لا تتبع مباشرة تشريح، فمن المستحسن لتخزين الأنسجة في -80 درجة مئوية. ليس من المستحسن وضع الأنسجة في أي نوع من العازلة أو المالحة، لأنها قد استخراج محتويات معينة من الأنسجة. الأنسجة التي تم إصلاحها مع ألدهيدات أو جزءا لا يتجزأ من البارافين / الشمع أو cryogel ليست مناسبة لقياسات التصلب المتعدد.
<ol><li>قطع عينة الأنسجة إلى ما يقرب من 2 × 2 × 2 ملم باستخدام مشرط أو سكين. بدلا من ذلك، لكمة من العينة مع trepan (لكمة خزعة المتاح، تتحمل حجم 3 ملم) المستخدمة لفحص الجلد. في هذه الحالة، قم بتقليم طول العمود إلى 2 مم. ملاحظة: يمكن تحليل أي نسيج باستخدام هذه الطريقة. في هذه التجربة، الكبد15 والكلى19، وقد تم تحليلها بنجاح للحصول على أطياف الشامل. عموما، أجهزة parenchymal إعطاء أطياف كتلة جيدة، في حين أن تلك التي لديها مكونات ليفية لا.</li>
	<li>إذا كانت الأنسجة ملوثة بالدم، اغسل لفترة وجيزة مع الجليد البارد الفوسفات العازلة المالحة. ملاحظة: لتقليل تلف أنسجة ما بعد الوفاة، أكمل هذه الخطوة، في أقرب وقت ممكن، في درجة حرارة الغرفة. إذا لم يتم إجراء القياسات على الفور، قم بتجميد الأنسجة في النيتروجين السائل وتخزينها عند -80 درجة مئوية.</li>
	<li>ضع عينة القطع أو اللكم (حوالي 10 ملغ) في أنبوب بلاستيكي صغير وإضافة 100 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 50٪. ملاحظة: لم يتم تحديد الوزن الدقيق للعينات لأن قياس الطيف الكتلي المستخدم في هذا النظام لا يوفر بيانات كمية. ما يقرب من 10 ملغ هو الأمثل للأنسجة parenchymal.</li>
	<li>تجانس العينة باستخدام ميكروبيستل.</li>
	<li>ضع 10 ميكرولتر من التجانس في بئر الخرطوشة(الشكل 2).</li>
	<li>ضع الخرطوشة في غرفة التأيين لمطياف الكتلة وقم بتثبيت مسبار إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ الذي سيتم استخدامه لعينة التأيين(الشكل 2). ملاحظة: يتم توفير إبر التحقيق من قبل الشركة المصنعة. وهي مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ ولها دائرة نصف قطرها انحناء من حوالي 400 نانومتر.</li>
	<li>أغلق غطاء الغرفة بقوة لتنشيط جهاز الأمان تلقائيًا.</li>
	<li>ابدأ تشغيل الكمبيوتر على متن الطائرة بالنقر فوق رمز البدء للتحليل. باستخدام لوحات على الشاشة، وتطبيق الجهد من 2.3 كيلوفولت إلى الإبرة لتوليد electrospray وضمان أن تردد الإبرة هو 3 هرتز.</li>
	<li>انتظر حتى يتم إكمال القياس لمدة 30 عامًا. ملاحظة: تتوقف جلسة العمل تلقائيًا عند اكتمال الحصول على البيانات. يتم رصد جودة التحليل من خلال إجمالي اللون يون (TIC). يتم تحديد وقت القياس للحصول على أطياف الكتلة التمثيلية ويمكن تقصيره أو تمديده.</li>
	<li>التخلص من خرطوشة وإبرة في التخلص من المخاطر البيولوجية بعد قياس كل عينة. ملاحظة: يمكن قياس عينة واحدة فقط في كل مرة. ليس من الضروري معايرة الجهاز قبل كل قياس. تعتمد المعايرة على الفحص المنتظم من قبل المورد مرة واحدة كل ستة أشهر.</li>
	<li>تحليل أطياف الكتلة وتصدير بيانات النص الطيفي الجماهيري باستخدام البرامج المرتبطة بمطياف الكتلة (انظر جدول المواد)كما هو مذكور في الخطوات أدناه(الشكل 3).<ol>
<li>انقر على ملف LCD في نافذة متصفح ملف البيانات من البرنامج.</li>
		<li>اختر وانقر على ذروة واحدة على نافذة الطيف الشامل ولتصوير اللون يون المستخرج (EIC) تلقائيًا.</li>
		<li>تحقق من TIC و EIC وانقر على رمز الطيف المتوسط لتحديد نافذة النطاق الزمني لتوليد الطيف الكتلي. ملاحظة: في هذا التحليل، تظهر الجزيئات المستهدفة في إطار نسبة الكتلة إلى الشحنة(m/z)(الشكل 3). وعلاوة على ذلك، لأن مدة التأين لكل ضربة واحدة من حركة إبرة قصيرة جدا، وجميع أطياف الكتلة التي تم الحصول عليها هي أساسا متوسط الأطياف أكثر من 10 s (300 بمسح).</li>
		<li>إنشاء ملف نصي يحتوي على m/z وكثافة الأيون بالنقر على علامة التبويب التصدير لمزيد من التحليل. يمكن تخزين هذا الملف النصي في أي مجلد. ملاحظة: أي مواد حافظة للحمض النووي الريبي ستؤثر على النمط الطيفي الأصلي للعينات. بالإضافة إلى ذلك ، من المستحسن التعامل مع الأنسجة وتخزينها دون أي سائل (مثل المالحة المخزنة على الفوسفات) لمنع إلطيال المكونات الجزيئية من الأنسجة إلى السائل أثناء التخزين. من الناحية المثالية، يتم استخدام عينات جديدة أو طازجة مجمدة دون أي علاج.</li>
