Name: استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: تعلم بروتوكول استئصال الكبد الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ لدراسة آليات تجديد الكبد على المستوى الجزيئي والخلوي. هذه الطريقة تتيح للباحثين استخدام النماذج الوراثية لفهم أمراض الكبد البشرية وتطوير علاجات جديدة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

أنا.M.O. معتمد من قبل NIAAA (F32AA027135). W.G. مدعوم من قبل R01DK090311، R01DK105198، R24OD017870، وبرنامج كلوديا آدامز بار للتميز في أبحاث السرطان. دبليو جي هو باحث بيو في العلوم الطبية الحيوية.

وأثيرت حمار وحشي وتربية وفقا للإجراءات القياسية. تمت الموافقة على التجارب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في مستشفى بريغهام والنساء (2016N000405). تم صائم حمار وحشي الكبار لمدة 24 ساعة قبل بدء البروتوكول. مياه النظام يشير إلى المياه في خزانات الإسكان حمار وحشي في المرفق المائي.
1. التحضير والتخدير
<ol><li>إعداد 0.016٪ Tricaine الحل في مياه النظام. تنبيه: Tricaine هو مهيج إذا كان يأتي في اتصال مع العينين والجلد، أو الجهاز التنفسي.</li>
	<li>إعداد اسفنجة لعقد حمار وحشي مخدر خلال بروتوكول تشريح. قطع اسفنجة كاملة إلى أرباع. باستخدام شفرة حلاقة، قم بإزالة إسفين رقيقة من الإسفنج الذي يمتد بالتوازي مع المحور الطويل من الربع الإسفنج.<ol>
<li>يجب أن يكون الشق طويلا بما يكفي لاستيعاب سمكة بالغة (وهذا يختلف بين أحجام مختلفة من الأسماك). على سبيل المثال، بالنسبة للأسماك البالغة 35 ملم في الطول، يجب أن يكون طول الشق 20 ملم. يتم عقد الرأس والجسم بشكل مريح في الاسفنج، ولكن الذيل يمتد الماضي حافة الاسفنج(الشكل 1B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>نقع الاسفنج في حل Tricaine 0.016٪.</li>
	<li>وضع حمار وحشي الكبار (سواء ذكر أو أنثى) في 625 مل من محلول Tricaine 0.016٪.</li>
	<li>حضانة لمدة 6 دقائق أو حتى الأسماك لا تستجيب للمس.</li>
	<li>باستخدام ملقط، وإزالة بعناية الأسماك من خزان Tricaine ووضع الجانب البطيني السمك حتى في الأخدود من الاسفنج (الشكل 1A - B).</li>
	<li>ضع الإسفنج تحت مجهر تشريح مع إضاءة من أعلى إلى أسفل.</li>
</ol>2. الجراحة
<ol><li>باستخدام ملقط ناعم، قرصة الجلد ومقاييس medially، فقط الخلفي إلى القلب(الشكل 1B).</li>
	<li>باستخدام مقص الربيع محملة، وجعل خفض تحت ملقط لخلق ثقب في تجويف الجسم (الشكل 1C - D). الحرص على عدم إصابة القلب أو الأوعية الدموية الرئيسية، لأن هذا سيؤدي إلى زيادة معدل الوفيات.</li>
	<li>باستخدام مقص محملة الربيع، وجعل شق 3-4 ملم على طول البطن، ومعالجة الخلفي حتى الشق يصل في زعانف الحوض(الشكل 1D - E). عند هذه النقطة، قد يكون الفص البطني للكبد مرئيا من خلال الشق.</li>
	<li>اضغط على جانبي الاسفنج بيد واحدة لإجبار الأعضاء الحشوية على الخروج من تجويف الجسم. الفص البطني للكبد سوف تكون مرئية على رأس الأمعاء (الأرقام 1F, 2A-B). سيظهر الكبد كبنية وردية أو برتقالية منتشرة على الأمعاء الذهبية البنية. يتم استرداد الحيوانات المعينة كضوابط صورية في هذه المرحلة.</li>
	<li>الضغط على ملقط غرامة بحيث اثنين من tines لمس. مع الحفاظ على الضغط على الاسفنج ، الشريحة من علب ملقط غرامة في ما بين الكبد والأمعاء(الشكل 1G). الحرص على عدم ثقب الأمعاء، لأن هذا سيؤدي إلى زيادة معدل الوفيات.</li>
	<li>تخفيف الضغط ببطء على ملقط بحيث الطنين الابتعاد عن بعضها البعض (الشكل 1H). هذا العمل انزلاق يقطع العديد من المرفقات الوريد البوابة بين الفص البطني والأمعاء (الشكل 2B)، وضروري لإزالة الفص البطني نظيفة. كرر هذه العملية حتى يتم قطع جميع اتصالات البوابة بين الكبد والأمعاء.</li>
	<li>قشر الفص البطني من الأمعاء باستخدام ملقط ناعم وقطع الفص البطني خالية من بقية الكبد (الشكل 1I).</li>
	<li>ينتج عن هذا الإجراء استئصال جزء من الهيباتيكومي ثلث(الشكل 1J).</li>
</ol>3. الانتعاش
<ol><li>إزالة بعناية الأسماك من الإسفنج ووضعها في خزان من مياه النظام.</li>
	<li>ماصة نظام المياه على الخياشيم لبضع دقائق حتى الأسماك تسبح من تلقاء نفسها(الشكل 1K).</li>
	<li>مراقبة الأسماك لمدة 2-4 ساعات قبل وضعها مرة أخرى على النظام. لا تطعم السمك لمدة 24 ساعة كاملة بعد الجراحة.</li>
	<li>مراقبة الأسماك يوميا طوال مدة التجربة.</li>
	<li>مع مرور الوقت، شق في جدار الجسم سوف تلتئم بشكل طبيعي دون الحاجة إلى الغرز (الشكل 1L،2C).</li>
