Name: استخراج وتشريح دماغ الخنزير المستأنس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: تعلم استخراج وتشريح دماغ الخنزير المستأنس لدراسات علم الأعصاب التشريحية. يوضح هذا البروتوكول خطوات دقيقة لإزالة الدماغ والحفاظ على أنسجته لأغراض البحث العلمي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويود المؤلفان أن يعترفا بجيم كنوبلاوتش ومارتن بوث هودجز من كلية تكنولوجيا المعلومات والاتصالات في العلوم الزراعية والاستهلاكية والبيئية لخبرتهما في التصوير والتسجيل وتحرير الصوت والفيديو.

تمت الموافقة على الإجراءات المتعلقة بمواضيع الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) في جامعة إلينوي في أوربانا شامبين
ملاحظة: قبل القتل الرحيم، تم تخدير الخنزير عن طريق الحقن العضلي مع مزيج من التيلازول: الكيتامين: xylazine (50.0 ملغ من بلاط HCl بالإضافة إلى 50.0 ملغ من زولازيبام HCl إعادة تشكيلها مع 2.50 مل من الكيتامين HCl (100 غرام / لتر) و 2.50 مل من xylazine (100 غرام / لتر) وتدار في 0.06 ملغ / كغ BW). وبمجرد تخدير الخنزير، تم قتله عن طريق إعطاء بينتوباربيتال الصوديوم داخل القلب (390 ملغم/مل يعطى عند 1 مل/5 كجم بي دبليو). بالنسبة لتشريح الدماغ ، يوصى باختيار طريقة القتل الرحيم استنادا إلى الإجراء التحليلي المطلوب للأنسجة. طريقة القتل الرحيم يجب أن تسبب أقل قدر ممكن من الضرر للدماغ.
1. استخراج دماغ الخنزير
<ol><li>بعد القتل الرحيم الإنساني، قطع رأس الخنزير عن طريق قطع فوق مؤخر الرقبة، بين الفقرة الأولى والثانية (أطلس والمحور، على التوالي).</li>
	<li>تأمين الرأس في مقعد مشلول فيس تعديل لتشمل المسامير. تأكد من أن الرأس معطل تماما قبل المتابعة.<ol>
<li>باستخدام مشرط، وجعل قطع القوس على طول خط الوسط من الجمجمة التي لا تزال إلى الجزء الخلفي من الرأس.</li>
		<li>جعل ثانية (عرضية) قطع على الجزء الخلفي من الرأس.</li>
		<li>جعل ثالث (عرضية) قطع على الطرف الخلفي من خطم وتمشيا مع العينين. قطع الجلد بعيدا عن الجمجمة قدر الإمكان لضمان سهولة الوصول إلى الجمجمة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>باستخدام منشار العظام، وجعل اثنين من التخفيضات الأمامية إلى الخلفية الجانبية إلى خط الوسط، وتمتد من العينين إلى قمة انحناء الجمجمة. شطبة المنشار نحو خط الوسط وقطع عميقة بما يكفي لاختراق الجمجمة.<ol>
<li>كرر العملية المذكورة أعلاه على الجانبين المتعامدة ، وخلق مستطيلة "نافذة" في الجمجمة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>باستخدام خطاف اللحم، نقب القسم مستطيلة من الجمجمة قبالة. تبدأ بوضع هوك في واحدة من زوايا القسم وتطبيق الضغط التصاعدي لتخفيف قطعة الجمجمة. الحرص على وضع خطاف اللحم فقط على مستوى الجمجمة لمنع اختراق أنسجة الدماغ عن غير قصد.</li>
	<li>إذا بقيت أي طبقات السحايا على الدماغ، استخدم ملقط ومقص حاد (أو بدلا من ذلك، مشرط) لإزالة الطبقات بلطف دون قطع في الدماغ.</li>
	<li>استخدام مشرط لقطع العضلات والدهون في الجزء الخلفي من الرأس، وفضح الجزء الخلفي من الجمجمة.<ol>
<li>جعل اثنين من القطع العرضية على طول الجزء الخلفي من الجمجمة. تأكد من عدم قطع في أنسجة الدماغ.</li>
		<li>تأمين الرأس عن طريق وضع يد ثابتة على خطم وتطبيق الضغط إلى الوراء لسحب الجزء الخلفي من الجمجمة قبالة، وفضح المخيخ.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إزالة الرأس من نائب مقاعد البدلاء ومكان على حصيرة الجراحية.</li>
