طريقة بسيطة للقطع الجاف للحصول على قسم الراتنج الكامل الحجم للبذر وتطبيقاته

علم المورفولوجيا وجودة الخلايا وحبيبات النشا، والهيئات البروتينية في النواة تحديد الوزن وجودة البذور. في هذه الدراسة، ونحن نقدم كسكان بسيطة من نواة كاملة جزءا لا يتجزأ من الراتنج الأبيض LR وإنشاء طريقة بسيطة شفط الجافة من حبات كاملة. نختار LR الراتنج الأبيض كوسيطة جزءا لا يتجزأ لسببين رئيسيين.

أولاً، إنه منخفض اللزوجة ونفاذية قوية، مما يؤدي إلى تطبيقاته الجيدة في إعداد هذه الأجزاء القوية من البذور، وخاصة بالنسبة للحبوب الناضجة مع حجم كبير ومحتوى كبير من النشا. ثانيا، يمكن أن تكون ملطخة العينة جزءا لا يتجزأ من الراتنج الأبيض LR بسهولة مع العديد من الأصباغ الكيميائية لعرض بوضوح مورفولوجيا العينات تحت الضوء مع المجهر الفلورسنت. يمكن أن تكون لطخت أقسام المعدة خصيصا لعرض الخلايا، حبيبات النشا، والهيئات البروتين بوضوح في ظهور نواة كاملة، ويمكن أيضا أن تكون المعلمات مورفولوجيا تحليلها كميا.

تحتوي الطريقة على دراسات. هنا، نستخدم حبات الذرة الناضجة مع حجم أكبر ومحتوى عالي النشا كعينة لعرض العمليات خطوة بخطوة. لتبدأ، حبات مقاطع في زجاجة بسيطة.

إضافة حوالي 10 ملليمتر من 2.5٪ من الغلوتارالدهيد الفوسفات المخزنة. أكثر واحد درجة 7.2 درجة الحرارة ووضعها في 4 درجة مئوية لمدة 48 ساعة لإصلاح لهم على حد سواء. ثم تأخذ بها هذه حبات وشريحة لهم طوليا أو عرضية، مع سمك 2-3 ملليمترات.

تحتاج إلى شفرة حادة على الوجهين. وأصلحهم لـ 48 ساعة أخرى بعد ذلك، قم بغسل العينات ثلاث مرات بحوالي 10 ملليمترات، لذا 0.1 M الفوسفات العازلة، وhH 7.2 لمدة 30 دقيقة في كل مرة.

لترطيب العينات خطوة بخطوة، نقعها في حوالي 10 ملليمترات من محلول مائي الإيثانول 30٪ لمدة 30 دقيقة أولاً، وانقعها تباعاً في 10 ملليمترات، لذلك 50٪70٪90٪مرة واحدة، و100٪33. للتسلل عينة خطوة بخطوة، استردادها تباعا مع 10 ملليمترات من حل راتنج أبيض LR المخفف مع الإيثانول من 25٪50٪75٪مرة واحدة، و 100٪ مرتين في أربع درجات مئوية لمدة 12 ساعة في كل مرة. قبل التضمين، نحن بحاجة إلى إعداد الرواد للعينات.

إضافة 250 ميكرولترات من الراتنج الأبيض LR نقية في أنبوب الطرد المركزي مليمترين ميليمترات وبلمرة في ست درجات مئوية لمدة 48 ساعة. بعد ذلك، على التوالي إضافة 500 ميكرولترات من الراتنج الأبيض LR نقية والتسلل إلى العينة في أنبوب الطرد المركزي مع قاعدة. بعد استقامة العينات بإبرة تشريحية، وضع الراتنج عند ست درجات مئوية في فرن لمدة 48 ساعة.

أخرج تلك الحبوب المضمنة من أنبوب الطرد المركزي وقطع الراتنج الزائد حول عينة باستخدام شفرة حادة. ضع كتلة الراتنج في حامل العينة من الميكروتون وتقليم قبالة الراتنج الزائد على سطح العينة وحول العينة مع شفرة. مزيد من تلميع سطح العينة أخيرا بسكين الزجاج حتى يمكن تشكيل مقطع كامل.

الآن حان الوقت لإعداد هذا القسم المدهش مع اثنين من سمك ميكرون. قبل التقطيع، وضع النحاس صغيرة تحدث عن اثنين ملليمتر فوق حافة شفرة لمنع قسم من الشباك. كما يُمَثّل القسم، ضعَ كلمةً تحت القسم لتأييده.

بعد ذلك، أضف 100 ميكرولترات من الماء على الشريحة غير هُجّت ونقل القسم الكامل وغير المنقطع بعناية إلى الماء مع المعالجين. سخنيها وجففها عند 50 درجة مئوية لتنعيم القسم المتجعد. وأخيراً، هناك جولتين هامتين تحتاجان إلى الاهتمام.

أولا، إذا كان القسم ينهار أو الدموع، تمديد الوقت لكل تسلل الراتنج من العينة. ثانيا، إذا كان القسم لديه بعض خطوط موازية للسكين، المشبك كتلة العينة بإحكام. إذا كان القسم يحتوي على بعض الخطوط العمودية إلى السكين، يرجى استخدام سكين جديدة.