	</ol></li>
</ol>2. سوائل الجسم (مصل) إعداد
ملاحظة: هذا الإجراء كله مطابق تقريبا لتلك المستخدمة للأنسجة الصلبة. خرطوشة لعينة السوائل هو متاح من الشركة المصنعة. لأن التلوث بخلايا الدم الحمراء (RBCs) يمكن أن يقلل إلى حد كبير من كفاءة اقتناء الطيفية من العنصر المقصود (البلازما أو المصل), تأكد من القضاء على جميع RBCs عن طريق الطرد المركزي قبل القياسات.
<ol><li>خذ 10 ميكرولتر من عينة المصل ووضعها في أنبوب صغير 1.5 مل. ملاحظة: يمكن استخدام كل من المصل الطازج والمخزن.</li>
	<li>أضف 190 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 50٪ إلى أنبوب 1.5 مل، ثم دوامة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>الطرد المركزي السائل في 15،000 ز لمدة 1-5 دقيقة عند 4 درجة مئوية.</li>
	<li>نقل 10 ميكرولتر من سوبرناستانت في بئر الخرطوشة.</li>
	<li>ضع الخرطوشة في غرفة التأيين للآلة وقم بتثبيت مسبار إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ الذي سيتم استخدامه لعينات التأيين(الشكل 2).</li>
	<li>أغلق غطاء الغرفة بقوة لتنشيط جهاز الأمان تلقائيًا.</li>
	<li>بدء تشغيل الكمبيوتر على متن الطائرة بالنقر فوق رمز ابدأ لتأين.</li>
	<li>تخلص من خرطوشة العينة والإبرة كما هو موضح في 1.10 بمجرد أخذ القياسات.</li>
	<li>تحليل المجموعات التي تم الحصول عليها من EIC كما هو مذكور أدناه(الشكل 3).<ol>
<li>افتح ملف LCD على متصفح البيانات.</li>
		<li>انقر على ذروة واحدة لعرض TIC وEIC.</li>
		<li>حدد إطار النطاق الزمني لإنشاء أطياف الكتلة باستخدام رمز الطيف المتوسط.</li>
		<li>قم بتصدير الملف الذي تم إنشاؤه الذي يحتوي على كل من كثافة m/z والأيون لذروة مقابلة بالنقر فوق علامة التبويب التصدير على الشاشة. ملاحظة: يمكن تطبيق هذا الإجراء على اللعاب والبول وسوائل الجسم الأخرى أيضًا.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. التحضير في الجسم الحي PESI-MS في الكائن الحي
ملاحظة: في هذا القسم، يتم تقديم تطبيق لمراقبة التشكيل الجانبي الأيضي لـ 5-فلورو-2'-ديوكسيسيريدين (5-FdU) في نموذج الماوس الحي. استخدام الظروف المعقمة في جميع أنحاء.
<ol><li>تغرس 100 ميكرولتر من محلول 5-FdU 100 مM في الوريد الذيل لفأر عمره شهرين (وزن 20 جم تقريبًا). ملاحظة: لا يوجد تفضيل للجنس أو العمر أو سلالة الماوس. في حين تمت الموافقة على هذا البروتوكول في الوقت الذي قمنا فيه بالتجربة5، فإن جدوى هذه التجربة تعتمد على القيود الأخلاقية للبلد الذي سيتم إجراؤها فيه.</li>
	<li>تَسْهَمُ الفأرَ ةَ بعد بروتوكولِ العنايةِ الحيوانيةِ المعتمدةِ. تقييم عمق التخدير من خلال عدم وجود استجابة لذيل معسر. ملاحظة: إذا لم يسمح استخدام بنتوباربيتال الصوديوم من قبل اللجنة الأخلاقية للتجارب على الحيوانات، يمكن استخدام أساليب بديلة، مثل هيدروكلوريد الكيتامين.</li>
	<li>حلاقة تجويف البطن باستخدام شفرة حلاقة كهربائية وتطبيق مرهم الطبيب البيطري على العينين.</li>
	<li>وضع الماوس بخطر في موقف supine وإصلاح الكفوف على لوحة بلاستيكية باستخدام الشريط إصلاح. فرك موقع الجراحية مع الدعك من الكحول 70٪ ثلاث مرات.</li>
	<li>قطع فتح تجويف البطن باستخدام مقص. أولا، قطع الجلد بشكل قطعي (10 مم) من فوق الحجاب الحاجز. قطع عاجلا عضلة جدار الجسم البطن والبريتونيوم (حوالي 7 ملم) وعقد الجرح مفتوحة باستخدام الأسلاك غير القابل للصدأ لفضح سطح الكبد. ملاحظة: ليست هناك حاجة لسبر سطح الكبد.</li>
	<li>تطبيق غيض من إبرة التحقيق على سطح الكبد. ضبط عمق الإبرة إلى ما يقرب من 0.5 مم عميق لتحسين كفاءة التأيين، والتحقق من TIC ونمط الطيفية في وقت واحد. تعيين الجهد العالي إلى 2.3 كيلو فولت والتردد إلى 3 هرتز على شاشة لوحة التحكم.</li>
	<li>إزالة الحيوان من لوحة بلاستيكية.</li>
	<li>خياطة الجرح باستخدام خياطة الأمعاء الجراحية وإعادة الماوس إلى القفص. لا تترك الماوس دون مراقبة حتى استعاد وعيه للحفاظ على الرُكَم الرُقّي. لا ترجع الماوس إلى الشركة من الحيوانات الأخرى حتى أنها قد تعافى تماما.</li>
	<li>تنفيذ الدورة الزمنية لكثافة الأيون في EIC وإجراءات تصوير EIC كما هو الحال في 1.11.1 إلى 1.11.4.</li>
</ol>