	<li>استخدام أداة طويلة نحيلة، مثل نهاية حادة من مشرط، لإزالة الدماغ. عكس الرأس واستخدام حركة مغرفة لطيف لاقناع الدماغ للخروج من تجويف الجمجمة دون الإضرار سطح الدماغ. ملاحظة: سيكون من الضروري قطع الأعصاب القحفية لإزالة الدماغ. القيام بذلك بلطف ولا تحاول سحب الدماغ بقوة. سوف يسقط الدماغ من تلقاء نفسه عندما يكون منفصلا بشكل صحيح وكامل عن الجمجمة والعمود الفقري.</li>
</ol>2. تشريح دماغ الخنزير
ملاحظة: قد يكون من المفيد استخدام أطلس الدماغ أو دليل تشريح الألياف14 كتمثيل مرئي أثناء إجراءات التشريح. تأكد من تخزين عينات الأنسجة المشرحة بشكل صحيح وفقا للاحتياجات الخاصة بالمشروع عند إزالة كل عينة (موضحة بمزيد من التفصيل أدناه). بالإضافة إلى ذلك، يرجى ملاحظة أنه لأغراض هذا الفيديو، تم تشريح جميع مناطق الدماغ المعروضة من نصف الكرة الأيمن، ولكن هذا قد يختلف حسب المختبر على أساس الأهداف التجريبية.
<ol><li>لإزالة جذع الدماغ (في الغالب النخاعي) ، وجعل caudal قطع التاجية إلى المخيخ.</li>
	<li>لإزالة المخيخ، قم بإجراء قطع تاجي خلفي للقشرة. عزل المناطق المرغوبة (مثل الفيرميس والفلوكولوس وما إلى ذلك) من المخيخ عن هذه العينة. تأكد من عدم تضمين أي أجزاء من جذع الدماغ في هذه العينة.</li>
	<li>فصل نصفي الدماغ عن طريق جعل قطع منتصف القوس على طول الشق الطولي. جعل هذا القطع كحركة مستمرة لمنع التسبب في تلف القشرة.</li>
	<li>لإزالة الدماغ المتوسط، تشريح الكمية المطلوبة من الأنسجة البطنية فقط إلى كوليكولي متفوقة وأدنى.</li>
	<li>لإزالة قرن آمون, وضع نهاية حادة من مشرط في الجزء الخلفي من كالوسوم كوربوس ولفة بلطف قرن آمون, باستخدام "J" الحركة بدءا من الجزء الخلفي من كالوسوم الجسم; قرن فرس النهر بأكمله هو "على شكل حبة فول".</li>
	<li>المخطط (تظهر نواة caudate في المقام الأول) هي منطقة مخططة للمادة الرمادية والبيضاء أسفل كالوسوم الجسم والموجهات الأمامية إلى قرن آمون. شطب مشرط وإزالة هذه المنطقة، والكشف عن الأنسجة المخططة عند الإزالة.</li>
	<li>لإزالة قشرة الفص الجبهي الوسطي ، تشريح الأنسجة من الدوران الأمامي إلى كالوسوم الجسم ، وإزالة الجزء الأكثر توسطا من هذا القسم. يجب أن تبقى القشرة اليمنى بعد إزالة قشرة الفص الجبهي الوسطي.</li>
	<li>لإزالة المهاد، قم بإزالة الهيكل الشبيه بالمصباح في وسط سطح الدماغ الأوسط والوردية إلى الدماغ المتوسط. المهاد له شكل كروي وسوف تبدو أكثر قتامة قليلا من الأنسجة المحيطة بها.</li>
</ol>3. تشريح ما بعد
<ol><li>عند الانتهاء من تشريح، والحفاظ على عينات الأنسجة بشكل صحيح للتحليلات اللاحقة. سيؤدي إغفال هذه الخطوة إلى حدوث انحلال تلقائي وتدهور كبيرين في غضون أقل من 20 دقيقة.</li>
	<li>اترك كل منطقة دماغ سليمة في وقت التشريح إذا تم إجراء التحليلات الهيكلية ، أو فرم الأنسجة لإنشاء عينة أنسجة متجانسة قبل الحفظ. تشمل طرق الحفاظ على العينة الشائعة لأنسجة الدماغ الحفاظ على التبريد والتثبيت الكيميائي باستخدام عوامل الربطالمتقاطعة 15.</li>
	<li>بالنسبة إلى المقايسات القياسية للمختبر (مثل التعبير الجيني أو البروتيني)، اغمر في النيتروجين السائل أو المحاليل التي تعمل على تثبيت المواد الوراثية قبل التخزين طويل الأجل عند -80 درجة مئوية لتوفير طرق حفظ مريحة وفعالة من حيث التكلفة.</li>
	<li>إذا كان الحفاظ على بنية الأنسجة أولوية، فحافظ على أنسجة الدماغ من خلال طرق التثبيت التقليدية (على سبيل المثال، استخدام المثبتات المستندة إلى ألدهيد للبروتينات المتقاطعة)، إما بدون أو مع تغلغل الحيوان أو العضو ذي الأهمية قبل تشريح الأنسجة.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لديهما مصالح مالية متنافسة.

