Name: استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: اكتشف نموذج غشاء الكوريوالانتويك للدجاج لدراسة أورام النساء والمسالك البولية. يتيح هذا النظام نموًا سريعًا للأورام في بيئة متسامحة مناعيًا لاختبار العلاجات المبتكرة بفعالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويود المؤلفان أن يشكرا الدكتور فويوهيكو تامانوي وبينه فو على التدريب الأولي على هذه الطريقة. وكانت المناقشات مع الدكتورة إيفا كوزيوليك مفيدة في تحسين هذا النهج وحظيت بتقدير كبير. لم يكن هذا العمل ممكناً بدون تمويل من المصادر التالية: زمالة ما بعد الدكتوراه في برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ (27FT-0023، إلى ACS)، وزارة الدفاع (وزارة الدفاع) برنامج أبحاث سرطان المبيض (W81XWH-17-1-0160)، NCI/NIH (1R21CA216770)، برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ جائزة تجريبية عالية التأثير (27IR-0016)، والدعم المؤسسي في جامعة كاليفورنيا، بما في ذلك منحة بذور JCCC (NCI/NIH P30CA016042) ومنحة 3R من مكتب نائب المستشار للبحوث إلى LW.

<ol><li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li>
<li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tissue+models+in+cancer+research%3A+looking+beyond+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models & Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li>
<li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Models+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%3A+Mechanisms+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li>
<li>Howlader, N., et al. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/ (2018).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li>
<li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology%2C+medicine+and+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li>
<li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li>
<li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay%3A+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935(2015).</li>
<li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Kavaliauskaitė, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12(2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay%2C+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li>
<li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otolaryngology+-+Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head & Neck Surgery. 45 (1), 26(2016).</li>
<li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815(2011).</li>
<li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li>
<li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells%3A+a+platform+for+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686(2017).</li>
<li>Majerník, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004(2019).</li>
<li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28(2018).</li>
<li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339(2014).</li>
<li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb%2Fc+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li>
<li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201(2017).</li>
<li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Urologic+Oncology%3A+Seminars+and+Original+Investigations%22%5BJournal%5D)">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li>
<li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991(2017).</li>
<li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li>
<li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+-+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods & Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li>
</ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

توسيع الورم وتطعيم باستخدام نموذج CAM يسمح نمو الورم أسرع ويمكن ملاحظته مباشرة من الموجودة في نماذج الحيوانات الحي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن التكاليف تكون أقل بكثير بمجرد الانتهاء من الشراء الأولي للمعدات، لا سيما بالمقارنة مع تكلفة الفئران التي لا تنقصها المناعة. تسمح الحالة الأولية المنقوصة لأجنة الدجاج بسهولة بتطعيم أنسجة الإنسان والمورين. حتى مع هذه القوة، نموذج CAM لديها قيود. كما أن الوقت القصير الذي يمكن أن يكون له فائدة يمكن أن يكون ضارًا إذا كان هناك ما يبرر إجراء دراسات علاجية طويلة الأجل. يمكن أن تؤدي الحالة الم...