</ol>4. الفص البطني إلى تحليل طول الأمعاء
<ol><li>قتل جميع الحيوانات الموجهة للتحليل في الماء المثلج لمدة 10 دقائق حتى تتوقف جميع الحركات opercular.</li>
	<li>إزالة الأسماك من الماء المثلج ووضعها الجانب البطني حتى في الأخدود من اسفنجة.</li>
	<li>باستخدام مقص محملة الربيع، وجعل شق في جدار الجسم البطني في الموقف الأمامي الخلفي للقلب. ثم جعل اثنين من أكثر الشقوق التي تعمل على طول المحور الأمامي الخلفي من الشق الأول على طول الطريق إلى زعانف الحوض. (الشكل 2A).</li>
	<li>قشر الظهر الجلد والعضلات للكشف عن الأجهزة الحشوية (الشكل 2A).</li>
	<li>الحصول على صور ذات مجال مشرق والفلورسنت من الأجهزة الحشوية باستخدام المجهر epifluorescence. وسيشمل مجال الرؤية هذا المنطقة التي أعيد فيها استئصال الفص البطني. ولأن الحيوانات يقتل رميا بالرصاص قبل التحليل، فإن هذا النوع من التحليل يحول دون التصوير طويل الأجل لنفس الأسماك.</li>
</ol>5. تحليل نسبة الوزن الكبد إلى الجسم
<ol><li>قتل جميع الحيوانات الموجهة للتحليل في الماء المثلج لمدة 10 دقائق حتى تتوقف جميع الحركات opercular.</li>
	<li>ضع السمك في أنبوب مخروطي سعة 50 مل.</li>
	<li>إضافة 25 مل من 4٪ بارافورمالديهايد في برنامج تلفزيوني 1x و 0.3٪ توين إلى الأنبوب. تنبيه: الفورمالديهايد سام، وينبغي دائما معالجة الحلول التي تحتوي على الفورمالديهايد في غطاء محرك السيارة الكيميائية.</li>
	<li>نوتات لمدة 48 ساعة في 4 درجة مئوية.</li>
	<li>أداء أربعة يغسل 10 دقيقة في برنامج تلفزيوني 1x و 0.3٪ توين.</li>
	<li>استرداد الأسماك مع ملقط، ولطخة الجافة على منشفة ورقية.</li>
	<li>سجل وزن السمك بأكمله.</li>
	<li>باستخدام مقص محملة الربيع، وجعل شق في جدار الجسم البطني في الموقف الأمامي الخلفي للقلب. ثم، جعل اثنين من أكثر الشقوق التي تعمل على طول المحور الأمامي الخلفي من الشق الأول على طول الطريق إلى زعانف الحوض. (الشكل 2A).</li>
	<li>قشر الظهر الجلد والعضلات للكشف عن الأجهزة الحشوية (الشكل 2A).</li>
	<li>الحصول على صور ذات مجال مشرق للكبد باستخدام المجهر epifluorescence.</li>
	<li>تشريح الكبد، ووضع قطعة من الكبد على قارب الوزن.</li>
	<li>سجل وزن الكبد.</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+liver+regeneration+and+growth+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Principles of liver regeneration and growth homeostasis.</a> Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).</li>
<li>Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+it+new+again%3A+insight+into+liver+development%2C+regeneration%2C+and+disease+from+zebrafish+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+growth+in+the+embryo+and+during+liver+regeneration+in+zebrafish+requires+the+cell+cycle+regulator+uhrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APC+mutant+zebrafish+uncover+a+changing+temporal+requirement+for+wnt+signaling+in+liver+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development.</a> Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).</li>
<li>Dovey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II+is+required+for+embryonic+development+and+liver+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Def+activates+p53-dependent+TGF%CE%B2+signalling+and+causes+scar+formation+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy.</a> PLoS One. 9, (2014).</li>
<li>Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+characterization+of+the+dorsal+lobes+after+hepatectomy+of+the+ventral+lobe+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish.</a> BMC Genomics. 16, 979(2015).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Journal of Cellular Physiology. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Grisham, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+principles+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22The+Liver%3A+Biology+and+Pathobiology%3A+Fifth+Edition%22%5BJournal%5D)">Organizational principles of the liver.</a> The Liver: Biology and Pathobiology: Fifth Edition. , 1-15 (2009).</li>
</ol>

