نموذج بينالية أرنب محاكاة جراحة إعادة الأوعية الدموية باستخدام الطعوم الوريد لتقييم فرط التنسج الإيتيمي تحت ضغط الدم الشرياني
مايو 15, 2020
يهدف هذا البروتوكول إلى خلق تضخم تضخم التوعي الوريدي تجريبيًا عن طريق إخضاع الأوردة لضغط الدم الشرياني لتطوير استراتيجيات لتكبير تضخم التوعي الوريدي بعد جراحة إعادة الأوعية الدموية باستخدام طعوم الوريد.
يوفر بروتوكولنا نموذجًا سهلًا وفعالًا من حيث التكلفة وقابلة للاستنساخ والسريرية ذات الصلة للباحثين في مجال تضخم التنسج الوريدي. بروتوكولنا متوازن اقتصادياً، سريرياً، وتقنياً. ولذلك, فمن المستحسن للغاية للباحثين الذين يرغبون في تطبيق نتائجها في المختبر على وضع في الجسم الحي.
ونحن نعتقد أن بروتوكول لدينا يمكن تطبيقها على نموذج أكبر لتطوير استراتيجيات العلاج الجديدة في أمراض القلب الإقفارية وأدنى الأطراف. بروتوكولنا هو أساسا ذات الصلة في مجال جراحة القلب والأوعية الدموية. ومع ذلك، فإنه يمكن أيضا أن تستخدم لمعالجة التغيرات التنكسية في الناسور الشرياني الوريدي في المرضى الذين يعانون من مرحلة نهاية مرض الكلى.
بعد التخدير الموضعي، والمضادات الحيوية الوقائية مسكن الإدارة، وتطهير موقع الجراحة مع 10٪ povidone-اليود. وجعل شق 50 إلى 60 ملليمتر مع مشرط الجراحية في منطقة عنق الرحم من الأرانب البيضاء اليابانية الذكور تخدير. تشريح بصراحة الأنسجة تحت الجلد واللفافة لفضح جزء 20 إلى 30 ملليمتر من الوريد الوداجي.
واستخدم 4-0 خياطة حريرية لـ ligate جميع فروع الوريد المكشوف. ضع خياطة حريرية 2-0 حول الأوردة الداخلية والخارجية والوديجة واصنع شقًا ملليمترًا واحدًا في الجدار الوريدي للجانب القعري من الوريد. أدخل قسطرة بالون 2-الفرنسية من قطع نحو الجانب القريب من الوريد.
وligate 2-0 خياطة الحرير في مواقع هد الأوردة الوداجي. نفخ البالون مع 200 ميكرولترات من الهواء. واستخدم البالون لتحريم الوريد ثلاث مرات لتقشر البطانية.
بعد المقطع الثالث ، ligate الطرف القريب من الوريد وقطع الوريد في الموقع القعر. ثم أدخل قسطرة عن طريق الوريد قياس 20 في الوريد المقطوع من مجرد إلى الاتجاه القريب، وقطع الوريد في الموقع القريب. لتداخل الشريان السباتي مع الوريد الوداجي الحصاد, فضح جزء 20 إلى 30 ملليمتر من الشريان السباتي ipsilateral.
وفصل الشريان بعناية عن الوريد القريب والأعصاب. Ligate جميع فروع الوريد المكشوف مع خياطة الحرير 4-0. و يتم عن طريق الحقن الوريدي 200 وحدة دولية لكل كيلوجرام من الصوديوم الهيبارين
المشبك نهايات القريبة وقطر من الشريان مع المشابك المطاطية الجراحية. وقطع الشريان بين المشابك. حقن المالحة العادية في الشريان السباتي المحصن proximally وdistally لتكتل الشريان.
ووضع وريد الحصاد بالقرب من الشريان إلى أنستوموس الوعاء بطريقة عكسية من النهاية إلى النهاية. إلى أن ينمّي الطرف القريب من الوريد إلى نهاية الشريان، ضع غرزتين مرساة من 8-0 البولي بروبلين في الموقع والموقع المقابل. أضف غرز الجانب العلوي من خط الورم بين غرز المرساة.
الوجه الشريان والرقي الكسب غير المشروع رأسا على عقب. وأضيف غرز على الجزء المتبقي من خط الورم بعد ذلك، إزالة القسطرة الوريدية من الوريد ومشابك الكسب غير المشروع الوريدي بشكل وكيلي.
Declamp الشريان السباتي distally. ولاحظ ما إذا كان الكسب غير المشروع الوريدي يتوسع تدريجيا. استخدام 8-0 البولي بروبلين توقف خياطة، وsastomose نهاية القعر إلى نهاية قريبة من الشريان.