وقد عملت الفئران ككائن تقليدي نموذجي لدراسة الأمراض البشرية، بما في ذلك الأورام الخبيثة. كما الثدييات، فإنها تشترك في العديد من أوجه التشابه مع البشر. وقد سمحت درجة عالية من التشابه الجيني التلاعب المعدلة وراثيا من جينوم الماوس لتوفير نظرة هائلة في السيطرة الجينية للأمراض البشرية1. وقد أدت الخبرة الواسعة في التعامل مع الفئران وتجريبها في كونها النموذج المفضل للبحوث الطبية الحيوية. ومع ذلك ، بالإضافة إلى المخاوف الأخلاقية والعلمية بشأن نماذج المورين ، فإنها يمكن أن تكون مكلفة للغاية وتستغرق وقتًا طويلاً2،3. يمكن أن يستغرق تطور الأورام أسابيع أو حتى أشهر. السكن في مؤسسة نموذجية وحدها يمكن أن تعمل في مئات إلى آلاف الدولارات في حين أن الأورام تتطور. سرطان المبيض هو مثال على هذا العيب لأن نموه في نماذج مورين يمكن أن يستغرق أشهرا بسهولة. التأخير في التقدم البحثي يحتمل أن تؤثر على مرضى سرطان المبيض منخفضة باستمرار 5 سنوات معدل البقاء على قيد الحياة من 47٪ فقط (أي زيادة في البقاء على قيد الحياة فقط 10٪ على مدى 30 عاما)4. وبالمثل، تشكل سرطانات المسالك البولية (سرطانات الكلى والبروستاتا والمثانة) 19% من جميع حالات السرطان في الولايات المتحدة و11% من الوفيات المرتبطة بالسرطان4. وهكذا، فإن رواية في الجسم الحي لنهج لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية يمكن أن توفر مختبر الكثير من الوقت، والعمل، والمال، حتى لو تم تطبيق هذا النموذج فقط على تجارب الفحص الأولي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤثر تسارع نتائج البحوث الناتج عن ذلك بشكل كبير على 177,000 شخص يتم تشخيصهم بهذه السرطانات سنويًا.
نموذج كام الدجاج يقدم العديد من المزايا التي تعالج القضايا المذكورة أعلاه. نموذج شعبي لدراسة تولد الأوعية5،6، غزو الخلايا السرطانية7،8، والانبثاث7،9، وقد تم بالفعل استخدام نموذج الفرخ الجنين CAM لدراسة العديد من أشكال السرطان ، بما في ذلك الورم الدبقي10،11،12، سرطان الخلايا الحرشفية الرأس والرقبة13،14، سرطان الدم15،16، سرطان البنكرياس17، و سرطان القولون والمستقيم18. بالإضافة إلى ذلك، تم إنشاء نماذج CAM للورم الأرومي العصبي19، سرطان الغدد الليمفاوية بيركيت20، سرطان الجلد21، والفيساركوما القطط22. وقد قدمت الدراسات السابقة أيضا تطعيم سرطان المثانة23 وخطوط خلايا سرطان البروستاتا24، ولكن مع تفاصيل بروتوكول محدودة. ليس فقط البيض أرخص بكثير من الفئران ، ولكنها تنتج أيضا نتائج قابلة للاستنساخ للغاية25،26. أنها تظهر تطور الأوعية الدموية السريع، ويمكن أن يحدث تطعيم الورم في أسرع بضعة أيام وتصور طوليا من خلال النافذة المفتوحة. مع الإطار الزمني 21 يوما بين تخصيب البويضة والفقس، يمكن الانتهاء من التجارب في غضون أسابيع قليلة. وعلاوة على ذلك، فإن انخفاض التكلفة، ومحدودية الاحتياجات السكنية، وصغر الحجم يسمحان بسهولة بإجراء تجارب واسعة النطاق من شأنها أن تكون مانعة لدراسات الفئران.
لذلك ، سعينا إلى تحسين نموذج CAM لتطعيم سرطانات أمراض النساء والمسالك البولية. نظرًا لحالة نقص المناعة لجنين الدجاج المبكر27، يمكن زرع كل من الخلايا الماوسية والبشرية بسهولة. على هذا النحو، نجحنا في تطعيم سرطانالمبيض والكلى والبروستاتا والمثانة. لكل من هذه الأنواع من الأورام, CAM يقبل بسهولة المورين المنشأة و / أو خطوط خلايا الورم البشري. الأهم من ذلك، يمكن أن الأنسجة الورم البشري الأولية حصادها حديثا أيضا إينجرافمنالمن الخلايا المهضمة أو قطع من الأنسجة الصلبة مع معدلات عالية من النجاح. كل من هذه الأنواع السرطان ومصادر الخلايا يتطلب التحسين، والتي نشارك هنا.