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

الاختلافات التشريحية بين سمك الحمار الوحشي ونماذج الثدييات لتجديد الكبد تمثل تحديات فريدة من نوعها لاستئصال الكبد. الكبد في حمار وحشي على مقربة من القلب والأمعاء. عن غير قصد إتلاف أي من الأعضاء يؤدي إلى زيادة معدل الوفيات. لا يتم تغليف كبد حمار وحشي ، مما يجعل من الصعب فصله عن الأمعاء. الكبد يتلقى الدم الغني بالمغذيات من الأمعاء من خلال الأوردة البوابة. في الثدييات ، تتلاقى الأوردة التي تغادر الأمعاء على وريد البوابة الأولية التي تنقسم بعد ذلك عند دخولها الكبد12. في المقابل ، يتلقى كبد حمار وحشي ت...

من بين الأعضاء الصلبة في البشر ، والكبد هو الجهاز الوحيد القادر على تجديد1. وهذا أمر بالغ الأهمية، كما الكبد هو جهاز أساسي، المسؤولة عن وظائف التمثيل الغذائي الرئيسية، وتخزين الطاقة، وإزالة السموم من الدم، وإفراز بروتينات البلازما، وإنتاج الصفراء2. يتم استبدال خلايا الكبد المفقودة بسبب الأضرار السامة أو الالتهابية في المقام الأول عن طريق تقسيم خلايا الكبد المتبقية1. نموذج تجريبي كلاسيكي واحد لدراسة تجديد الكبد هو استئصال الكبد الجزئي ، حيث تتم إزالة الفصوص الفردية للكبد ، وترك الفصوص المتبقية سليمة3. تم تطوير هذا الإجراء في البداية في الفئران ، حيث تتم إزالة ما يقرب من ثلثي كتلة الكبد. بعد استئصال الكبد الجزئي في الثدييات ، يحدث التجديد التعويضي في الفصوص المتبقية حتى يستعيد الكبد كتلته الأولية. وتجدر الإشارة إلى أن كبد الثدييات لا يحل محل الفصوص المفقودة.
Zebrafish (دانيو rerio) تمثل نموذجا قابلة للسحب لدراسة تجديد الأعضاء الكبار4. الكبد حمار وحشي، في حين تختلف هيكليا عن الكبد الثدييات، و تتكون من نفس أنواع الخلايا ويخدم نفس الوظيفة كما هو الحال في الثدييات2. ويتكون من ثلاثة فصوص، مع اثنين من الفصوص الظهرية وفص بطني واحد التي تتسطح على طول الأمعاء. وقد سبق إجراء استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي، مع روايات متضاربة حول الطريقة الدقيقة للتجديد. عادة، يتم إجراء استئصال الهيباتيك الجزئي ثلث عن طريق إزالة الفص البطني بأكمله. وأشارت التقارير الأولية إلى أنه بعد إزالة الفص البطني ، تم تجديده بالكامل في غضون أسبوع5،6،7، مما يشير إلى أنه على النقيض من كبد الثدييات ، فإن كبد الحمار الوحشي قادر على التجديد غير المتبلور. أظهرت الدراسات اللاحقة أن إزالة الفص البطني أدت إلى تجديد تعويضي في الفصوص الظهرية ، بدلا من تجديد الفص البطني المفقود ، وفي النهاية استعادة كتلة الكبد في غضون أسبوع8،9. كشف التنميط النسخي للفص الظهري بعد استئصال الفص البطني عن تغييرات كبيرة مرتبطة بالتجديد التعويضي10. وبالنظر إلى أن طريقة تجديد الكبد يمكن أن تختلف مع مدىالإصابة 8، تكهننا بأن التناقضات في النتائج قد تكون بسبب الاختلاف التقني في بروتوكول استئصال الكبد الجزئي بين مجموعات البحث.