تم تصميم التقنيات الموصوفة هنا للخنازير حوالي 4 أسابيع من العمر. ومن الأهمية بمكان تنفيذ هذه الخطوات مباشرة بعد أن تم قتل الخنزير بطريقة إنسانية لضمان الحفاظ على سلامة بنية أنسجة الدماغ، وخاصة عند النظر في المقايسات الكيميائية الحيوية اللاحقة. من المفيد استخدام أطلس أو أدلة تشريحالألياف 16 عند تعلم التقنيات لأول مرة. من المستحسن أن يقوم المجرب بالعديد من عمليات استخراج الدماغ وتشريحه قبل الحصول على عينات لجمع البيانات. الخطوة الأكثر صعوبة هي إزالة الجمجمة. هذه الخطوة سوف تصبح أسهل مع الخبرة لأنها ...

وقد تم توثيق الخنازير بشكل جيد وقبلت كنموذج حيواني قابل للترجمة للأبحاث فيأنظمةالقلب والأوعية الدموية 1 ، نظم الجهاز الهضمي2، التغذية3،4، السكري5،السموم 6، والتقنيات الجراحية7. استخدام الخنزير في علم الأعصاب هو بداية لزيادة، كما PubMed البحث عن الكلمات الرئيسية نموذج الدماغ الخنازير يؤدي إلى أربع مرات أكثر النتائج من 1996-2005 من فترة السنوات ال 10 السابقة8،وحتى المزيد من النتائج في الوقت الحاضر. السبب الرئيسي الذي يجعل شعبية نموذج الخنزير آخذة في التوسع يرجع إلى أوجه التشابه في النمو والهيكل ووظيفة الدماغ بالمقارنة مع البشر. بالمقارنة مع الدماغ البشري ، يعرض دماغ الخنزير نمطا جيراليا مماثلا ، والأوعية الدموية وتوزيع المادة الرمادية والبيضاء9. وعلاوة على ذلك، تم استخدام دماغ الخنزير في إجراءات التصوير العصبي، أثار التسجيل المحتملة، وفي إنشاء تقنيات جراحة الأعصاب8،9. على عكس النماذج الحيوانية الأخرى ، ومع ذلك ، فإن الخنازير والإنسان تجربة نمو الدماغ في الفترة المحيطة بالولادة طفرات ، بدلا من طفرات النمو قبل أو بعد الولادة. عند الولادة، يزن دماغ الإنسان والخنزير ما يقرب من 27 و 25 في المئة من وزن دماغهما البالغ، على التوالي، مقارنة بأدمغة الفئران التي تزن 12 في المئة من وزن دماغها البالغ ومخ ريسوس بنسبة 76 في المئة من وزن البالغين10.
أحد أسباب اعتماد الخنزير ببطء كنموذج حيواني لعلم الأعصاب هو أن العديد من الباحثين غير معتادين على الحيوان في هذا السياق. قد لا يكون الباحثون على علم باستخداماته المحتملة في هذا المجال أو قد لا يعرفون التقنيات المناسبة المطلوبة لاستخدام مثل هذا النموذج. كما استخدام الخنزير كنموذج الطب الحيوي وقبل السريرية تكتسب الاهتمام والاستخدام في علم الأعصاب، فمن الضروري وضع إجراءات موحدة لإزالة الأنسجة لضمان مقارنة دقيقة للبيانات عبر الدراسات. على الرغم من تشريح والتقنيات الجراحية التي تنطوي على دماغ الخنزير قد نشرت في مكان آخر11،12،13، هناك حاجة لبروتوكولات بسيطة وموحدة لجمع أنسجة الدماغ الخنزير ، وخاصة للاستخدام في المقايسات الكيميائية الحيوية. على هذا النحو ، فإن الهدف من هذا الفيديو هو توفير المعرفة اللازمة للسماح للباحثين بإجراء استخراج الدماغ الموحد وتشريحه. يوضح هذا الفيديو تقنية واحدة مناسبة لإزالة دماغ الخنزير مع الحفاظ على القشرة و جذع الدماغ سليمين ، وبالتالي مراجعة طرق تشريح العديد من مناطق الدماغ الرئيسية.