<table><tbody><tr><td>-010 تفلون (PTFE) أبيض 55 Duro Shore D O حلقات</td><td>O-Ring Store</td><td>TEF010</td><td>حلقة غير لاصقة لبذر الخلايا. 1/4 "معرف × 3/8" OD × 1/16 "CS بولي تترافلورو إيثيلين (PTFE).</td></tr><tr><td>C4-2</td><td>ATCC</td><td>CRL-3314</td><td>خط خلايا سرطان البروستاتا البشري.</td></tr><tr>كانت خلايا <td>CWR22Rv1</td><td></td><td></td><td>CWR هدية لطيفة من الدكتور ديفيد أجوس (كيك ميديسن بجامعة جنوب كاليفورنيا)</td></tr> <tr><td>السيتوكيراتين 8/18 الجسم المضاد (C-51)</td> <td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-44929-0.02mg</td><td>تستخدم عند تخفيف 1: 100 للتحليل الكيميائي المناعي لأورام CAM في المبيض البشري.</td></tr><tr><td>D-Luciferin Firefly ، ملح البوتاسيوم</td><td>Goldbio</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>مقص التشغيل الدقيق ؛ منحني; حاد حاد. طول الشفرة 30 مم ؛ 4-3 / 4 بوصة. الطول الكلي</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS6703</td><td>يتم توفير هذا كمثال. أي مقص منحني مماثل سيعمل أيضا.</td></tr><tr><td>Dremel 8050-N / 18 Micro 8V Max Tool Kit</td><td>Dremel</td><td>8050-N / 18</td><td>تحتوي هذه المجموعة على جميع الأدوات اللازمة.</td></tr><tr><td>بيض الدجاج المخصب (رود آيلاند أحمر - بني ، درجة المختبر)</td> <td>AA Lab Eggs Inc.</td><td>غير متاح</td> يجب <td>تحديد مورد البيض المحلي ، لأن هذا المورد يسلم إقليميا فقط.</td></tr><tr><td>HT-1376</td><td>ATCC</td><td>CRL-1472</td><td>خط خلايا سرطان المثانة البشري.</td></tr><tr><td>Hovabator Genesis 1588 مستودع حاضنة البيض الفاخرة كومبو كيت</td><td></td><td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td><td>يمكن استخدام حاضنات بيض أخرى ، ولكن يجب التحقق من موثوقيتها. بعد الزرع ، يمكن أيضا استخدام حاضنة خلية مع تعطيل ثاني أكسيد الكربون.</td></tr><tr><td>ID8</td><td></td><td></td><td>غير متوفر تجاريا ، يرجى الاطلاع على PMID: 10753190.</td></tr><tr><td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td><td>Incubator Warehouse</td><td>1102</td> يمكن <td>استخدام شموع أخرى ؛ ومع ذلك ، يفضل هذا من بين تلك التي اختبرناها. يتم تضمين هذه الشمعة في مجموعة الحاضنة المذكورة أعلاه.</td></tr><tr><td>ملقط القزحية ، 10 سم ، منحني ، مسنن ، أطراف 0.8 مم</td><td>أداة الدقة العالمية</td><td>15915</td><td>يتم توفير هذا كمثال. أي ملقط منحني مماثل سيعمل أيضا. تم استخدام العديد من العلامات التجارية لهذه الطريقة.</td></tr>توزيع <tr><td>Isoflurane</td><td>Clipper</td><td>0010250</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II في الجسم الحي نظام</td> التصوير <td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Membrane Matrix HC ؛ </td> حل <td>مصفوفة Corning</td><td>354248</td><td>خارج الخلية</td>الخالي من LDEV</tr><tr><td>خط</td><td></td><td></td><td>خلايا سرطان البروستاتا في الفئران.</td></tr>وحدة <tr><td>تحكم ماصة XP المحمولة</td><td>Drummond Scientific</td><td>4-000-101</td><td>ستكون أي وحدة تحكم ماصة مماثلة مناسبة.</td></tr><tr><td>PrecisionGlide الإبر تحت الجلد</td><td>BD</td><td>305196</td><td>هذا مقدم كمثال. أي إبرة 18G ستعمل بالمثل.</td></tr><tr><td>RENCA</td><td>ATCC</td><td>CRL-2947</td><td></td></tr><tr><td>أدوات العلوم الدقيقة ملقط Semken</td><td></td><td>11008-13</td><td>يتم توفير هذا كمثال. سيكون من المناسب أي ملقط مماثل أو نمط آخر يناسب تفضيل الباحث.</td></tr><tr><td>SKOV3</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td>خط خلايا سرطان المبيض البشري.</td></tr><tr><td>ملقط العينة</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>72914</td><td>هذا مقدم كمثال. يبلغ طول الملقط المستخدم لسحب الغلاف بعيدا للتصوير الحيوي حوالي 12.8 سم مع أطراف بعرض 3 مم.</td></tr><tr><td>كرات قطنية معقمة</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-885</td><td>هذا مقدم كمثال. أي كرات قطنية معقمة تكفي.</td></tr><tr><td>قضبان التحريك مع شرطي مطاطي ؛ قطر 5 مم ، 6 بوصات طول</td><td>United Scientific Supplies</td><td>GRPL06</td><td>يتم توفير هذا كمثال. أي قضبان تحريك زجاجية مماثلة ستعمل أيضا.</td></tr><tr><td>T24</td><td>ATCC</td><td>HTB-4</td><td>خط خلايا سرطان المثانة البشرية.</td></tr><tr><td>Tegaderm ضمادة شفافة نمط الإطار الأصلي 2 3/8 بوصة × 2 3/4 بوصة</td> <td>أطباق زراعة الأنسجة Moore Medical</td><td>21272</td><td></td></tr><tr><td>، قطر 10 سم</td><td></td><td>Corning 353803</td><td>يتم توفير هذا كمثال. يمكن استخدام أي طبق معقم مماثل بطول 10 سم. علاج زراعة الأنسجة ليس ضروريا.</td></tr><tr><td>أنابيب مختبر Tygon Clear - جدار 1/4 × 3/8 × 1/16 (50 قدما)</td> <td>Tygon</td><td>AACUN017</td><td>يتم توفير هذا كمثال. أي أنبوب مماثل الحجم سيعمل أيضا.</td></tr></tbody></table>