يصف هذا البروتوكول إجراء لإجراء استئصال الهيباتيك الجزئي ثلث على حمار وحشي الكبار عن طريق إزالة الفص البطني. وستكون هذه التقنية قيمة لتقييم آليات تجديد الكبد.

<table><tbody><tr><td>محلول مائي بارافورمالدهايد 16٪ ،</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td> من الدرجة <td>EM 15700</td><td></td></tr><tr><td>50 مل أنابيب الطرد المركزي فالكون ، مادة البولي بروبيلين ،</td><td>352098</td><td></td><td>كورنينج</td> معقمة</tr><tr><td>AS 82 / 220.R2 PLUS مقياس التوازن التحليلي</td><td>خليج الدولة & Systems, INC.</td><td>WL-104-1051</td><td></td></tr><tr><td>Dumont # 55 أدوات</td><td>العلوم الدقيقة</td> الملقط <td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>EMS Kuehne Coverglass / عينة ملقط</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>72997-07</td><td></td></tr><tr><td>مجهر epifluorescence</td><td>Zeiss</td><td>Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>Mastertop تنظيف السليلوز تنظيف الإسفنج</td><td>Amazon</td><td>B07CBSM53Z</td><td></td></tr><tr><td>PBS10X Liquid Conc 4L</td><td>EMD Millipore</td><td>6505-4L</td><td></td></tr><tr><td>مقص دقيق فائق الدقة ، 3 1/4 "</td><td>أدوات البحث الطبية الحيوية</td><td>المستقيمة 11-1020</td><td></td></tr><tr><td>تريكايين ميثان سولفونات</td><td>سيندل</td><td>TRIC-M-GR-0010</td><td></td></tr><tr><td>توين 20 ، فيشر الكواشف الحيوية</td><td>فيشر العلمية</td><td>BP337-500</td><td></td></tr></tbody></table>

استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

فشل الكبد هو واحد من الأسباب الرئيسية للوفاة في جميع أنحاء العالم، والوفيات الناجمة عن أمراض الكبد المزمنة ترتفع بشكل حاد في الولايات المتحدة. الكبد السليم قادر على تجديد من الأضرار السامة، ولكن في أمراض الكبد المتقدمة، وضعف القدرة الطبيعية للكبد لتجديد. وقد برزت حمار وحشي كنظام تجريبي قوي لدراسة التجديد. وهي نموذج مثالي لدراسة تجديد الكبد من استئصال الكبد الجزئي، وهو إجراء له صلة سريرية مباشرة تتم فيه إزالة جزء من الكبد جراحيا، تاركا الباقي سليما. لا يوجد بروتوكول قياسي لاستئصال الهيباتيك الجزئي؛ وقد استخدمت الدراسات السابقة باستخدام هذا النموذج بروتوكولات مختلفة قليلا وأفادت نتائج متباينة. الموصوفة هنا هو كفاءة، بروتوكول استنساخها لإجراء استئصال الهيباتيك الجزئي في حمار وحشي الكبار. نحن نستخدم هذه التقنية لإثبات أن حمار وحشي قادر على تجديد غير متبلور للفص المكروب. يمكن استخدام هذا البروتوكول لمزيد من الاستجواب الآليات اللازمة لتجديد الكبد في حمار وحشي.