<ol><li>Fenn, J. B., Mann, M., Meng, C. K., Wong, S. F., Whitehouse, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospray+ionization+for+mass+spectrometry+of+large+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Electrospray ionization for mass spectrometry of large biomolecules.</a> Science. 246, 64-71 (1989).</li>
<li>Karas, M., Bachman, D., Bahr, U., Hillenkamp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-Assisted+Ultraviolet+Laser+Desorption+of+Non-Volatile+Compounds%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Mass+Spectrometry+and+Ion+Processes%22%5BJournal%5D)">Matrix-Assisted Ultraviolet Laser Desorption of Non-Volatile Compounds.</a> International Journal of Mass Spectrometry and Ion Processes. 78, 53-68 (1987).</li>
<li>Tanaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+and+polymer+analyses+up+to+m%2Fz+100000+by+laser+ionization+time-of+flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Protein and polymer analyses up to m/z 100000 by laser ionization time-of flight mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 2, 151-153 (1988).</li>
<li>Hiraoka, K., Nishidate, K., Mori, K., Asakawa, D., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+probe+electrospray+using+a+solid+needle%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Development of probe electrospray using a solid needle.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21, 3139-3144 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, L. C., Yu, Z., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+analysis+of+living+animals+by+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Real time analysis of living animals by electrospray ionization mass spectrometry.</a> Analytical Biochemistry. 417, 195-201 (2011).</li>
<li>Balog, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+tissue+identification+using+rapid+evaporative+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intraoperative tissue identification using rapid evaporative ionization mass spectrometry.</a> Science Translational Medicine. 5, 194ra93(2013).</li>
<li>Boughton, B. A., Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+metabolite+profiling+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+mass+spectrometry+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Spatial metabolite profiling by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry imaging.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 965, 291-321 (2017).</li>
<li>Shimma, S., Sugiura, Y., Hayasaka, T., Hoshikawa, Y., Noda, T., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-based+imaging+mass+spectrometry+revealed+abnormal+distribution+of+phospholipids+in+colon+cancer+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography.+B%2C+Analytical+Technologies+in+the+Biomedical+and+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">MALDI-based imaging mass spectrometry revealed abnormal distribution of phospholipids in colon cancer liver metastasis.</a> Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 855, 98-103 (2017).</li>
<li>Sugiyama, E., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+brain+gangliosides+using+MALDI+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Visualization of brain gangliosides using MALDI imaging mass spectrometry.</a> Methods in Molecular Biology. 1804, 223-229 (2018).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nondestructive+tissue+analysis+for+ex+vivo+and+in+vivo+cancer+diagnosis+using+a+handheld+mass+spectrometry+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nondestructive tissue analysis for ex vivo and in vivo cancer diagnosis using a handheld mass spectrometry system.</a> Science Translational Medicine. 9, 406(2017).</li>
<li>Pirro, V., Jarmusch, A. K., Vincenti, M., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+drug+analysis+from+oral+fluid+using+swab+touch+spray+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimca+Acta%22%5BJournal%5D)">Direct drug analysis from oral fluid using swab touch spray mass spectrometry.</a> Analytica Chimca Acta. 861, 47-54 (2015).</li>
<li>Chen, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+probe+electrospray+generated+from+a+solid+needle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physical+Chemistry.+B%22%5BJournal%5D)">Characterization of probe electrospray generated from a solid needle.</a> Journal of Physical Chemistry. B. 112, 11164-11170 (2008).</li>
<li>Mandal, M. K., Chen, L. C., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+and+exhaustive+ionization+of+analytes+with+different+surface+activity+by+probe+electrospray+ionization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Sequential and exhaustive ionization of analytes with different surface activity by probe electrospray ionization.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 22, 1493-1500 (2011).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, C. L., Asakawa, D., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+the+probe+electrospray+ionization+%28PESI%29+needle+applied+to+the+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Physical properties of the probe electrospray ionization (PESI) needle applied to the biological samples.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 978-985 (2009).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+renal+cell+carcinoma+as+a+first+step+for+mass+spectrometry-based+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Analysis of renal cell carcinoma as a first step for mass spectrometry-based diagnostics.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 23, 1741-1749 (2012).</li>
<li>Ashizawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+mass+spectra+database+and+diagnosis+algorithm+for+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Construction of mass spectra database and diagnosis algorithm for head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 75, 111-119 (2017).</li>
<li>Johno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+potential+new+biomarkers+of+atherosclerosis+by+probe+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolomics%22%5BJournal%5D)">Detection of potential new biomarkers of atherosclerosis by probe electrospray ionization mass spectrometry.</a> Metabolomics. 14, 38(2018).</li>
<li>Zaitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+endogenous+metabolite+analysis+of+mice+liver+by+probe+electrospray+ionization%2Ftriple+quadrupole+tandem+mass+spectrometry+and+its+preliminary+application+to+in+vivo+real-time+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intact endogenous metabolite analysis of mice liver by probe electrospray ionization/triple quadrupole tandem mass spectrometry and its preliminary application to in vivo real-time analysis.</a> Analytical Chemistry. 88, 3556-3561 (2016).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+diagnosis+of+chemically+induced+hepatocellular+carcinoma+using+a+novel+mass+spectrometry-based+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Real time diagnosis of chemically induced hepatocellular carcinoma using a novel mass spectrometry-based technique.</a> Analytical Biochemistry. 441, 32-37 (2013).</li>
<li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolic+reprogramming+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma.</a> Cancers. 10, 447-461 (2018).</li>
<li>Mandal, M. K., Chen, L. C., Hashimoto, Y., Yu, Z., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+biomolecules+from+solutions+with+high+concentration+of+salts+using+probe+electrospray+and+nano-electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of biomolecules from solutions with high concentration of salts using probe electrospray and nano-electrospray ionization mass spectrometry.</a> Analytical Methods. 2, 1905-1912 (2010).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, L. C., Johno, H., Nakajima, M., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+non-proximate+probe+electrospray+ionization+for+real-time+analysis+of+living+animal%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Development of non-proximate probe electrospray ionization for real-time analysis of living animal.</a> Mass Spectrometry. 3, S0048(2014).</li>
<li>Chen, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+imaging+mass+spectrometry+by+electrospray+ionization+using+solid+needle+as+sampling+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Ambient imaging mass spectrometry by electrospray ionization using solid needle as sampling probe.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 1469-1477 (2009).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, C. L., Asakawa, D., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+the+probe+electrospray+ionization+%28PESI%29+needle+applied+to+the+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Physical properties of the probe electrospray ionization (PESI) needle applied to the biological samples.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 978-985 (2009).</li>
<li>Takeda, S., Yoshimura, K., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+analytical+oncology+-+Status+quo+of+mass+spectrometry-based+diagnostics+for+malignant+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innovations in analytical oncology - Status quo of mass spectrometry-based diagnostics for malignant tumor.</a> Journal of Analytical Oncology. 1, 74-80 (2012).</li>
<li>Hiraoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component+profiling+in+agricultural+applications+using+an+adjustable+acupuncture+needle+for+sheath-flow+probe+electrospray+ionization%2Fmass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Component profiling in agricultural applications using an adjustable acupuncture needle for sheath-flow probe electrospray ionization/mass spectrometry.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 67, 3275-3283 (2019).</li>
</ol>