استخدام غشاء chorioallantoic الدجاج في نموذج vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

نماذج الماوس هي الاختبارات القياسية في دراسات السرطان في الجسم الحي. ومع ذلك، أدت التكلفة والوقت والاعتبارات الأخلاقية إلى دعوات لبديل في نماذج السرطان في الجسم الحي. يوفر نموذج غشاء الدجاج (CAM) بديلًا سريعًا وغير مكلف يسمح بالتصور المباشر لتطور الورم ومناسب للتصوير في الجسم الحي. على هذا النحو، سعينا لتطوير بروتوكول الأمثل لتطعيم الأورام النسائية والمسالك البولية في هذا النموذج، الذي نقدم هنا. ما يقرب من 7 أيام بعد الإخصاب ، يتم نقل خلية الهواء إلى الجانب الوعائي من البيض ، حيث يتم إنشاء فتحة في القشرة. ثم يمكن أن الأورام من المورين وخطوط الخلايا البشرية والأنسجة الأولية أن تتطعيم. وعادة ما تزرع هذه في خليط من مصفوفة خارج الخلية والمتوسطة لتجنب التشتت الخلوي وتوفير الدعم الغذائي حتى الخلايا تجنيد إمدادات الأوعية الدموية. قد تنمو الأورام بعد ذلك لمدة تصل إلى 14 يومًا إضافيًا قبل تفقيس البيض. من خلال زرع الخلايا المنقولة بشكل ثابت مع لوسيفيراز اليراعة ، يمكن استخدام التصوير الحيوي للكشف الحساس عن نمو الورم على الغشاء والخلايا السرطانية المنتشرة في جميع أنحاء الجنين. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الورم والغزو والانبثاث والفعالية العلاجية. نموذج CAM الدجاج يتطلب وقتا أقل بكثير والموارد المالية بالمقارنة مع نماذج المورين التقليدية. نظرًا لأن البويضات لا تُحصى المناعة وتتسم بالمناعة، فمن المحتمل أن يتم زرع الأنسجة من أي كائن حي دون الحيوانات المعدلة وراثياً المكلفة (مثل الفئران) اللازمة لزرع الأنسجة البشرية. ومع ذلك، فإن العديد من مزايا هذا النموذج يمكن أن تكون أيضا القيود، بما في ذلك وقت توليد الورم القصير وحالة مناعة/مناعة متسامحة. بالإضافة إلى ذلك، على الرغم من أن جميع أنواع الأورام المعروضة هنا في engraft نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج، يفعلون ذلك مع درجات متفاوتة من نمو الورم.