من أجل دراسة الإمكانات التجديدية لكبد حمار وحشي البالغين ، قمنا بإجراء استئصال الكبد الجزئي (PHX) في سمك الحمار الوحشي البالغ. بشكل عام، تم اختيار كبار البالغين (30-40 ملم في الطول)، تتراوح أعمارهم بين 1.5-2.5 سنة. وفي إطار التجارب الفردية، تم اختيار الحيوانات من نفس الخزان، وكانت مطابقة للعمر والحجم. كتحكم مناسب ، استخدمنا العمليات الجراحية الصورية التي تم فيها تخدير الحيوان وتلقي شقا كبيرا في جدار الجسم البطني ولكن تم استرداده دون إزالة أي أنسجة. وتراوحت معدلات البقاء على قيد الحياة للضوابط صورية من 90٪ إلى 100٪ لكل من...

يصف هذا البروتوكول إجراء إزالة الفص البطني للكبد في سمك الحمار الوحشي البالغ لتمكين دراسة تجديد الكبد.

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

سيسمح هذا البروتوكول للباحثين بالاستفادة من الأدوات الكيميائية والجينية المتاحة لدراسة آليات تجديد الكبد في سمك الحمار الوحشي. يسمح استئصال الكبد الجزئي بالإزالة الدقيقة للأنسجة لتحفيز تجديد الكبد دون الحاجة إلى الآثار على مستوى الجسم لإصابة الكبد السامة. فقط من خلال فهم الآليات الجزيئية والخلوية لتجديد الكبد يمكننا تصميم علاجات جديدة لعلاج المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد المتقدمة.للبدء، وإزالة الأسماك من خزان Tricaine باستخدام ملقط وتضمينها في الأخدود من اسفنجة غارقة Tricaine مع الجانب البطني حتى. ثم ضع الإسفنج تحت مجهر تشريح مع إضاءة من أعلى إلى أسفل. قرصة الجلد والمقاييس فقط الخلفي إلى القلب مع ملقط ناعم وخلق ثقب في تجويف الجسم عن طريق إجراء قطع تحت ملقط مع مقص الربيع محملة.تدوير الإسفنج وجعل شق 3-4 ملليمتر على طول البطن عن طريق قطع posterially نحو زعانف الحوض. ثم تدوير الإسفنج مرة أخرى. اضغط على جانبي الاسفنج بيد واحدة لإجبار الأعضاء الحشوية على الخروج من تجويف الجسم.الفص البطني للكبد موجود على قمة الأمعاء ، والكبد هو بنية وردية أو برتقالية منتشرة على الأمعاء البنية الذهبية ، ويمكن تصورها بوضوح مع فلورية CFP. الضغط على ملقط غرامة بحيث tines لمس بعضها البعض والانزلاق tines بين الكبد والأمعاء. ثم فصل ببطء الصبغات لكسر المرفقات الوريد البوابة بين الكبد والأمعاء.كرر هذه العملية حتى يتم قطع جميع وصلات البوابة بين الكبد والأمعاء ، وسحب الفص البطني من الأمعاء باستخدام ملقط ناعم. قطع الفص البطني خالية من بقية الكبد. فحص الحيوان مع فلورية CFP يدل على أن الفص البطني قد أزيلت.عند الانتهاء، نقل بعناية الأسماك من الإسفنج إلى الخزان الذي يحتوي على مياه النظام وتيار مياه النظام على الخياشيم لبضع دقائق حتى يتعافى السمك ويسبح من تلقاء نفسها. بعد القتل الرحيم للأسماك، إزالته من الماء المثلج. وضعه في الأخدود من اسفنجة مع الجانب البطني حتى وجعل شق جدار الجسم البطني في الموقف الخلفي الأمامي للقلب.ثم إجراء شقين آخرين من حواف الشق الأول التي تعمل على طول المحور الخلفي الأمامي إلى زعانف الحوض، وقشر الجلد والعضلات مرة أخرى للكشف عن الأعضاء الحشوية. يمكن الآن تصور الأعضاء الحشوية مع كل من المجال الساطع والمجهر الفلوري. تم تقدير استعادة الكبد بعد استئصال الكبد الجزئي عن طريق حساب نسبة وزن الكبد إلى الجسم ، والتي كانت 1.8٪ للذكور و 3.3٪ للإناث.