<table><tbody><tr><td># 22 شفرات مشرط ل # 4 مقابض</td><td>تيد بيلا ، إنك.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>11 1/2 "Satterlee Bone Saw</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" قواطع الجمجمة مع نهاية إزميل (خطاف اللحم)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>مقعد ورشة عمل شديدة التحمل مقاس 5 بوصات ملزمة</td><td>المهر</td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>سكين جزار 25 سم</td><td>فيكتورينوكس</td><td>5.7403.25</td><td>شحذ قبل الاستخدام</td></tr><tr><td>CM40 إسقاط الخدمة الخفيفة مزورة C المشابك</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>الماس شحذ سكين المشكل</td><td>الشيف ' s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>مقبض شفرة مشرط من الفولاذ المقاوم للصدأ من شاندون # 4</td><td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td>ملقط الأنسجة</td><td>هنري شاين</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>وسادة تشريح الفينيل</td><td>كارولينا</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

استخراج وتشريح دماغ الخنزير المستأنس

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

وقد تم توثيق وقبول استخدام الخنزير كنموذج حيواني قبل السريرية والترجمة بشكل جيد من قبل مجالات البحث التي تحقق في أنظمة القلب والأوعية الدموية ، وأنظمة الجهاز الهضمي ، والتغذية ، ويتم استخدام الخنزير بشكل متزايد كنموذج حيواني كبير في علم الأعصاب. وعلاوة على ذلك، الخنزير هو نموذج مقبول لدراسة النمو العصبي لأنه يعرض نمو الدماغ وأنماط التنمية مماثلة لما يحدث في البشر. كنموذج حيواني أقل شيوعا في علم الأعصاب ، قد لا تكون الإجراءات الجراحية والتشريح على الخنازير مألوفة أو تمارس بشكل جيد بين الباحثين. لذلك ، قد يكون البروتوكول البصري الموحد الذي يفصل طرق الاستخراج والتشريح المتسقة قيما للباحثين الذين يعملون مع الخنزير. يعرض الفيديو التالي تقنية لإزالة دماغ الخنزير مع الحفاظ على القشرة و جذع الدماغ سليمين ويستعرض طرق تشريح العديد من مناطق الدماغ التي يتم التحقيق فيها بشكل شائع بما في ذلك جذع الدماغ والمخيخ ومنتصف الدماغ وفرس النهر والمرحلة والمهاد والقشرة الجبهية الوسطى. الغرض من هذا الفيديو هو تزويد الباحثين بالأدوات والمعرفة اللازمة لإجراء عملية استخراج الدماغ وتشريحه باستمرار على الخنزير البالغ من العمر أربعة أسابيع.