حتى الآن ، وجدنا أن هذه الطريقة في الزرع ناجحة لسرطان المبيض والكلى والبروستاتا والمثانة. تم تحسين كل منها لتحديد شروط محددة للزرع ، على الرغم من أنه قد تكون هناك مرونة. من أنواع الورم المختبرة ، كان نمو سرطان المبيض أقل وضوحًا ولا يظهر عادة ً دون مساعدة من التصوير الحيوي(الشكل 1). ومع ذلك ، يمكن الشعور بتصلب CAM مع ملقط في مجال الزرع. وهذا قد يساعد على تحديد نمو الورم ممكن في غياب التصوير الإضاءة الحيوية, على الرغم من أن هناك حاجة إلى مزيد من التحقق من خلال ...

نقدم نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج كبديل، قابل للزرع، في نموذج الجسم الحي لتطعيم خطوط خلايا سرطان النساء والمسالك البولية والأورام المشتقة من المريض.

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

ويمكن استخدام engraftment من الأورام على الغشاء الكوراليالنتويكي الدجاج، أو CAM، لدراسات الأورام، وفعالية العلاج أو عبر الخلوية. هذه الطريقة تسمح فعالة من حيث التكلفة نمو الورم السريع في المُناعته للمناعة في وضع الجسم الحي. باستخدام نموذج CAM، يمكن اختبار الأساليب العلاجية الجديدة بسرعة باستخدام خطوط الخلايا أو حتى عينات الورم المريض.الجوانب الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هي ضمان تشكيل CAM السليم وعدم تعطيل CAM أو الأوعية الدموية أثناء فتح البيض. في يوم النمو سبعة أو ثمانية عندما تم تطوير CAM بالكامل، إيقاف دوار البيض ووضع ما يقرب من واحد إلى ثلاث بيضات في رف البيض في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. مع إطفاء الأنوار ، ضع شمعة بيض ضد قشرة البيض لتحديد وتحديد موقع خلية الهواء لبيضة واحدة ، ثم تحريك شمعة البيض فوق القشرة للعثور على شبكة كبيرة من الأوعية الدموية ، وتناوب البيضة حسب الضرورة.سوف تتفرع الأوعية الدموية المثالي بالقرب من منتصف البيض. استخدم علامة لتتبع الأوعية الدموية لاستخدامها في الزرع. بعد العودة على ضوء في غطاء محرك السيارة، واستخدام أداة دوارة لاسلكية مزودة حجر طحن كربيد السيليكون لحفر حفرة صغيرة في قذيفة مباشرة فوق مركز الخلية الهوائية.عندما تم إزالة معظم قذيفة ولكن مع غشاء داخلي أبيض سليمة، حفر ثقب صغير آخر حيث سيتم فتح نافذة الأوعية الدموية كما أظهرت للتو. عندما تكون الحفرة الثانية جاهزة، استخدم إبرة قياس 18 لاختراق الغشاء الداخلي الأبيض بلطف فوق خلية الهواء والأوعية الدموية مع الحرص على أن الغشاء الداخلي الأبيض، ولكن ليس CAM، يتم تعطيله في جميع أنحاء المنطقة المحفورة بأكملها. مع ضوء غطاء محرك السيارة مرة أخرى، استخدم شمعة البيض للتحقق من أن خلية الهواء قد تم نقلها من نهاية البيض إلى المنطقة على الأوعية الدموية.إذا لزم الأمر، ضع فراغ أنابيب إدراجها في وحدة تحكم ماصة حول ثقب على خلية الهواء الأصلي وتطبيق بلطف شفط في رشقات نارية قصيرة لتحريك خلية الهواء. وضع علامة على الخطوط العريضة للموقع الجديد من خلية الهواء ما يقرب من 0.5 سنتيمتر داخل الحدود CAM الهواء وإصلاح قطعة من التعبئة الشريط فقط كبيرة بما يكفي لتغطية ثقب على خلية الهواء الجديدة. بعد إعداد البيضين الآخرين كما هو موضح للتو ، أعد البيض إلى الحاضنة وفتح أي بيض إضافي للتجربة في مجموعات من واحد إلى ثلاثة كما هو موضح.عندما تم فتح كل البيض، نقل واحد إلى ثلاث بيضات مع خلايا الهواء المنقولة إلى رف البيض في مجلس الوزراء السلامة الحيوية واستخدام أداة دوارة لاسلكية مزودة عجلة قطع دائرية لقطع خط صغير على حدود الخلية الهوائية تماما من خلال الخلية دون تعطيل كام أو الأوعية الدموية. باستخدام مقص منحني، قطع حول خلية الهواء المتبقية لإنشاء نافذة في قذيفة والتحقق من صلاحية الجنين. سوف الأجنة قابلة للحياة عرض الأوعية الدموية واسعة النطاق، الألبومين واضحة، حركة الجنين، و / أو ضربات القلب مرئية.