ومولت صاحب البلاغ المقابل شركة شيمادزو، وهي شركة مصنعة وموردة لصك PESI-MS.

على الرغم من أن PESI هو مشتق من ESI لقياس الطيف الكتلي4، فمن الأكثر فائدة لرصد metabolomics في الوقت الحقيقي ، وكذلك لتحليل التفاعلات الكيميائية الحيوية دون إجراء أي علاجات مسبقة معقدة أو تستغرق وقتًاطويلا5،14،15،17. وهي تقنية قياس الطيف الكتلي السهلة واللحظية التي يمكن تطبيقها على الحالة المتكاملة للكائنات الحية. نظرًا لأنه لا يتطلب سلاسل معقدة من العلاجات المسبقة للعين...

قياس الطيف الكتلي (MS) هو تحقيق تكنولوجي للنزعة الاختزالية؛ أنه يقلل من موضوع التحليل إلى وحدة التي يمكن تفسيرها على أساس الأنواع الجزيئية أو الشلالات. ولذلك، هو أسلوب تمثيلي للكيمياء التحليلية. وهي تتكون من أربع عمليات: التأين والتحليل والكشف والاستحواذ الطيفي. لأن تأين الجزيء هو أول عملية في قياس الطيف الكتلي ، فإنه يقيد بشكل عام شكل التحاليل التي سيتم معالجتها. تتطلب معظم إجراءات التأيّن تدمير بنية العينات العضوية ومورفولوجياها وعملياتها البيولوجية في الوقت الحقيقي. على سبيل المثال، يتطلب التأيين الكهربائي (ESI) MS أن تكون العينات في حالة سائلة للتأيين الفعال1. العينات ، لذلك ، يجب أن تذهب من خلال إعداد البيوكيميائية المعقدة ، والتي تغير تكوين الجزيئات. بدلا من ذلك ، في حين أن المزازة الليزر بمساعدة مصفوفة (MALDI) MS يمكن إعادة بناء الخرائط الجزيئية للأنسجة المقطعة رقيقة2،3، كفاءتها التأين منخفضة جدا للكشف عن جميع الجزيئات في العينات ، وأنها سيئة بشكل خاص في تحليل الأحماض الدهنية. وبالنظر إلى هذه القيود، يمكن استخدام تأين الرذاذ الكهربائي (PESI)4 لرصد التغيرات في الوقت الحقيقي في النظم البيولوجية في الموقع دون تدمير السلامة الهيكلية5، في حين أن الكائن البيولوجي الذي يتم ملاحظته هو من الناحية الفنية في حالة حية. يتم استخدام إبرة دقيقة جدا في هذه الحالة التي تعمل في وقت واحد كما منتقي العينة وباعث أيون. وهذا يعني أنه يمكن تجاوز تسلسلات المعالجة المسبقة للعينة المعقدة للحصول على أطياف كتلة تعكس المكونات الجزيئية للنظام الحي في الموقع.
هناك العديد من أساليب التأين الأخرى التي تنافس PESI-MS. واحد هو قياس الطيف التأين يتبخر السريع (REIMS)6. تعمل هذه التقنية بشكل جيد أثناء الجراحة لأنه يتم تجميعها بسكين كهربائي وتجمع عمود الأيون المتولد أثناء الشق. في حين REIMS مفيد جدا لعملية جراحية، بل هو في الأساس طريقة مدمرة تتطلب الاستئصال الكهربائي للأنسجة. لذلك ، فإنه ليس من المفيد للتحليل التفصيلي للخلايا والأنسجة في عينة إعدادية أو في التحليلات المختبرية. وعلاوة على ذلك ، لأنه يجمع كمية كبيرة من عمود تحتوي على حطام الأنسجة ، فإنه يتطلب صيانة طويلة للأجهزة بعد كل استخدام ، وبالتالي الحد من استخدام هذا الجهاز إلى الإجراءات الجراحية الخاصة. وهناك طريقة مماثلة، تسمى قياس الطيف الكتلي الأياني بالليزر (LDI-MS)7، هي تقنية أخرى غير باضعة ومفيدة لتحليل السطح. لأن هذه التقنية جيدة في مسح سطح العينة ، فإنه يحقق تحليل شامل ثنائي الأبعاد مثل قياس الطيف الكتلي التصوير MALDI8،9. ومع ذلك، نظرًا لأن LDI-MS ينطبق فقط على التحليل السطحي، فإن PESI-MS مفيد لتحليل العينات على سبيل المثال، داخل الأنسجة. وثمة تقنية أخرى، هي MasSpec Pen10،أفيد بأنها تحقق خصوصية وحساسية عالية في تشخيص سرطان الغدة الدرقية، ولكن قطر المسبار هو في ترتيب ملم وهو محدد لتحليل السطح، مما يعني أنه لا يمكن الكشف عن عقيدات صغيرة من السرطان أو الآفات المترجمة بعمق. وعلاوة على ذلك، وبما أن هذه الطريقة تستخدم قناة تدفق ميكروالخمسينيبيلية مضمنة في قلم المسبار، يجب أن يؤخذ التلوث المتبادل في الاعتبار، على غرار LDI-MS. توجد تقنيات أخرى تم تطبيقها على الإعدادات السريرية ، مثل مسبار التدفق والمسحة نموذج التأين11، ولكنها ليست واسعة الانتشار.