تم تحديد نسبة وزن الكبد إلى الجسم من كلا الجنسين في يوم ما بعد الجراحة صفر ، واليوم السابع في استئصال الكبد الجزئي والضوابط الصورية. في يوم ما بعد الجراحة صفر ، يكون للحيوانات الصورية فص بطني مرئي ، ولكن في استئصال الكبد الجزئي ، كان الفص البطني غائبا تماما ، مما أدى إلى انخفاض بنسبة 30٪ في الذكور و20٪ في إناث نسب وزن الكبد إلى الجسم. في اليوم السابع بعد الجراحة في استئصال الكبد الجزئي ، لم يتم تجديد الفص البطني ، وكانت نسب وزن الكبد إلى الجسم في استئصال الكبد الجزئي والضوابط الصورية قابلة للمقارنة ، مما يشير إلى استعادة كتلة الكبد بعد استئصال الكبد الجزئي.تم تحديد تأثير الوقت على تجديد الفص البطني من خلال إجراء استئصال الهيباتيك الجزئي الكامل وقياس الفص البطني إلى نسبة طول الأمعاء. احتل الفص البطني 50 إلى 100٪ من طول الأمعاء في الضوابط الصورية ، ولكن تم تخفيضه بشدة في استئصال الهباتيك الجزئي. كان لدى استئصال الهيباتيك الجزئي في يوم ما بعد الجراحة 36 زيادة في نسبة الفص البطني إلى الأمعاء مقارنة باليوم الأول بعد الجراحة.لوحظ زيادة كبيرة إحصائيا في حجم الفص البطني في الحيوانات التي تتعافى من استئصال الهيباتيك الجزئي في يوم ما بعد الجراحة 36 مقارنة باليوم الأول ، ولكن ليس في الضوابط الصورية. قامت بعض الحيوانات بتجديد الفص البطني، ولكن بعضها لم يفعل ذلك، مما يشير إلى اختلاف في استجابة الجراحة. الجزء الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هو فصل الكبد والأمعاء بشكل نظيف بحيث يمكن إزالة الفص البطني بالكامل.يمكن إجراء استئصال الكبد الجزئي في حمار وحشي في خطوط متحولة أو معدلة وراثيا لاقول ان المتطلبات الوراثية لتجديد الكبد.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

زرع نخاع الكلى في الجامعة اسماك الزرد الكبار

الكلى الزرد هي موطن كل من الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى / السلف الكبار ، ويمثل فرصة رائعة لدراسة هذه الخلية أنواع وذريتها في الفقاريات الحي النموذجي. هنا ، علينا أن نظهر إجراء تشريح التفصيلية التي تمكن الباحث من تحديد وإزالة جراحيا الكلى الزرد الكبار ، والتي يمكن استخدامها لتطبيقات مثل عزل الخلايا ، وزرع ، ودراسات التعبير و / أو السكان الكلى خلايا الدم.

تشريح الكلى اسماك الزرد الكبار

تصف المقالة استئصال الكبد المستهدف ، وهي طريقة للحث على موت خلايا الكبد باستخدام الميترونيدازول في يرقات الزرد المعدلة وراثيا. يصف بروتوكول العينة عملية توليد واستئصال الكبد المستهدف في أسماك الزرد ومعالجته وتقييمه.

استئصال الكبد المستهدف: إحداث موت خلايا الكبد باستخدام الميترونيدازول في يرقات الزرد المعدلة وراثيا

يتوسع استخدام أسماك الزرد لأبحاث القلب والأوعية الدموية نحو البحث عن قلوب البالغين. بالنسبة لهذه التطبيقات ، يعد العزل السريع والبسيط لأنسجة القلب أمرا أساسيا لتجنب تغييرات ما بعد الوفاة والحصول على عدد كاف من العينات. هنا ، نصف طريقة سريعة وقابلة للتكرار لتشريح قلوب أسماك الزرد البالغة.