في الأجنة غير القابلة للحياة، قد تظهر كام مبهمة مع عدد قليل من الأوعية، إن وجدت، وقد تكون الأجنة صغيرة أو غائبة دون حركة أو نبضات قلب. باستخدام ملقط Semkin، سحب قطع صغيرة من القطن من كرة القطن العقيمة ولطخ بلطف سطح كام من الأجنة قابلة للحياة لإزالة أي الغبار قذيفة والحطام، ثم تغطية فتحة قذيفة مع قطعة ربع من ستة في سبعة سنتيمترات فيلم شفافة خلع الملابس دون لمس CAM وإعادة البيض إلى الحاضنة مع نافذة مفتوحة تواجه. استخدام قطعة من رف البيض، حافة دوار البيض، أو عنصر آخر مناسب لدعم أي البيض التي تبقي المتداول.لإعداد تعليق الخلايا السرطانية لزرعها، حصاد الخلايا من ثقافة الخلايا السرطانية من الفائدة ورواسب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. استلهمت من فوق الطاقة و إعادة ميكانيكيا الخلايا في الوسط المتبقية. ضع تعليق الخلية على الجليد واستخدم ماصة لقياس حجم الخلايا في المتوسط.ثم إعادة تركيز الخلايا بتركيز من واحد إلى مليوني خلية في 20 إلى 100 ميكرولترات من المتوسطة تستكمل مع 2.7 إلى 4 ملليغرام لكل ملليلتر مصفوفة خارج الخلية وأي عوامل نمو أو إضافات أخرى من الفائدة. لزرع الخلايا السرطانية، وذلك باستخدام حلقة غير عصا، وضع ما يصل إلى ست بيضات ليتم زرعها على رف البيض ولفة حواف فيلم شفاف خلع الملابس نحو النافذة المفتوحة لإزالة الفيلم من قذائف. تحقق من ما إذا كان البيض قابلًا للحياة وصحيًا.سوف البيض المثالي يكون وعاء كبير مع أصغر متفرعة السفن داخل وسط المنطقة المفتوحة. باستخدام ملقط قزحية منحنية منحنية، وضع حلقة غير عصا العقيمة على CAM على السفينة بشكل مثالي على نقطة فرع. استخدام قضيب اثارة الزجاج المعقم لbrade بلطف CAM والماصات تعليق خلية السرطان في وسط الحلبة.عندما تم تسليم جميع الخلايا، ختم الافتتاح مع قطعة ربع من ستة في سبعة سنتيمترات فيلم شفافة خلع الملابس وتسمية البيض مع تعيين زرع المناسبة. ثم وضع البيض بشكل آمن في الحاضنة مع فتح قذيفة التي تواجه تستقيم. لزرع الخلايا السرطانية دون استخدام حلقة غير لاصقة، يُطرّع تعليق الخلية إلى طرف ماصات بحجم مناسب ويحمل الجزء العلوي من الحافة إخراج طرف الماصات بعناية ووضع الطرف أفقيًا في طبق زراعة الأنسجة المعقم 10 سنتيمتر.بعد تحميل النصائح ، ضع الطبق في حاضنة درجة 37 درجة مئوية لمدة 15 إلى 30 دقيقة ، والتحقق من البلمرة بعد 15 دقيقة. وهناك كمية صغيرة من السائل تسرب عادة كما يتم وضع كل طرف في الطبق. استخدم هذا السائل لتقدير مدى البلمرة داخل الطرف.عندما تكون المصفوفة جاهزة، ضع طرفًا واحدًا على ماصة بحجم مناسب وينكض المكبس لإجبار تعليق الخلية البلمرة جزئياً على CAM بشكل مثالي على نقطة متفرعة من وعاء كبير متطور. باستخدام هذه الطرق، كل من الإنسان و murine خطوط سرطان المبيض وقطع الورم الأولية أسفرت عن نجاح engraftment من الأورام مع morphologies تتفق مع تلك التي لوحظت في نماذج أخرى في الجسم الحي. من أنواع الأورام المختبرة، كان نمو سرطان المبيض أقل وضوحًا بكثير وعادةً ما لا يظهر دون مساعدة تصوير الإضاءة الحيوية.ويمكن أيضا أن تكون آثار إضافة عوامل النمو أو الهرمونات في وقت زرع اختبار باستخدام هذه الطرق. لسرطان الكلى، زرع خلايا سرطان الخلايا الكلوية واضحة من خطوط الخلايا المنشأة أو قطع من أورام الكلى البشرية الأولية تنتج سريعة، وتشكيل الورم قوية. وعلاوة على ذلك، تم استخدام العديد من الإنسان وsine البروستاتا خطوط الخلايا السرطانية والخطوط البشرية سرطان الخلايا وقطع الورم الأولية لإنشاء الأورام باستخدام هذا النموذج.من الأهمية بمكان تجنب تعطيل CAM والأوعية الدموية والتأكد من أن CAM لا تلتزم بـ shell أثناء فتح النافذة. بعد نجاح engraftment، يمكن استخدام نموذج CAM لتقييم الفعالية العلاجية للعلاجات ذات الاهتمام أو التفاعلات بين أنواع الخلايا المختلفة داخل الورم.