PESI هو تصغير المدقع من ESI، حيث الشعيرات الدموية من النانو-electrospray يتلاقى على إبرة صلبة مع نصف قطرها انحناء تلميح من عدة مئات نانومتر. التأين يحدث في منطقة مقيدة للغاية من طرف إبرة عن طريق تشكيل مخروط تايلور، والتي تبقى عينات حتى تأين جميع السوائل على طرف اكتمال12. إذا بقي المناقّل على طرف الإبرة المعدنية، يتم توليد الشحن الزائد باستمرار في الواجهة بين الإبرة المعدنية وanalytes. لذلك ، يحدث تأيين الجزيئات بشكل متسلسل اعتمادًا على نشاطها السطحي. هذه الخاصية يجعل طرف إبرة نوع من الكروماتوغرام، وفصل المناقبين اعتمادا على نشاطها السطحي. أكثر من الناحية الفنية ، والجزيئات مع النشاط سطح أقوى تأتي إلى سطح مخروط تايلور وتأين في وقت سابق من تلك التي مع ضعف النشاط السطحي ، والتي تلتصق سطح الإبرة حتى نهاية عملية التأين. وهكذا ، يتم تحقيق تأين كامل لجميع الجزيئات التي التقطتها الإبرة13. وعلاوة على ذلك، لأن هذه التقنية لا تنطوي على إضافة المذيبات زائدة عن الحاجة إلى العينة، عدة مئات من femtoliters كافية للحصول على أطياف كتلة قوية بما يكفي لمزيد من التحليل14. هذه الخصائص مفيدة لتحليل العينات البيولوجية سليمة. ومع ذلك ، فإن العيب الرئيسي لـ PESI-MS يكمن في انقطاع التأيين بسبب حركة التردي للإبرة على طول المحور الرأسي ، على غرار آلة المنشار. التأين يحدث فقط عندما يصل طرف المسبار إلى أعلى نقطة عندما يكون ارتفاع فتحة الأيون محاذياً على المحور الأفقي. التأين يتوقف في حين أن الإبرة تلتقط العينات، وبالتالي فإن استقرار التأين لا يساوي ذلك في ESI التقليدية. لذلك، PESI-MS ليست طريقة مثالية للبروتيوميات.
وحتى الآن، طُبق نظام PESI-MS بشكل رئيسي على تحليل النظم البيولوجية، التي تغطي مجموعة واسعة من المجالات من البحوث الأساسية إلى البيئات السريرية. على سبيل المثال ، كان التحليل المباشر للأنسجة البشرية التي أعدت أثناء الجراحة قادرًا على الكشف عن تراكم ثلاثي الخلايا الثلاثية في كل من سرطان الخلايا الكلوية15 وسرطان الحركوما البلعفي16. يمكن لهذه الطريقة أيضًا قياس العينات السائلة، مثل الدم، للتركيز على الملف الشخصي للدهون. فعلى سبيل المثال، تم تحديد بعض الجزيئات أثناء التغيرات الغذائية في الأرانب؛ وأفيد أن بعض هذه الجزيئات انخفضت في المراحل المبكرة جدا من التجارب، مما يدل على حساسية عالية وفائدة هذا النظام للتشخيص السريري17. وعلاوة على ذلك، تطبيق مباشر لالحيوان الحي سمح الكشف عن التغيرات الكيميائية الحيوية للكبد بعد ليلة واحدة فقط من الصيام5. زار Zaitsu وآخرون18 هذه التجربة5 وتحليل ملامح التمثيل الغذائي للكبد بنفس الطريقة تقريبا، مع النتائج التي عززت الاستقرار واستنساخ طريقتنا الأصلية. وعلاوة على ذلك، تمكنا من التمييز بين الأنسجة السرطانية من الكبد غير السرطاني المحيط ة في الفئران باستخدام هذه التقنية19. لذلك ، هذا هو تقنية قياس الطيف الكتلي متعددة الاستخدامات المفيدة في إعدادات مختلفة ، سواء في الجسم الحي أو في المختبر. من وجهة نظر أخرى ، يمكن إجراء وحدة PESI لتناسب مطياف الكتلة المختلفة عن طريق ضبط المرفق المتصاعد. في هذه المقالة القصيرة ، نقدم أساسيات وأمثلة التطبيقات(الشكل 1)، بما في ذلك التطبيقات مع الحيوانات الحية5.
ووفقا ً للأنظمة والقوانين في كل بلد، سيلزم تنقيح أجزاء من هذا البروتوكول للوفاء بمعايير كل مؤسسة. تطبيق على الكائن الحي هو الأكثر إثارة للاهتمام والتحدي لأنه يمكن أن توفر التغيرات الكيميائية الحيوية أو الأيضية في الأنسجة أو الأعضاء في الحيوانات الحية في الموقع. في حين تمت الموافقة على هذا الطلب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات في جامعة ياماناشي، في عام 20135،جولة أخرى من الموافقة سيكون من الضروري الآن بسبب التغييرات الأخيرة في اللوائح للتجارب الحيوانية. ولذلك، من المستصوب إدخال عدة تعديلات على المخطط التجريبي. وفيما يتعلق بالأطياف الجماهيرية التي تم الحصول عليها في التجارب، مع أخذ تقلبات الأطياف الجماهيرية بين كل قياس في الاعتبار، لا يوجد نظام طيفي لتبادل المعلومات مشترك بين مجتمع تسلسل النيوكليوتيدات. يجب توخي الحذر عندما يتعامل المشغل مع الإبرة لتجنب حوادث إبرة عصا, خاصة عند إزالة الإبرة من حامل إبرة. جهاز خاص لفصل الإبرة مفيد جدا لهذا الغرض. وبما أن مقصورة وحدة PESI هي غرفة مغلقة محكمة الإغلاق ، فإن تسرب عمود الأيون لا يحدث إذا تم تشغيل مطياف الكتلة وفقًا للتعليمات.