يصف هذا القسم أمثلة على النتائج التي تم الحصول عليها بعد الاستخراج الصحيح وتشريح دماغ خنزير عمره 4 أسابيع. الشكل 1 يحدد شكل كل منطقة الدماغ لاستخدامها كدليل أثناء تشريح. جزء من جذع الدماغ قد تبقى في الجمجمة بعد إزالة المخيخ (الشكل 1B). يمكن إزالة هذا أثناء عزل المنطقة المطلوبة من المخيخ. يعرض الجدول 1 متوسط الوزن (متوسط ± خطأ قياسي للوسط) لكل منطقة من مناطق الدماغ التي تم تشريحها (n=5).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1...

هذا البروتوكول تفاصيل تقنية لإزالة دماغ الخنزير في مجملها وتشريح العديد من مناطق الدماغ درس عادة في علم الأعصاب.

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

الفيديو التالي هو دليل على إزالة وتشريح دماغ الخنزير. قد يكون من المفيد الرجوع إلى أطلس، أو دليل تشريح الألياف قبل أو أثناء الإجراء. سكين جزار كبير هو الأفضل لقطع الرأس لأنها سوف تسمح لقطع نظيفة واحدة بين الأطلس والمحور.تأكد من أن السكين حاد قبل البدء بموضوع جديد. يتم استخدام خطاف اللحم لإزالة الجمجمة. يتم استخدام أداة طويلة نحيلة مثل مقبض مشرط لإزالة الدماغ من الجمجمة.رذيلة مع مسامير أو نتوءات ضروري لتأمين الرأس أثناء قطع الجمجمة. مرة واحدة وقد تم قتل الحيوان بطريقة إنسانية وفقا للبروتوكولات المعمول بها المضي قدما على النحو التالي. قطع فقط فوق مؤخر الرقبة، بين الكتفين وأعلى الرأس.تأمين الخنزير وتحريك السنوات للخروج من الطريق أثناء قطع الرأس. استخدم مشرط لإجراء شقوق لفصل الجلد عن الجمجمة. إجراء قطع الأولي على منتصف الجمجمة التي لا تزال في الجزء الخلفي من الرأس.يجب أن يكون القطع العرضي الثاني على الجزء الخلفي من الرأس. القطع الثالث أيضا عرضية سوف تبدأ في الجزء الخلفي من هذا الخطم، وتواؤم مع العينين لضمان سهولة الوصول إلى الجمجمة. استخدام منشار العظام لجعل إلى الأمامي إلى التخفيضات الخلفية الجانبية إلى خط الوسط.ابدأ بوضع علامة خفيفة على منطقة القطع بالمنشار ، ثم ابدأ في المنشار حتى تواجه مقاومة أقل من الجمجمة. شطبة قليلا منشار نحو خط الوسط في حين قطع لأن هذا سيضمن أن كنت قطع أنحف جزء من الجمجمة. إذا كان قطع قريبة جدا من الأذن سيكون من الصعب إزالة الجمجمة.ولكن إذا كان قطع قريبة جدا من خط الوسط فتحة ستكون صغيرة جدا لإزالة الدماغ. كرر هذه العملية على الجوانب المتعامدة لإنشاء إطار مستطيل. تأكد من أن كل ركن من أركان النافذة مقطوع تماما ، بحيث يمكن إزالة جزء من الجمجمة للكشف عن الدماغ تحتها.بعد ذلك، استخدم خطاف اللحم أو أداة منحنية لإبعاد قسم الجمجمة المستطيل عن موضعه. تبدأ بوضع هوك في واحدة من الزوايا، والضغط لموسيقى البوب الجمجمة قبالة. في بعض الحالات، سيبقى السحاي على الدماغ.وإذا كان هذا يحدث بعناية استخدام ملقط ومقص حادة، أو بدلا من ذلك مشرط لإزالة السحاي دون قطع الدماغ. للرجوع إليها الدماغ يجب أن ننظر على النحو التالي قبل وبعد أن تمت إزالة طبقات السحايا. قطع من خلال العضلات والدهون على الجزء الخلفي من الرأس للتحضير للتعرض للمخييخ.لكشف المخيخ جعل اثنين من القطع العرضية على طول الجزء الخلفي من الجمجمة. عند إجراء هذه التخفيضات الحرص على عدم قطع في الدماغ المكشوفة. مرة واحدة وقد بذلت التخفيضات مكان يد واحدة على خطم، واحدة على الجمجمة، وتطبيق الضغط إلى الوراء لسحب الجزء الخلفي من الجمجمة بعيدا عن بقية الرأس.