لمراقبة مورفولوجيا الخلايا وحبيبات النشا، والهيئات البروتينية، يمكننا وصمة عار المقاطع مع الفلورسنت براينر 28، حل اليود، وCoomassie الأزرق الرائع R250 على التوالي. بالنسبة للبقع المحددة الأخرى، تستند إلى بحث الاقتراح. هنا نستخدم محلول اليود لطخة حبيبات النشا كمثال.

إضافة 40 ميكرولترات من محلول اليود لتزج في القسم. و أحتفظ بها في الجرة لدقيقة واحدة ثم غطي العينة بأكمام الغلاف.

ولطخة قبالة وكيل فائض حل حوله. مراقبة وتصوير العينة على الفور تحت مجهر مضاء مجهز بكاميرا الدوائر التلفزيونية المغلقة. يمكننا معالجة وتحليل كمي الصور التي تم تصويرها للمنطقة ، والوصول الطويل أو القصير ، و roundness من الخلايا ، وحبيبات النشا ، والهيئات البروتين في مناطق مختلفة للنواة باستخدام برامج تحليل مورفولوجيا.

نحن ننشئ طريقة بسيطة للقطع الجافة للاحتفاظ بأقسام بحجم النواة الكاملة في راتنج LR White. يمكن أن الطريقة إعداد المقاطع العرضية والطولية للنواة كلها مع اثنين من ميكرون. أو أمثلة، يمكن أن تكون البذور كاملة ناضجة من الاغتصاب البذور الزيتية مقطعة عرضية وطولية.

ويمكن أيضا أن تكون أقسام نواة كاملة ناضجة من الذرة مع حجم أكبر على استعداد بنجاح. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا أن يتم التحقيق في النواة النامية، والنواة المطبوخة، والنواة منبت باستخدام الطريقة. تحتوي الأقسام المعدة من حبات كاملة على التطبيقات أدناه.

أولا، يمكن استخدام أقسام نواة كاملة لمراقبة بنية الأنسجة من البذور. على سبيل المثال، يمكن أن تظهر أقسام الجنين كله من الاغتصاب بذرة زيتية ملطخة مع صفرانين بوضوح انها الراديكالية، عارضة فرط، الداخلية والخارجية يمكن استخدام أقسام نواة كاملة لمراقبة وتحليل مورفولوجيا الخلايا. على سبيل المثال ، تلطخ الأجزاء العرضية من جنين كامل من اغتصاب بزغ الزيتية مع الفلورسنت 28 ، وزيوت الخلايا ملطخة على وجه التحديد.

يمكن عرض مورفولوجيا الخلايا الدقيقة في أي مناطق من الجنين كله في التكبير عالية. يمكن تحليل المعلمات المورفولوجيا للخلايا parenchymal ، كميا باستخدام برمجيات تحليل المورفولوجيا وتظهر بعض الاختلافات في مناطق مختلفة من الجنين. يمكن أن تظهر الأجزاء العرضية من نواة الذرة الكاملة الملطخة بمشرق الفلورسنت 28 أيضًا كتشكل من الخلايا ، وتختلف معلمات مورفولوجيا الخلايا في مناطق متنوعة من إندوسبيرم.

يمكن أن تكون ملطخة أجزاء من نواة كاملة مع محلول اليود ليعرض مورفولوجيا من حبيبات النشا ، على سبيل المثال ، يمكن أن تظهر المقاطع العرضية والطولية من حبات الذرة الملطخة باليود مورفولوجيا حبيبات النشا بوضوح. تظهر حبيبات النشا في مناطق متنوعة مورفولوجيا مختلفة بشكل كبير ، وحجمها ، وكميتها في خلايا إندوسبيرم. لذا فإن التحليل الكمي للبارامترات المورفولوجية لم حبيبات النشا يبين أنها مختلفة بشكل كبير في مناطق متنوعة للاندوسبيرم.

يمكن استخدام الأقسام لمراقبة وتحليل مورفولوجيا أجسام البروتين. على سبيل المثال، هو ملطخة بروتين النشا الأزرق باستخدام Coomassie الأزرق الرائع R250. يمكن ملاحظة التوزيع المكاني لبروتين النشا في الجنين بأكمله من اغتصاب الحبوب الزيتية في التكبير المنخفض ، ويمكن عرض الهيكل الصغير بوضوح في التكبير العالي.

بالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا تحليل مؤشر الأرقام خطأ والمعلمات مورفولوجيا من أجسام البروتين في المناطق المختارة كميا. هذه التقنية يوفر أول وبسهولة إعداد أقسام الراتنج من حبات كاملة من البذور النامية والناضجة. التطبيقات المقطعية في بنية الأنسجة للنواة الكاملة ومن ثم التحقيق في مورفولوجيا الخلايا وحبيبات النشا، والهيئات البروتينية في مناطق مختلفة من نواة كاملة.

يمكن تحليل الصور المكتسبة كميا لإظهار المعلمات مورفولوجيا الخلايا، وحبيبات النشا، والهيئات البروتينية، وكذلك مقارنتها في مناطق مختلفة من نواة كاملة.