<table><tbody><tr><td>5-Fluoro-2'-deoxyuridine (5-FdU)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>F8791-25MG</td><td>25mg</td></tr><tr><td>لكمة ذات بوص يمكن التخلص منها (Trepan)</td> <td>kai Europa GmbH</td><td>BP-30F</td><td>حجم التجويف 3 مم</td></tr><tr><td>الإيثانول</td><td>ناكالاي tesque</td><td>14710-25</td><td>كاشف نقي</td></tr><tr><td>إضافي LabSolutions</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>الإصدار 5.96 ، محلل</td></tr><tr><td>البيانات مدقة صغيرة</td><td>United Scientific مستلزمات</td><td>S13091</td><td></td></tr><tr><td>microtube</td><td>Treff</td><td>982855</td><td>0.5 مل شفاف</td></tr><tr><td>PESI-MS (تأين المسبار المباشر-MS)</td><td>مطياف الكتلة</td> <td>Shimadzu</td><td>DPiMS-2020</td> مجهز ب PESI</tr><tr><td>PPGT solition</td><td>Shimadzu</td><td>ND</td><td>المرفق ب DPiMS-2020</td></tr></tbody></table>

إعداد عينة لمسبار electrospray قياس الطيف الكتلي

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

قياس الطيف الكتلي (MS) هو أداة قوية في الكيمياء التحليلية لأنه يوفر معلومات دقيقة للغاية حول الجزيئات ، مثل نسب الكتلة إلى الشحن(m /z)، والتي هي مفيدة لاستقراء الأوزان والهياكل الجزيئية. في حين أنه هو في الأساس طريقة تحليلية مدمرة ، فإن التطورات الأخيرة في تقنية التأين المحيطمكنتنا من الحصول على البيانات مع ترك الأنسجة في حالة سليمة نسبيًا من حيث النزاهة. تأين الرذاذ الكهربائي (PESI) هو ما يسمى طريقة مباشرة لأنها لا تتطلب معالجة معقدة وتستغرق وقتا طويلا من العينات. إبرة غرامة بمثابة منتقي العينة، فضلا عن باعث التأيين. استنادا إلى خاصية حادة جدا وغرامة من تلميح التحقيق، وتدمير العينات هو الحد الأدنى، مما يسمح لنا للحصول على المعلومات الجزيئية في الوقت الحقيقي من الكائنات الحية في الموقع. هنا ، نقدم ثلاثة تطبيقات لتقنية PESI-MS التي ستكون مفيدة للبحث والتطوير في مجال الطب الحيوي. واحد ينطوي على تطبيق على الأنسجة الصلبة، وهو التطبيق الأساسي لهذه التقنية للتشخيص الطبي. وبما أن هذه التقنية تتطلب 10 ملغ فقط من العينة ، فقد تكون مفيدة للغاية في الإعدادات السريرية الروتينية. التطبيق الثاني هو للتشخيص الطبي في المختبر حيث يتم قياس مصل الدم البشري. كما أن القدرة على قياس عينات السوائل قيِّمة في مختلف التجارب البيولوجية حيث لا يمكن توفير كمية كافية من العينات للتقنيات التحليلية التقليدية. التطبيق الثالث يميل نحو التطبيق المباشر للإبر التحقيق في الحيوانات الحية، حيث يمكننا الحصول على ديناميات في الوقت الحقيقي من الأيض أو المخدرات في أجهزة محددة. في كل تطبيق، يمكننا استنتاج الجزيئات التي تم اكتشافها من قبل مرض التصلب العصبي المتعدد أو استخدام الذكاء الاصطناعي للحصول على تشخيص طبي.

كما هو مبين في الشكل 3، فإن البيانات التي تم الحصول عليها بواسطة تقنية PESI-MS هي أطياف الكتلة ، التي يتراوح m/z من 10 إلى 1200 في هذا النظام. في حين يمكن للمرء الكشف عن جزيئات تصل إلى m/z 2,000, كان هناك عدد قليل من القمم التي تم الحصول عليها باستخدام هذه التقنية على مدى كتلة من m/z 1,200. لذلك، قمنا بتحليل القمم من m/z 10 إلى 1200. وكانت هناك مجموعات بارزة من القمم حول m/z 800 و 900؛ الأول يمثل مكونات غشاء الخلية...

تقدم هذه المقالة أساليب إعداد العينة لطريقة تحليلية فريدة في الوقت الحقيقي استنادًا إلى قياس الطيف الكتلي المحيط. هذه الطريقة تتيح لنا إجراء تحليل في الوقت الحقيقي للجزيئات البيولوجية في الجسم الحي دون أي علاجات مسبقة خاصة.