كما هو موضح هنا، هو مدسوس المخيخ وراء الطبقات السحايا المتبقية. استخدام نهاية أداة حادة مثل مقبض مشرط لفصل بعناية الدماغ من الجمجمة، مع الحرص على تجنب إتلاف الدماغ في هذه العملية. عكس الرأس قليلا للمساعدة في اقناع الدماغ للخروج من الجمجمة، واستخدام حركة مغرفة لطيف لقطع الأعصاب الجمجمة وإزالة الدماغ.تتطلب هذه العملية الصبر والممارسة للقضاء على جميع الاتصالات المتبقية بين الدماغ وتجويف الجمجمة. عكس رأس الخنزير يمكن أن يكون مفيدا خلال هذه العملية. الاستمرار في استخدام الحركات الكاسحة مع أداة حادة لتحرير الدماغ.كما هو موضح هنا ، قد يكون من الصعب إزالة المخيخ ودم الدماغ لأنها مدسوسة في تجويف الجمجمة. الحرص عند إزالة المخيخ وميدولا، أو جذع الدماغ. يجب أن يسقط الدماغ من تلقاء نفسه عندما يكون منفصلا تماما عن الجمجمة.يجب أن يبدو تجويف الجمجمة كما هو موضح بعد إزالة الدماغ. استعدادا لتشريح منطقة الدماغ ضمان تنظيم الحاويات المسماة مسبقا، وعلى مقربة. وتشمل طرق الحفظ على سبيل المثال عينات التجميد المفاجئة في النيتروجين السائل ، أو غمرها في محلول حافظ.مرة واحدة المستخرجة من تجويف الجمجمة الدماغ كله ينبغي أن ننظر على النحو التالي. لإزالة النخاع أو جذع الدماغ، قم بإجراء قطع تاجي إلى المخيخ. لإزالة المخيخ، قم بإجراء قطع تاجي خلفي للقشرة.لفصل نصفي الكرة الأرضية جعل قطع منتصف الزمان على طول الشق الطولي باستخدام حركة مستمرة لمنع الضرر. لأغراض هذا الفيديو سوف نعرض فقط تشريح من نصف الكرة الأيمن. لإزالة نظرة منتصف الدماغ عن الكوليكولي متفوقة، وأدنى التي هي اثنين من المطبات على الجزء الخلفي من الدماغ.إزالة الكمية المطلوبة من أنسجة الدماغ البطين فقط لهذه المناطق. لإزالة موقف قرن آمون مقبض مشرط على الجزء الخلفي من كالوسوم الجسم، ولفة بلطف قرن آمون. قرن الحصين بأكمله سيكون على شكل حبة فولوينبغي أن الحصين طرح بسهولة عند مغرفة إصبعك في حركة ي، بدءا من كالوسوم الجسم الخلفي. لإزالة المخطط أو نواة caudate مسح بعيدا الجزء الأمامي من كالوسوم الجسم. نواة caudate هي المنطقة المخططة أو المخططة التي هي رمادية وبيضاء ملونة وتقع أسفل كالوسوم الجسم.مع مقبض مشرط الزاوية إزالة هذه المنطقة التي تشمل في الغالب نواة caudate. بعد إزالة هذا النسيج يجب أن تكون قادرة على رؤية نمط المخططات حيث تم تحديد موقع منطقة الدماغ. لإزالة القشرة الجبهية الوسطى تشريح الأنسجة من الدوران الأمامي إلى كالوسوم الجسم أخذ الجزء الأكثر توسطا من هذا القسم.يجب أن تبقى القشرة اليمنى بعد إزالة قشرة الفص الجبهي الوسطي. لإزالة المهاد، قم بإزالة المصباح مثل الهيكل في وسط سطح المساجيتال. المهاد له شكل كروي واضح، وسوف تبدو أكثر قتامة قليلا من الأنسجة المحيطة بها.عند الانتهاء من تشريح عينات الأنسجة ينبغي الحفاظ عليها بشكل صحيح على أساس نتائج تجريبية محددة. تظهر هنا مناطق الدماغ المتشرذم، بما في ذلك الحجم والشكل النسبي المتوقع عند العمل مع الخنازير الصغيرة. عند إتقان هذه التقنيات ، فإن عملية استخراج الدماغ بأكملها وتشريحها تستغرق أقل من 15 دقيقة لكل موضوع ، وتسفر عن نتائج متسقة.