using-chicken-chorioallantoic-membrane-vivo-model-to-study

Research

JoVE Journal

Cancer Research

أبحاث السرطان

في هذا الفيديو ، نصف تقنية لفتح قشر بيضة بيضة دجاج مخصبة لفضح غشاءها المشيمي أو CAM الذي يحمل شبكة من الأوعية الدموية المتفرعة. يمكن استخدام CAM المكشوف في نمذجة ورم البيضا.

نوافذ البيض: طريقة لفتح قشرة بيضة الدجاج المخصبة لفضح الأوعية الدموية الغشائية المشيمية

في هذا الفيديو ، نصف زرع الخلايا السرطانية على غشاء المشيمة للدجاج لتوليد نموذج في البيضا. نجح النموذج في تطعيم خلايا سرطان المبيض لدراسة تطور سرطان أمراض النساء.

نمذجة السرطان القائمة على غشاء المشيمة الدجاج: نموذج داخل البيض لدراسة تكوين أورام الخلايا السرطانية والورم الخبيث

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن الخلايا السرطانية عن طريق الوريد في الأوعية الدموية لغشاء المشيمة للدجاج لتوليد نموذج ورم خبيث لسرطان الطب التكميلي. تشكل الخلايا المحقونة في النهاية مستعمرات خلايا سرطانية مفردة متناثرة ، مما يسمح بدراسة غزو السرطان ورم خبيث.

الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في الأوعية الدموية الغشائية المشيمية للدجاج: إجراء لإنشاء نموذج سرطان الغشاء المشيمي لدراسة غزو السرطان والورم الخبيث

في هذا الفيديو ، نصف طريقة الزراعة المشتركة للعقد الجذرية الظهرية والخلايا السرطانية على غشاء المشيمة أو CAM لدراسة الغزو حول العصب.