وdelamp الشريان للتحقق من وجود نزيف من مواقع مرض الاستئصال. وأخيراً، ligate الشريان السباتي الداخلي مع خياطة الحرير 4-0 لمحاكاة حالة الجريان السطحي الفقراء وتسهيل تضخم التنسج في الايحاء. ثم تنظيف الجرح مع المالحة.
أغلق الشق مع 3-0 بوليجلاكتين 910 في طبقات. والسماح الأرنب للتعافي تماما مع الرصد قبل العودة إلى قفص الحيوان المنزل. في هذه الصورة التمثيلية ، يمكن ملاحظة تضخم في التنسج في أسبوعين بعد جراحة التشابك الوريدي.
هنا، يمكن ملاحظة الآثار العلاجية للميكرورنا-145 تحميل بولي (حمض اللاكتيك-شارك-الجليكوليك)الجسيمات النانوية على مورفولوجيا فرط التنسج. في الواقع، العلاج مع microRNAs محملة بولي (حمض اللاكتيك شارك الجليكوليك)الجسيمات النانوية يؤدي إلى التوهين كبيرة من تضخم التنسج. بالإضافة إلى ذلك، يكشف المناعة عن كي-67، وهي علامة تكاثرية للخلايا، عن عدد أقل من الخلايا الإيجابية لكي-67 داخل المجموعة المعالجة ميكرورنا-145 التي تشير إلى تغير نمط ظاهري في خلايا العضلات الملساء الوعائية من الحالة التكاثرية غير الناضجة إلى حالة الانقباض الناضجة.
الهدف الرئيسي من بروتوكول لدينا هو تحقيق patency من الكسب غير المشروع المزروع. من المهم أيضا أن نؤكد أن الكسب غير المشروع يتوسع بعد declamping الشريان السباتي.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
يوفر هذا البروتوكول نموذجاً فعالاً من حيث التكلفة وقابلاً للتكرار لدراسة تضخم بطانة الوريد من خلال تعريض الأوردة لضغط الدم الشرياني. وهو مفيد للباحثين الذين يسعون إلى تطوير استراتيجيات علاجية للحالات المتعلقة بأمراض القلب الإقفارية وأمراض الأطراف السفلية.
المكونات الرئيسية للدراسة
مجال العلم
- جراحة القلب والأوعية الدموية
- تضخم البطانة الوريدية
- جراحة إعادة التروية
خلفية علمية
- تعد فرط تنسج البطانة الوريدية من المضاعفات الشائعة التي تلي عمليات ترقيع الأوردة.
- إن فهم الآليات الكامنة وراء هذه الحالة أمر بالغ الأهمية لتحسين النتائج الجراحية.
- قد لا تحاكي النماذج الحالية السيناريو السريري بشكل كافٍ.
- يهدف هذا البروتوكول إلى سد هذه الفجوة من خلال توفير نموذج تجريبي ملائم.
الغرض من الدراسة
- إنشاء نموذج لفرط تنسج البطانة الوريدية.
- تطوير استراتيجيات للتخفيف من هذه الحالة بعد الجراحة.
- تسهيل نقل النتائج المخبرية (in vitro) إلى تطبيقات حيوية (in vivo).
الطرق المستخدمة
- تطبيق ضغط الدم الشرياني على الأوردة.
- تقييم تطور فرط تنسج البطانة.
- تقييم استراتيجيات العلاج المحتملة.
- استخدام نموذج حيواني أكبر لإجراء المزيد من الأبحاث.
النتائج الرئيسية
- يتسم البروتوكول بالتوازن من الناحيتين الاقتصادية والسريرية.
- يتيح الحصول على نتائج قابلة للتكرار وذات صلة بالحالات البشرية.
- تطبيقات محتملة في معالجة التغيرات التنكسية في الناسورات الشريانية الوريدية.
- يشجع على إجراء المزيد من الأبحاث حول الأمراض الإقفارية.
الاستنتاجات
- يمكن لهذا النموذج أن يساعد بشكل كبير في فهم فرط تنسج البطانة الوريدية.
- يعد هذا النموذج أداة قيمة للباحثين في جراحة القلب والأوعية الدموية.
- قد تؤدي الدراسات المستقبلية إلى تحسين استراتيجيات العلاج للمرضى المصابين.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
يتيح هذا النموذج التقييم قبل السريري للاستراتيجيات العلاجية التي تستهدف فرط تنسج البطانة الوريدية، وهو أحد أنماط الفشل الرئيسية في إعادة تروية الطعوم الوعائية. ومن خلال محاكاة التعرض للضغط الشرياني في نظام وريدي بيني يمكن الوصول إليه جراحياً، فإنه يدعم تقليل المخاطر الميكانيكية للتدخلات المضادة للتكاثر قبل إجراء الاختبارات المكلفة على الحيوانات الكبيرة أو الاختبارات السريرية. كما تعزز هذه المنصة الثقة التنبؤية في التحقق من الأهداف الخاصة بتعديل النمط الظاهري للعضلات الملساء الوعائية، مما يوفر معلومات مباشرة لاتخاذ قرارات المتابعة أو التوقف في تطوير العلاجات القلبية الوعائية.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- القيمة العلمية: تتيح استقصاء الفرضيات العلاجية التي تستهدف تحول النمط الظاهري لخلايا العضلات الملساء الوعائية من الحالة التكاثرية إلى الحالة الانقباضية.