إعداد عينة لمسبار Electrospray قياس الطيف الكتلي

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

لذلك، هذا هو فريدة من نوعها القياس الطيفي الكتلة المحيطة، ومناسبة بشكل خاص لتحليل العينات البيولوجية، سواء في المختبر وفي الجسم الحي. وبما أن هذا لا يتطلب بشكل منتظم معالجة مسبقة خاصة للعينات، مثل فرز الخلايا، والتجزئة، والتركيز، فإنه يمكن تحليل عينة مع الحد الأدنى من فقدان المكونات البيولوجية، وخاصة تلك الموجودة كميّة صغيرة جداً. هذه التقنية تسمح لك بتحليل مواد الأنسجة الخام مباشرة في دقيقة واحدة بواسطة قياس الطيف الشامل.سرعة هو دون عوائق في متانة النظام، والمزايا الرئيسية الكامنة في هذه التقنية. كل ما عليك القيام به هو فقط لإعداد السيليكا، 10 ملليغرام من عينة الأنسجة، و 10 ميكرولترات من الانتشار. ووضعها في خرطوشة يمكن التخلص منها.يتم تعيينها إلى الجهاز PESI-MS، وسوف تحصل على النتيجة في بضع دقائق. عن طريق اختيار الطيف الشامل المناسب، يمكنك التعليق على الهوية الجزيئية. للبدء، استرداد أنسجة الكبد أو الكلى من الفريزر.على لوحة الفلين، وقطع عينة الأنسجة إلى ما يقرب من اثنين من اثنين في اثنين من ملليمترين باستخدام مشرط أو سكين. بدلا من ذلك، لكمة خارج العينة مع تريبان وتقليم طول العمود إلى مليمترين. إذا كانت الأنسجة ملوثة بالدم، اغسل لفترة وجيزة مع محلول ملحي بارد الفوسفات.مكان ما يقرب من 10 ملليغرام من قطع أو لكمات خارج عينة في microtube البلاستيك وإضافة 100 ميكرولترات من 50٪ الإيثانول. استخدام ميكروبستل لتجانس العينة. ثم مع pipetman، مكان 10 ميكرولترات من التجانس في بئر خرطوشة مطياف الكتلة.ضع الخراطيش في غرفة التأين في مطياف كتلة التأين المجس المباشر المسبار وتثبيت مسبار إبرة سرقة غير القابل للصدأ التي سيتم استخدامها لعينة التأين. أغلق غطاء الغرفة بإحكام لتنشيط جهاز الأمان تلقائيًا. بدء تشغيل الكمبيوتر على متن عن طريق النقر على أيقونة بدء لتحليل، وذلك باستخدام لوحات على الشاشة، وتطبيق الجهد من 2.3 كيلوفولت إلى الإبرة لتوليد أقطاب كهربائية وضمان أن تردد الإبرة هو ثلاثة هيرتز.انتظر 30 ثانية حتى يكتمل القياس. بعد قياس كل عينة، تخلص من الخراطيش والإبرة في متخلصات متخلصات مُهترَبٍ حيوي. لتحليل أطياف الكتلة، افتح البرنامج المرتبط بمطياف الكتلة.انقر على ملف L-C-D في إطار متصفح ملف البيانات للبرنامج. اختيار انقر فوق على ذروة واحدة من نافذة الطيف الشامل، وتصوير تلقائيا E-I-C. تحقق من T-I-C و E-I-C، وانقر على رمز متوسط الطيف لتحديد نطاق الإطار الزمني لتوليد الطيف الشامل.تصدير بيانات النص الطيفي الشامل. لتحليل سوائل الجسم، قم برسم ما يصل إلى 10 ميكرولترات من عينة المصل، وصرفها في أنبوب صغير 1.5 ملليلتر. إضافة 190 ميكرولترات من 50٪ الإيثانول إلى الأنبوب، ثم دوامة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة.للقضاء على جميع خلايا الدم الحمراء، الطرد المركزي السائل في 15،000 مرات G لمدة دقيقة واحدة إلى خمس دقائق في أربع درجات مئوية. نقل 10 ميكرولترات من عظمى في بئر خرطوشة والمضي قدما لقياس على مطياف الكتلة كما كان سابقا. يُظهر هذا البروتوكول إعداد العينة لـ PESI-MS على عينة صلبة وعينة سائلة وحية.سرطان الخلايا الكلوية البشرية يظهر قمم مميزة من الدهون محايدة. كانت هناك قمم قوية نسبيا في الأطياف بنسبة الشامل إلى تهمة من 900 من أنسجة سرطان الخلايا الكلوية البشرية التي لم يتم تحديدها في الأنسجة غير السرطانية المحيطة بها. هذه القمم تمثل أساسا ترياكيل الجلسرين.مثال على البيانات المكتسبة في أنسجة الكبد العادية، يصور آفة الورم النية من مريض مصاب بالتهاب الكبد المزمن وتليف الكبد. تم تحليل مصل الإنسان من ثلاثة أفراد باستخدام PESI-MS ، كانت هناك اختلافات واضحة في الأنماط الطيفية بين الأفراد. للتغيرات الأيضية في 5-FdU حقن intraveneously في ذيل السفينة من الماوس، تم تحقيق الكشف السريع جدا وحساسة من 5-FdU مع أدوكت الصوديوم في الكبد في الموقع.كما عمق طرف إبرة من موقع الأنسجة، يلعب أهم دور في التأين الذي يقرأ الحصول على البيانات الناجحة، تأكد من اتباع التعليمات. يمكنك تحديد الأنواع الجزيئية من خلال النظر في قاعدة البيانات التجارية. هذه هي وسيلة لتأهيل الآلية الجزيئية للمرض.وقد أصبح العديد من الباحثين المهتمين في تطبيق هذه التقنية للتنبؤ بازدهار المرض والتكهن. خصوصاً باستخدام خزعة ريكت فقط تأكد من عدم وخز من قبل إبرة التحقيق.ويمكن تجنب ذلك ببساطة مع أداة محددة لإزالة إبرة من الجهاز.

sample-preparation-for-probe-electrospray-ionization-mass-spectrometry

Research

JoVE Journal

Biochemistry

الكيمياء الحيوية

على microfluidics الرقمية هي تقنية تتميز التلاعب قطرات منفصلة (~ NL -- مل) على مجموعة من الأقطاب الكهربائية من تطبيق الحقول الكهربائية. انها مناسبة تماما للاضطلاع ، المتسلسل السريع ، المنمنمة الآلي فحوصات البيوكيميائية. هنا ، نحن تقرير منصة قادرة على أتمتة العديد من خطوات التجهيز البروتين.