غشاء المشيمة أو نموذج ورم CAM: طريقة في البيض لمحاكاة الغزو حول العصب للخلايا السرطانية

يوضح هذا الفيديو عزل الغشاء المشيمي الحامل للورم عن جنين الدجاج. يمكن استخدام CAM المحصود لمزيد من التطبيقات النهائية.

حصاد غشاء الفصيلة النارية للكتيكوت: طريقة لعزل غشاء المشيمة اليمي الحامل للورم من بيض الدجاج

غشاء المشيمة (CAM) يعاني من نقص المناعة والأوعية الدموية بدرجة عالية ، مما يجعله نموذجا طبيعيا في الجسم الحي لنمو الورم وتكوين الأوعية. في هذا البروتوكول ، نصف طريقة موثوقة لزراعة أورام سرطان الخلايا الكبدية الوعائية ثلاثية الأبعاد (HCC) باستخدام مقايسة CAM.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; الفرخ مشيمائي غشاء (CAM) الفحص بمثابة طعم أجنبي نموذج فعال لسرطان الكبد

الغزو الحولي هو نمط ظاهري عدواني لسرطان الخلايا الحرشفية للرأس والرقبة والأورام الأخرى. وقد استخدم نموذج الغشاء chorioallantoic كتكوت لدراسة تكوين الأوعية الدموية, غزو السرطان, والانبثاث. هنا نبين كيف يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم الغزو حول العصب في الجسم الحي.

الفرخ الغشاء تشوريوالانTOك في نموذج فيفو لتقييم الغزو في ما قبل البعد العصبي في سرطان الرأس والرقبة

سرطان الخلايا الكلوية النقيلي ة الخلايا هو مرض دون نموذج الحيوان شاملة للتحقيق الشامل قبل السريرية. يوضح هذا البروتوكول نموذجين جديدين للحيوانات لهذا المرض: نموذج الماوس المزروع تقويمًا للموضع ونموذج غشاء الدجاج chorioallantoic ، وكلاهما يوضح انبثاث الرئة يشبه الحالات السريرية.

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

يصف هذا البروتوكول ثلاث طرق حول كيفية الحصول على أجنة الدجاج التي يبلغ عمرها من 5 إلى 8 أيام واستخدامها وغشاءها المشيمي (CAM) كنموذج في الجسم الحي لدراسة التصوير بالموجات فوق الصوتية المعزز بالتباين وتوصيل الأدوية بوساطة الفقاعات الدقيقة.

تحضير أجنة الدجاج ex ovo والأوعية الغشائية المشيمية كما هو الحال في نموذج الجسم الحي للتصوير بالموجات فوق الصوتية المعززة بالتباين ودراسات توصيل الأدوية بوساطة الفقاعات الدقيقة

هذه طريقة فعالة لفحص المكثفات أو محركات الانبثاث السرطاني. يتم حقن الخلايا ، التي يتم تحويلها باستخدام مكتبة التعبير ، في الأوعية الدموية للغشاء المشيمي للدجاج لتشكيل مستعمرات منتشرة. يتم استئصال المستعمرات التي انخفضت أو زادت من الغازية ، وتوسيعها ، وإعادة حقنها لتأكيد النمط الظاهري ، وأخيرا ، تحليلها باستخدام تسلسل الإنتاجية العالية.

اكتشاف المنظمين النقيلي باستخدام نموذج الغشاء السريع والكمي داخل الفرخ Chorioallantoic

هنا ، نصف بروتوكولا لتطوير نموذج تطعيم الأغشية المشيمية (CAM) لأنسجة المبيض البشرية ونوضح فعالية التقنية ، والإطار الزمني لإعادة التوعي بالكسب غير المشروع ، وصلاحية الأنسجة عبر فترة تطعيم مدتها 6 أيام.

نموذج غشاء المشيمية المشيمية (CAM) كأداة لدراسة زراعة أنسجة المبيض

اكتشف نموذج غشاء الكوريوالانتويك للدجاج لدراسة أورام النساء والمسالك البولية. يتيح هذا النظام نموًا سريعًا للأورام في بيئة متسامحة مناعيًا لاختبار العلاجات المبتكرة بفعالية.

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

استكشف المزيد من الفيديوهات