الوحشي قرع السائل : نموذج لإصابات في الدماغ لدى الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث إصابة دماغية خفيفة إلى متوسطة في الفئران لنمذجة إصابات الدماغ الرضحية البشرية. يتم تحقيق ذلك عن طريق إجراء استئصال Ccraniectomy أولا. الخطوة الثانية من الإجراء هي إرفاق محور بالجمجمة فوق موقع استئصال التلون.

بعد ذلك ، يتم توصيل نبضة من الماء عبر المحور للحث على إصابة الدماغ. الخطوة الأخيرة من الإجراء هي إزالة المحور وإغلاق الجرح. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر التغيرات المورفولوجية والسلوكية على فترات مختلفة بعد الإصابة من خلال التألق المناعي والفحص المجهري والاختبار المعرفي والحركي.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأنه من الصعب إجراء استئصال التقرن دون التسبب في حدوث خرق في الجافية ، وكذلك إرفاق المحور دون الحصول على الغراء على الجاهية. لذلك ، فإن العرض المرئي لهذه التقنية ذو قيمة كبيرة. سيتم توضيح الإجراء فوكا فني من مختبري ابدأ بإعداد المنطقة الجراحية.

تجهيز أداة تجسيمية بحامل رأس غاز للاستنشاق المستمر للتخدير أثناء الجراحة. ضع بعد ذلك مجهرا جراحيا ومصدر ضوء حسب الحاجة. قم بإعداد وسادة التدفئة التي ستذهب تحت الفأر أثناء الجراحة وتأكد من أن جميع الأدوات والمواد التي تلامس موقع الجراحة معقمة.

بمجرد أن تصبح المنطقة الجراحية جاهزة ، قم بعمل المحور الذي سيتم توصيله بالجمجمة وتوصيله بجهاز LFP. استخدم شفرة حلاقة لقطع الطرف المعدني لقطع إبرة قياس 20 بوصة ونصف بوصة مع انحياز طفيف. يجب أن يكون للمحور فتحة حوالي ثلاثة ملليمترات.

بعد ذلك ، قم بقص أقراص بسمك ملليمتر واحد من خط ضرب الحشائش. سيتم استخدامها لتثبيت السن أثناء حفر الجمجمة. بعد تخدير الفأر ، ضع على أداة التجسيم وقم بتأمين الرأس داخل مخروط الأنف.

تذكر أن تراقب بصريا معدل التنفس أثناء الجراحة. بعد ذلك ، ضعي مرهما على العينين لمنع الجفاف وإزالة الشعر من الرأس. قم بتنظيف وتعقيم موقع الجراحة بالتطبيقات المتكررة لمحلول اليود بوفيدون ، متبوعا بالكحول بنسبة 70٪.

الآن بعد أن تم إعداد موقع الجراحة ، استخدم مشرطا لعمل شق في خط الوسط يبدأ من العينين ويمتد إلى الرقبة. اسحب الجلد للخلف بمشابك البلدغ الصغيرة. لكشف الجمجمة وتوفير مجال جراحي واضح ، ضع بوبيفاكائين المخدر الموضعي على الجمجمة باستخدام أداة أسنان أو مكشطة عظمية ، وقم بإزالة الواجهة من أعلى الجمجمة.

بعد ذلك ، ضع علامة في منتصف الطريق بين Bgma و Lambda وبين الخيط السهمي والتلال الجانبية فوق نصف الكرة الأيمن. ضع قطرة من غراء Loctite على webo بلاستيكي واستخدم ملقط الإمساك الجانبي لغمس أحد الأقراص المعدة مسبقا في الغراء. اضغط على القرص إلى العلامة الموجودة على الجمجمة.

استخدم إبرة وحقنة لإضافة قطرة إلى قطرتين من Loctite Accelerator. لتقوية الغراء ، ضع تريفين بقطر خارجي بقطر ثلاثة ملليمترات فوق القرص وقم بتدويره في اتجاه عقارب الساعة حتى تقطع الجمجمة. فحص. يجد الدرج تقدما بشكل متكرر لتجنب الحفر بعيدا جدا واختراق الجافة.

يجب أن تشعر رفرف الجمجمة بالارتخاء عند الضغط عليها برفق. ضع أداة أسنان موازية لسطح الجمجمة واستخدمها لنزع السديلة العظمية. افصل العظم بعناية عن الجمجمة باستخدام الملقط.

اضغط باستخدام قضيب قطني لوقف أي نزيف ومنع غبار العظام من الوصول إلى الجافة. إذا كان هناك خرق مرئي في الجافية ، فيجب القضاء على من التجربة عن طريق القتل الرحيم الإنساني. استخدم الملقط لوضع المحور في موضع فوق الفتحة بحيث يتماشى انحياز المحور مع انحناء الجمجمة.

استخدم عصا خشبية حادة ذات رؤوس لتطبيق غراء فائق حول حواف المحور بيد واحدة مع تثبيته باليد الأخرى. احرص على عدم وضع الغراء فوق الجافية لأن ذلك قد يتسبب في تقليل قوة الإصابة أو التسبب في تمزق عند إزالة المحور لاحقا. اخلطي أكريليك سانو وأكريليك الأسنان معا في كوب ورقي صغير.

استخدم حقنة واحدة سم مكعب لتطبيق الأسمنت حول المحور. يجب أن يغطي الأسمنت المليمترين السفليين من المحور بالإضافة إلى الجمجمة المكشوفة المحيطة. املأ المحور بمحلول ملحي معقم للحفاظ على رطوبة الدرة أثناء مرحلة التعافي.

