نموذج تأثير قشري خاضع للرقابة قبل السريرية للنزيف الرضحي والكدمة العصبية

يمكن أن يؤدي النزيف الوحمي الداخلي والالتهاب العصبي المصحوب بكدمة دماغية إلى إصابة ثانوية شديدة في الدماغ. يوضح هذا البروتوكول بالتفصيل نموذج التأثير القشري الذي يتم التحكم فيه بالفأر (CCI) ، مما يسمح للباحثين بدراسة النزيف والكدمة والاستجابات المناعية اللاحقة للصدمة واستكشاف العلاجات المحتملة.

يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الأمراض المرتبطة بالكدمة الدماغية ، بما في ذلك النزيف داخل الجمجمة ، وسمية الحديد ، وموت الخلايا العصبية ، والإصابة المحورية ، والعجز العصبي ، والالتهاب العصبي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن التحكم بسهولة في شدة تلف الدماغ عن طريق التلاعب بالمعلمات الكيميائية الحيوية مثل السرعة وموت التأثير على جهاز CCI. إصابة التحطم القشري البؤري الناجم عن CCI قابلة للتكرار بدرجة كبيرة.

التقنية التجسيمية المناسبة وإجراء بضع القحف من المحددات الرئيسية في إنتاج إصابة دماغية مستقرة وقابلة للتكرار ناتجة عن CCI. بشكل عام ، سيكافح المحقق الجديد في الإجراء من أجل تثبيت الماوس على إطار steriotexic وإجراء بضع القحف المناسب. ستظهر الإجراء السيدة جيه شوان لين ، فني مختبر من مختبري.

ابدأ بتأكيد عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم في للتأكد من تخديره بشكل صحيح. حلق رأس الفأر باستخدام مقصات كهربائية في اتجاه ذيلية إلى منقاري. لكن لا تقليم الشعيرات.

ضع الماوس على الإطار التجسيمي وأدخل قضبان الأذن بعناية في قنوات الأذن ، مع التأكد من تثبيت رأس الماوس بواسطة كلا شريطي الأذن بالتساوي. الحفاظ على التخدير عند واحد إلى 2٪ أيزوفلوران طوال مدة الجراحة. ضع الفازلين على كلتا العينين لمنع الجفاف أثناء الجراحة.

ثم استخدم مسحات قطنية معقمة لتطهير الرأس المحلوق بالبيتادين متبوعا بنسبة 70٪ إيثانول. قم بإدارة 100 ميكرولتر من 0.25٪ بوبيفاكائين تحت الجلد بإبرة أنسولين قياس 31 ، ودلك موقع الحقن برفق لامتصاص أفضل. قم بعمل شق طولي على طول خط الوسط على فروة الرأس بمشرط أو مقص.

ثم استخدم hemostat لسحب الجلد إلى الجانب الأيمن. اترك الجمجمة المكشوفة تجف لمدة دقيقة واحدة. ثم نظف أي دم وأنسجة متبقية على الجمجمة بقطعة قطن معقمة.

تأكد من أن رأس مستوي في المستوى الأفقي وحدد المعالم التشريحية ، Bregma و Lambda ، مع تمييز كلا الموقعين بقلم رصاص. تأكد من أن رأس مستوي في الاتجاه الذيلي عن طريق قياس إحداثيات Z لكل من Bregma و Lambda. استخدم نفس الإجراء لوضع الرأس أفقيا.

استخدم إبرة الأنسولين قياس 31 لتحديد موقع استئصال الترانيكوت. اضبط أصل XY على Bregma وحرك الإبرة بشكل جانبي ثلاثة ملليمترات إلى اليمين. ضع علامة على هذا الموضع كموقع لاستئصال التدوين وارسم دائرة قطرها أربعة ملليمترات على الجمجمة بقلم رصاص.

قم بقص الدائرة المحددة بالقلم الرصاص باستخدام مثقاب صغير عالي السرعة باستخدام التريفين لإنشاء ثقب مفتوح بقطر أربعة ملليمترات. قم بإزالة السديلة العظمية بملاقط واحفظها في محلول ملحي مثلج بارد. اشطف الحفرة برفق بالمحلول الملحي قبل الضغط على سطح الدماغ لوقف النزيف.

على جهاز CCI ، اضبط طرف الاصطدام المستدير بقطر 2.5 مم على زاوية 22.5 درجة. قم بصفر طرف التأثير على السطح الجافوي ، واضبط معلمات التأثير على صندوق التحكم على سرعة أربعة أمتار في الثانية وعمق تشوه يبلغ ملليمترين. اسحب الطرف المعدني.

قم بتفريغ المكبس لتوليد انحشار على الدماغ. ثم ضع قطعة قطن معقمة على المنطقة المصابة لوقف النزيف. استبدل السديلة العظمية وثبتها بأسمنت الأسنان.

أغلق فروة الرأس بلاصق المناديل. ضع الماوس أسفل المصباح الحراري في قفص استرداد نظيف مع الفراش حتى الشفاء التام. تعد التقنية التجسيمية المناسبة وإجراء استئصال التقرن من المحددات الرئيسية في إنتاج إصابة دماغية مستقرة وقابلة للتكرار ناتجة عن CCI.

يتسبب إجراء استئصال التقرن الآلي في الحد الأدنى من الإصابات النسيجية في الدماغ الذي يتم تشغيله بشكل زائف. لوحظت تغيرات في تلف الدماغ وفقدان الجسم الثفني في الأيام 1 و 3 و 7 و 28 بعد CCI. بالإضافة إلى ذلك ، شوهد ضمور الدماغ من جانب واحد على جانب الكدمة في اليوم 28 بعد CCI.

تم الكشف عن الالتهاب العصبي من خلال الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة الإيجابية ل Iba1 وتراكم البلاعم حول حدود منطقة الكدمة. كان من الممكن أيضا اكتشاف النزيف داخل المتني من خلال تلطيخ Ly76 الإيجابي من الأيام الأولى إلى السابعة بعد CCI. لوحظ مزيج من خلايا الدم الحمراء مع مورفولوجيا الخلايا الممزقة والسليمة في اليوم السابع بعد CCI ، مما يشير إلى أن كرات الدم الحمراء قد تم تحللها في هذه المرحلة.

كانت هذه الظاهرة متوافقة مع الملاحظة القائلة بأن ترسب الحديديك كان قابلا للاكتشاف في منطقة الكدمة من الأيام السابعة إلى 28 بعد CCI. لوحظت الخلايا الدبقية الصغيرة والضامة المنشطة في المخطط بعيدا عن موقع الكدمة من الأيام الثالثة إلى 28 بعد CCI ، مما يشير إلى إصابات الجسم الثفني والمخطط. تمهد هذه التقنية الطريق للمحققين لاستكشاف تفاعل الالتهاب العصبي الناجم عن نزيف الدماغ من خلال فهم استجابة الخلايا المناعية ، مثل الخلايا الدبقية الصغيرة ، بعد كدمة النزيف.