الرقمية على microfluidics لتصنيع البروتين الآلي

في هذا الفيديو ، نوضح استخراج مستقلبات مستقلبات من كلية متبرع تم حصادها مسبقا على أساس مسبار SPME. يمكن استخدام المستقلبات المستخرجة لإجراء تحليل الأيض والدهون من أجل تقييم جودة الأعضاء للزرع.

أخذ عينات الاستخراج المجهري للمرحلة الصلبة: تقنية قائمة على المسبار لاستخراج العينات من أنسجة الكسب غير المشروع

الهندسة المعمارية لمجمعات البروتين ضروري لوظيفتها. الجمع بين مختلف التقنيات الجماعية والمطيافيه أثبتت أنها قوية لدراسة تلك الجمعية. توفر البروتوكولات العابرة للربط الكيميائي وأصلي الكتلي، وتبين كيف أن هذه التقنيات التكميلية تساعد على توضيح بنية تجميعات فرعية متعددة البروتين.

الجمع بين المواد الكيميائية العابرة للربط والطيف الكتلي لمجمعات البروتين سليمة لدراسة الهندسة المعمارية لتجميعات فرعية متعددة البروتين

ويرد وصف بروتوكول مفصل لفصل وتحديد، وتوصيف بروتيوفورمس في عينات البروتين باستخدام المنطقة الشعرية اليكتروسبراي الكهربي التأين-جنبا إلى جنب الكتلي (تشيكيا-ESI-MS/MS). يمكن استخدام البروتوكول لتوصيف الاستبانة بروتيوفورمس في عينات بسيطة البروتين وتحديد بروتيوفورمس في عينات البروتين معقدة واسعة النطاق.

البروتيوميات من أعلى إلى أسفل على نطاق واسع باستخدام المنطقة الشعرية التفريد جنبا إلى جنب الكتلي

توصيف البروتين من أسرة microvascular العين أمر حيوي لفهم متعمق للعديد من أمراض العين في البشر. وتوضح هذه الدراسة طريقة فعالة وسريعة وقوية لاستخراج البروتين وإعداد عينة من الأوعية الدموية الصغيرة التي توظف الشرايين الهدبية الخلفية قصيرة الخنزير كسفن النموذجي لتحليلات الجماهيري-قياس الطيف الكتلي المستندة البروتيوميات.

إعداد نموذج للإعلام-قياس الطيف الكتلي المستندة البروتيوميات تحليل ميكروفيسيلس العين

تم تطوير منصة معالجة خلية متكاملة للاستخدام بالاقتران مع إعداد قياس الطيف الكتلي أحادي التحقيق لتحليل خلايا التعليق الفردية على الخط في الظروف المحيطة.

منصة معالجة الخلية المتكاملة مقرونة بمسبار واحد لتحليل قياس الطيف الكتلي للأدوية والأيض في خلايا تعليق واحدة

Sphingolipids هي مستقلبات نشطة بيولوجيا لها أدوار راسخة في الأمراض البشرية. يمكن أن يكشف توصيف التغيرات في الأنسجة باستخدام قياس الطيف الكتلي عن أدوار في مسببات المرض أو تحديد الأهداف العلاجية. ومع ذلك ، فإن مركب OCT المستخدم للحفظ بالتبريد في المستودعات الحيوية يتداخل مع قياس الطيف الكتلي. نحدد طرقا لتحليل الدهون السفينغولية في الأنسجة البشرية المضمنة في OCT باستخدام LC-ESI-MS / MS.

تحضير الأنسجة البشرية المضمنة في مركب درجة حرارة القطع الأمثل لتحليل مطياف الكتلة

يتم تقديم بروتوكول لتحديد المؤشرات الحيوية منخفضة الوفرة من عينات المصل المجففة المتمثلة في الببتيد المطلق للبروغاسترين (ProGRP). تستخدم الخرزات المغناطيسية المغلفة بالأجسام المضادة للتنظيف الانتقائي وإثراء ببتيد ProGRP البروتيني. يتم تحليل الببتيد الذي تم التقاطه لاحقا بواسطة مطياف الكتلة اللوني الترادفي السائل.

أخذ العينات المجهرية في تحليل البروتين القائم على قياس الطيف الكتلي المستهدف للبروتينات منخفضة الوفرة

هنا ، نؤسس طريقة بروتينية قائمة على قياس الطيف الكتلي باستخدام مناطق معزولة ذات أهمية في أقسام الأنسجة الثابتة بالفورمالين والمدمجة في البارافين. يستخدم هذا البروتوكول لتحليل البروتيوم من مناطق أنسجة معينة في أقسام الأنسجة المؤرشفة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين.

نهج مبسط للبروتينات القائمة على قياس الطيف الكتلي باستخدام مناطق أنسجة مختارة

يهدف هذا البروتوكول إلى الحفاظ على مستقلبات الخلايا لقياس الطيف الكتلي أحادي الخلية (SCMS) من خلال الجمع بين غسل محلول الملح المتطاير ، والتبريد السريع للنيتروجين السائل ، والتجفيف بالتجميد ، والتخزين -8 درجة مئوية. يوضح أن تبريد النيتروجين السائل ضروري للحفاظ على ملامح المستقلب ، بينما يجب تقليل التخزين البارد لفترات طويلة لمنع التغيرات الأيضية.

تحضير العينة لدراسات التمثيل الغذائي لقياس الطيف الكتلي أحادي الخلية: غسل الخلايا المركبة والتبريد والتجفيف والتخزين

تعلم إعداد عينات الأنسجة والسوائل لتحليل طيف الكتلة Ambient Mass Spectrometry بدون معالجة مسبقة. هذه التقنية تتيح تحليل العينات الحيوية في دقيقة واحدة مع الحفاظ على المكونات البيولوجية.

إعداد عينة لمسبار Electrospray قياس الطيف الكتلي

استكشف المزيد من الفيديوهات