- القيمة التشغيلية: توفر نظاماً قابلاً للتكرار داخل الجسم الحي للتحقق من ارتباط الهدف والتأثير الوظيفي للتدخلات الجزيئية مثل إيصال miR-145.
الفحص وتطوير المقايسة
- القيمة العلمية: تُنتج نقاط نهاية نسيجية مرضية قابلة للقياس الكمي (سُمك الطبقة الباطنة، إيجابية Ki-67) لتقييم الاستجابة للجرعة للعلاجات المرشحة.
- القيمة التشغيلية: تدعم توحيد تحضير الطعوم الوريدية والربط الشرياني لضمان قراءات نمطية ظاهري متسقة عبر الدراسات.
الأبحاث الترجمية وما قبل السريرية
- القيمة العلمية: يربط بين النتائج المختبرية (على سبيل المثال، تأثيرات miR-145 على VSMCs) وظروف ضغط الشرايين ذات الصلة الفسيولوجية داخل الجسم الحي.
- القيمة التشغيلية: يسهل المراقبة الطولية لنفاذية الطعم وتطور فرط التنسج، مما يسمح بإجراء دراسات الفعالية الطولية.
تكامل مسارات العمل والعمليات
يندرج هذا النموذج ضمن سلسلة اكتشافات أمراض القلب والأوعية الدموية، حيث يدعم عملية التحقق من الهدف بعد الفحص في المختبر (in vitro) وقبل اختبار الفعالية في مرحلة ما قبل السريرية في نماذج أكبر أو الانتقال إلى التطبيق السريري.
- بيولوجيا الاكتشاف: اختبار الفرضيات الميكانيكية حول مسارات إعادة تشكيل الأوعية الدموية تحت تأثير الإجهاد الميكانيكي المرضي.
- الفحص: تقديم مخرجات نسيجية وكيميائية نسيجية مناعية كمية لترتيب المرشحات العلاجية حسب الأولوية.
- التحليلات: تمكين تحليل القياسات المورفومترية ومؤشر التكاثر (على سبيل المثال، مساحة فرط تنسج البطانة، Ki-67+) لمقارنة تأثيرات العلاج.
- الأبحاث الانتقالية: توفير بيئة طعم وريدي ذات صلة بالمرض لتقييم استمرارية الآلية من المزرعة الخلوية إلى النتيجة على مستوى النسيج.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: إنشاء منصة جراحية موحدة قابلة للتكيف مع أنماط علاجية متعددة (الأحماض النووية، والأدوية، والمواد البيولوجية) لتحسين طعوم الأوعية الدموية.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: يقلل من الغموض الميكانيكي في فشل الطعوم الوعائية من خلال عزل فرط تنسج الغلالة الباطنة كعملية تعتمد على الضغط.
- القيمة التشغيلية: يوفر نموذجاً قابلاً للتكرار وفعالاً من حيث التكلفة مع تدخل جراحي محدود، مما يدعم الدراسات الطولية ويقلل من استخدام الحيوانات.
- القيمة الاستراتيجية: يحسن معايير اتخاذ القرار (الاستمرار أو التوقف) من خلال التنبؤ بمخاطر فشل الطعم سريرياً بناءً على فعالية تخفيف فرط التنسج.
- التأثير على المحفظة البحثية: يتيح تحديد الأولويات للمرشحين العلاجيين للأوعية الدموية الذين يستهدفون تعديل النمط الظاهري للعضلات الملساء، مع مراعاة المخاطر.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في تقنيات الجراحة المجهرية للأوعية الدموية والمفاغرة الوريدية/الشريانية في الثدييات الصغيرة.
- يعتمد على توفر المعدات الجراحية (أدوات الجراحة المجهرية، والخيوط الجراحية، وقساطر البالون، والهيبارين) ومرافق المراقبة ما بعد الجراحة.
- يستلزم بروتوكولات موحدة لاستئصال الوريد، وإزالة البطانة الداخلية، والربط الشرياني لضمان إمكانية تكرار النموذج.
- قد يتطلب التكيف مع نماذج حيوانية أكبر زيادة في حجم الوعاء الدموي، ومقاس الخيط الجراحي، وجرعات مضادات التخثر مع الحفاظ على التعرض للضغط الشرياني.
- يعتمد تقييم النتائج على إمكانيات المعالجة النسيجية والصبغ الكيميائي النسيجي المناعي للنقاط النهائية مثل سماكة البطانة الداخلية وKi-67.