التعافي من اسماك الزرد الكبار قلوب للتطبيقات عالية الإنتاجية

للمساعدة في تقييم الآليات الجزيئية الكامنة وراء تجديد الكبد الذي يحركه الزرد الصفراوي ، أنشأنا نموذجا لإصابة الكبد يتم فيه استئصال خلايا الكبد التي تعبر عن النيترومكتيز وراثيا عند علاج الميترونيدازول.  في هذا البروتوكول ، نصف كيفية التلاعب بمهارة باستئصال خلايا الكبد ومراقبتها وتحليلها وتجديد الكبد الذي يحركه القنوات الصفراوية.

تذرية الكبدية محددة في الزرد لدراسة يحركها صفراوية تجديد الكبد

يؤدي التليف المستمر مع ترسب بروتينات المصفوفة خارج الخلية المفرطة إلى تليف الكبد. يعد تعاطي الكحول أحد الأسباب الرئيسية لأمراض الكبد الحادة. أنشأنا نموذجا للكبد الليفي الناجم عن الإيثانول لدراسة آليات واستراتيجيات تعزيز تجديد خلايا الكبد عند الإصابة الناجمة عن الكحول.

تطوير متليفة الكبد نموذج الناجم عن الإيثانول في الزرد لدراسة السلف بوساطة الخلايا الكبدية التجديد

يصف هذا البروتوكول التحليلات النسيجية للكبد من اليرقات الزرد التي تم علاجها مع الايثانول 2٪ لمدة 24 ساعة. هذه النتائج العلاج الإيثانول الحاد في دهن الكبد وتورم في الأوعية الدموية الكبدية.

التحاليل النسيجية لإصابات الكبد الكحولية الحادة في الزرد

فإنه يظل تحديا كبيرا لوضع الشرطي الجينات-خروج المغلوب أو فعالية الجينات-ضربة قاضية في الأجهزة الزرد الكبار. هنا نحن تقرير وضع بروتوكول للمنفذ siRNA نانوحبيبات بوساطة إسكات الجينات في قلب الزرد الكبار، مما يوفر طريقة فقدان لوظيفة جديدة لدراسة الأجهزة الكبار في الزرد والكائنات الأخرى في النموذج.

SiRNA نانوحبيبات بوساطة إسكات الجينات في قلب الزرد الكبار

هنا نبين طريقة لقياس حجم الكبد في سمك الحمار الوحشي اليرقان، وتوفير وسيلة لتقييم آثار التلاعب الجيني والدوائي على نمو الكبد والتنمية.

تحديد حجم الكبد في لارفال زيبرافيش باستخدام المجهر برايتفيلد

هنا ، نقدم كيفية توليد نموذج الزرد المرتبط بمرض الكبد الدهني غير الكحولي (NAFLD) المرتبط بسرطان الخلايا الكبدية (HCC) لدراسة تأثير فائض الكوليسترول على البيئة الدقيقة للكبد ومشهد الخلايا المناعية.

تحليل البيئة الدقيقة للكبد أثناء التقدم المبكر لسرطان الخلايا الكبدية المرتبط بمرض الكبد غير الكحولي في أسماك الزرد

تم وصف طريقة حقن جديدة داخل الصفاق (IP) في الزرد البالغ. عند التعامل مع المركبات السامة مثل دوكسوروبيسين ، يكون هذا الإجراء أكثر فعالية من طريقتي IP المبلغ عنهما سابقا. تم تصميم هذه التقنية ليتم اعتمادها بسهولة من قبل الباحثين ذوي الخبرة المحدودة في نموذج الزرد.

تقنية الحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة التي تقلل من تلف الجسم والوفيات المرتبطة به

تعلم بروتوكول استئصال الكبد الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ لدراسة آليات تجديد الكبد على المستوى الجزيئي والخلوي. هذه الطريقة تتيح للباحثين استخدام النماذج الوراثية لفهم أمراض الكبد البشرية وتطوير علاجات جديدة.

استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ

استكشف المزيد من الفيديوهات