من المحتمل حدوث تسرب إذا فشل المحلول في البقاء مستويا ويجب إرفاق محور جديد لإنهاء إدارة السوائل للحيوان وإزالته إلى قفص فارغ دافئ بدون غطاء سلكي. ضع بعض الهيدروجيل في القاع واترك الفئران تتعافى لمدة ساعة إلى ساعتين. مكونات جهاز LFP هي البندول ، وأسطوانة أكريليك مملوءة بالماء مع أنابيب الضغط العالي وتركيب قفل إغراء ذكر متصل ، ومكبر للصوت وراسم الذبذبات.

للبدء ، قم بتشغيل راسم الذبذبات ومكبر الصوت. تأكد من أن جهاز LFP وأنابيب الضغط العالي المتصلة به مملوءة بالماء وخالي من فقاعات الهواء مع الطرف الذكري لأنبوب قفل الإغراء. المغلقه. حرر البندول لتوصيل نبضة اختبار.

قم بتوصيل عدة نبضات وتأكد من أن البندول يعطي إشارة سلسة على راسم الذبذبات ومكبر الصوت. تشير الإشارة الصاخبة إلى الهواء في النظام الذي يجب إزالته قبل توصيل نبض الإصابة. راقب الضغط الذي يقدمه الجهاز للحفاظ على اتساق الإصابة.

تتبع راسم الذبذبات هنا قيمة من الذروة إلى الذروة تبلغ 2.16 فولت ، مما يشير إلى ضغط 1.47 جوا. يمكن زيادة زاوية البندول أو تقليلها لتعديل شدة النبض. هنا ، الزاوية حوالي 10 درجات.

بعد ضبط جهاز LFP ، تأكد من فتح طرف قفل الإغراء للأنبوب. بمجرد أن يصبح جهاز LFP جاهزا ، ضعه على الماوس المخدر على المنصة واملأ المحور بمحلول ملحي معقم. قم بتوصيل قفل إغراء الذكور من جهاز LFP بتركيب قفل الإغراء الأنثوي في المحور.

ضع على جانبه وبمجرد استئناف نمط التنفس الطبيعي ، ولكن قبل أن يستعيد الحساسية ، حرر البندول لإحداث نبضة واحدة من الإصابة. يجب تسجيل الضغط الدقيق للنبض. تخضع SHA لجميع الإجراءات نفسها باستثناء نبض السائل الفعلي للحث على الإصابة.

ضع على ظهره لمراقبة وقت رد الفعل الكتابي. بعد يكتببنفسي, هو ثانية يخدر بإيجاز. قم بإزالة الأسمنت والمحور من الجمجمة.

لاحظ وجود أي فتق في الجافية ، ثم أغلق الجرح بمادة لاصقة من أنسجة السندات البيطرية. افحص المحور بصريا بحثا عن أي انسدادات. ضع في قفص دافئ حتى يصبح متنقلا ثم أعده إلى قفص منزله.

يمكن استخدام الاختبار السلوكي بعد LFP لتقييم كل من النتائج المعرفية والحركية. تستخدم متاهة موريس المائية لتحديد التأثيرات على التعلم والذاكرة باستخدام الإشارات المرئية في غرفة الاختبار. تصبح الفئران الشامية أكثر كفاءة في تحديد موقع المنصة.

مع كل يوم لاحق من التدريب ، يستغرق تعرضي ل LFP وقتا أطول لتحديد موقع المنصة المخفية في اليومين الأولين من الاختبار بالنسبة للفئران الوهمية ، ولكن بعد ذلك يبدو أنه يتعلم المهمة في اليوم الثالث. لتحديد تأثير الإصابة على الاحتفاظ بالذاكرة. يتم إجراء تجربة المسبار بعد يوم واحد من آخر جلسة تدريبية.

تقضي الفئران الوهمية وقتا أطول في الربع المستهدف مقارنة بالفئران المعرضة ل LFP. يمكن تحديد العجز الحركي الناجم عن LFP باستخدام اختبار السجادة الدوارة M الخاضع ل LFP لديه متوسط زمن انتقال أقصر للسقوط مقارنة بالفئران الزائفة بعد سبعة و 21 يوما من الإصابة. يكشف تلطيخ البروتين الحمضي الليفي Ggl عن زيادة الدبقي في جميع أنحاء القشرة في منطقة الإصابة ، في حين أن الفئران الزائفة لا تظهر زيادة في أعداد الخلايا النجمية في الموقع المكافئ.

وبالمثل ، يوضح تلطيخ MAC one المزيد من البلاعم المحيطة بموقع الإصابة مقارنة بالفئران التي خضعت لجراحة زائفة. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما يكون هناك تلف جسدي للأنسجة القشرية مرئي في الفئران المعرضة ل LFP ، ولكن ليس في الفئران الزائفة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أنه لا يجب عليك اختراق الجافية وأن جهاز LFP يجب أن يكون خاليا من فقاعات الهواء.

هذه التقنية لعلماء الأعصاب بتقييم العديد من التلاعبات الدوائية والجينية قبل الإصابة أو بعدها. في الفئران. سيساعد هذا في الكشف عن الجزيئات التي تقلل من التنكس العصبي أو تعزز التجديد لدى المرضى الذين يعانون من إصابات الدماغ الرضحية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث إصابة دماغية خفيفة إلى متوسطة في نموذج القوارض عن طريق إجراء استئصال كرانيكت ، وربط محور بالجمجمة ، وإرسال نبضة من ضغط الماء على مادة الجافية عبر المحور.