استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ

سيسمح هذا البروتوكول للباحثين بالاستفادة من الأدوات الكيميائية والجينية المتاحة لدراسة آليات تجديد الكبد في سمك الحمار الوحشي. يسمح استئصال الكبد الجزئي بالإزالة الدقيقة للأنسجة لتحفيز تجديد الكبد دون الحاجة إلى الآثار على مستوى الجسم لإصابة الكبد السامة. فقط من خلال فهم الآليات الجزيئية والخلوية لتجديد الكبد يمكننا تصميم علاجات جديدة لعلاج المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد المتقدمة.

للبدء، وإزالة الأسماك من خزان Tricaine باستخدام ملقط وتضمينها في الأخدود من اسفنجة غارقة Tricaine مع الجانب البطني حتى. ثم ضع الإسفنج تحت مجهر تشريح مع إضاءة من أعلى إلى أسفل. قرصة الجلد والمقاييس فقط الخلفي إلى القلب مع ملقط ناعم وخلق ثقب في تجويف الجسم عن طريق إجراء قطع تحت ملقط مع مقص الربيع محملة.

تدوير الإسفنج وجعل شق 3-4 ملليمتر على طول البطن عن طريق قطع posterially نحو زعانف الحوض. ثم تدوير الإسفنج مرة أخرى. اضغط على جانبي الاسفنج بيد واحدة لإجبار الأعضاء الحشوية على الخروج من تجويف الجسم.

الفص البطني للكبد موجود على قمة الأمعاء ، والكبد هو بنية وردية أو برتقالية منتشرة على الأمعاء البنية الذهبية ، ويمكن تصورها بوضوح مع فلورية CFP. الضغط على ملقط غرامة بحيث tines لمس بعضها البعض والانزلاق tines بين الكبد والأمعاء. ثم فصل ببطء الصبغات لكسر المرفقات الوريد البوابة بين الكبد والأمعاء.

كرر هذه العملية حتى يتم قطع جميع وصلات البوابة بين الكبد والأمعاء ، وسحب الفص البطني من الأمعاء باستخدام ملقط ناعم. قطع الفص البطني خالية من بقية الكبد. فحص الحيوان مع فلورية CFP يدل على أن الفص البطني قد أزيلت.

عند الانتهاء، نقل بعناية الأسماك من الإسفنج إلى الخزان الذي يحتوي على مياه النظام وتيار مياه النظام على الخياشيم لبضع دقائق حتى يتعافى السمك ويسبح من تلقاء نفسها. بعد القتل الرحيم للأسماك، إزالته من الماء المثلج. وضعه في الأخدود من اسفنجة مع الجانب البطني حتى وجعل شق جدار الجسم البطني في الموقف الخلفي الأمامي للقلب.

ثم إجراء شقين آخرين من حواف الشق الأول التي تعمل على طول المحور الخلفي الأمامي إلى زعانف الحوض، وقشر الجلد والعضلات مرة أخرى للكشف عن الأعضاء الحشوية. يمكن الآن تصور الأعضاء الحشوية مع كل من المجال الساطع والمجهر الفلوري. تم تقدير استعادة الكبد بعد استئصال الكبد الجزئي عن طريق حساب نسبة وزن الكبد إلى الجسم ، والتي كانت 1.8٪ للذكور و 3.3٪ للإناث.

تم تحديد نسبة وزن الكبد إلى الجسم من كلا الجنسين في يوم ما بعد الجراحة صفر ، واليوم السابع في استئصال الكبد الجزئي والضوابط الصورية. في يوم ما بعد الجراحة صفر ، يكون للحيوانات الصورية فص بطني مرئي ، ولكن في استئصال الكبد الجزئي ، كان الفص البطني غائبا تماما ، مما أدى إلى انخفاض بنسبة 30٪ في الذكور و20٪ في إناث نسب وزن الكبد إلى الجسم. في اليوم السابع بعد الجراحة في استئصال الكبد الجزئي ، لم يتم تجديد الفص البطني ، وكانت نسب وزن الكبد إلى الجسم في استئصال الكبد الجزئي والضوابط الصورية قابلة للمقارنة ، مما يشير إلى استعادة كتلة الكبد بعد استئصال الكبد الجزئي.

تم تحديد تأثير الوقت على تجديد الفص البطني من خلال إجراء استئصال الهيباتيك الجزئي الكامل وقياس الفص البطني إلى نسبة طول الأمعاء. احتل الفص البطني 50 إلى 100٪ من طول الأمعاء في الضوابط الصورية ، ولكن تم تخفيضه بشدة في استئصال الهباتيك الجزئي. كان لدى استئصال الهيباتيك الجزئي في يوم ما بعد الجراحة 36 زيادة في نسبة الفص البطني إلى الأمعاء مقارنة باليوم الأول بعد الجراحة.

لوحظ زيادة كبيرة إحصائيا في حجم الفص البطني في الحيوانات التي تتعافى من استئصال الهيباتيك الجزئي في يوم ما بعد الجراحة 36 مقارنة باليوم الأول ، ولكن ليس في الضوابط الصورية. قامت بعض الحيوانات بتجديد الفص البطني، ولكن بعضها لم يفعل ذلك، مما يشير إلى اختلاف في استجابة الجراحة. الجزء الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هو فصل الكبد والأمعاء بشكل نظيف بحيث يمكن إزالة الفص البطني بالكامل.

يمكن إجراء استئصال الكبد الجزئي في حمار وحشي في خطوط متحولة أو معدلة وراثيا لاقول ان المتطلبات الوراثية لتجديد الكبد.