extraction-and-dissection-of-the-domesticated-pig-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

نحن وصفا لنموذج الفئران من اضطراب ما بعد الصدمة (PTSD) أن يكشف عن التعديلات المستمرة في وظيفة الغدد الصم العصبية وتأخر طويل الأجل، استجابة الخوف المبالغ فيه، سمة من المرضى PTSD. النموذج الحيواني والأساليب المذكورة هنا هي مفيدة لربط المؤشرات الحيوية في الدماغ نوى، وهي الآلية ولكن لا يمكن أن يقاس في المرضى، مع المؤشرات الحيوية في خلايا الدم البيضاء الطرفية، والتي يمكن.

المؤشرات الحيوية في نموذج حيواني لكشف الاقتران العصبية، الدموية، والسلوكية للPTSD

يوضح هذا الفيديو طريقة لإعداد مزارع شرائح الحصين العضوية من دماغ جرو الفئران. وهو يحدد الخطوات المتبعة في تشريح الحصين ، والتقطيع ، وظروف الاستزراع المطلوبة لتعزيز بقاء الخلية ونموها في شرائح الحصين ، مما يؤدي في النهاية إلى إنشاء ثقافات شرائح عضوية.

تحضير ثقافات الشرائح العضوية من الحصين لجرو الفئران

يوضح هذا الفيديو عملية تكوين الغلاف العصبي وتوسعها من أنسجة الحصين. تتكاثر الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية من أنسجة التلفيف المسننة للفأر بعد الولادة وتشكل المجالات العصبية الأولية ، والتي يتم إعادة زرعها بعد ذلك لتشكيل مجالات عصبية ثانوية.

تكوين وتوسيع المجالات العصبية من أنسجة الحصين

وقد ركزت البحوث العصبية التنموية التي يسببها التخدير (إيدن) على القوارض، والتي لا تنطبق بشكل واسع على البشر. نماذج الرئيسيات غير البشرية هي أكثر ملاءمة، ولكن هي باهظة التكلفة وصعبة للاستخدام للتجريب. الخنزير الصغير، في المقابل، هو ذات الصلة سريريا، نموذج حيواني عملي مثالية لدراسة العصبية التخدير.

استخدام نموذج خنزير صغير لدراسة التسمم العصبي التنموي الناجم عن التخدير (إيدن): نهج علم الأعصاب الانتقالي

والهدف من هذه الورقة، والفيديو التعليمي هو شرح طريقة لكشف وإزالة الدماغ الخنازير والغدة النخامية وبعد الوفاة في حالة سليمة، ومناسبة لتحليل العيانية والنسيجي لاحقة.

تعرض الجهاز العصبي المركزي الخنزير للتحليل النسيجي: دليل لقطع الرأس، الجمجمة افتتاح، والدماغ إزالة

توضح هذه المقالة منهجية مفصلة الحصول على مقاطع عرضية مسطح من الثدييات كورتيسيس ووضع تصور للوحدات القشرية باستخدام histochemical وأساليب المناعي.

التصور للوحدات القشرية في الأرض كورتيسيس الثدييات

نحن نقدم بروتوكولا عمليا وسريعا خطوة بخطوة لإزالة دماغ الفأر وتشريح المناطق المنفصلة من أنسجة المخ الطازجة. أصبح الحصول على مناطق الدماغ للتحليل الجزيئي أمرا روتينيا في العديد من مختبرات علم الأعصاب. يتم تجميد مناطق الدماغ هذه على الفور للحصول على بيانات نسخ عالية الجودة لتحليل مستوى النظام.

التشريح المجهري لدماغ الفأر إلى مناطق مختلفة وظيفيا وتشريحيا

تقدم هذه المقالة بروتوكول خطوة بخطوة لزرع القنية المباشرة في ماجنا cisterna من الخنازير.<br...

زرع القنية المباشرة في ماجنا سيسترنا من الخنازير

هنا ، نقدم طريقة لتقييم الأداء والسلامة على المدى الطويل لمصفوفات الأقطاب الكهربائية تحت الجافية اللينة في نموذج صغير ، مع وصف الطريقة والأدوات الجراحية ، والتصوير بالرنين المغناطيسي بعد العملية الجراحية ، والفيزيولوجيا الكهربية للقشرة السمعية ، والخصائص الكهروكيميائية للزرع ، والكيمياء المناعية بعد الوفاة.

زرع مصفوفة تخطيط كهربية القشرية الرخوة تحت الجافية (ECoG) والتسجيل القشري طويل الأمد في الخنازير الصغيرة

يصف هذا البروتوكول إجراء استئصال الجمجمة باستخدام مثقاب هوائي عالي السرعة على خنزير Landrace الدنماركي البالغ من العمر 3 أشهر. يتم الوصول من خلال العظم الجبهي ويكشف عن الأم الجافية البطنية ونصفي الكرة المخية الأساسيين. يسمح هذا الإجراء بالوصول إلى جزء كبير من دماغ الخنزير.

الوصول إلى دماغ الخنزير عن طريق استئصال القحف عالي السرعة بالهواء المضغوط

تم وصف طريقة مبتكرة لبناء مصفوفات دماغية قابلة للتوسع لقطع شرائح الإكليل أو السهمية لتطبيقها على الخنازير الوليدة. يستخدم هذا النهج الاقتصادي صفائح أكريليك منحوتة باستخدام قوالب من قالب دماغ بجل الأغاروز، ويطبق على عدة أنواع، ويسمح بالتوسع لاستيعاب نمو الدماغ.

تصنيع مصفوفة دماغية قابلة للتوسع قابلة للتخصيص عبر مراحل النمو

تعلم استخراج وتشريح دماغ الخنزير المستأنس لدراسات علم الأعصاب التشريحية. يوضح هذا البروتوكول خطوات دقيقة لإزالة الدماغ والحفاظ على أنسجته لأغراض البحث العلمي.

استخراج وتشريح دماغ الخنزير المستأنس

استكشف المزيد من الفيديوهات