استخدام حقن تتبع الخلايا للتحقيق في أصل الخلايا المكونة للنيوينتيما في نموذج الجدار الجانبي العجزي للفئران

باستخدام تطبيق مباشر لتتبع الخلايا داخل الشريان الأبهري ، يمكننا تحليل دور الخلايا البطانية الناشئة من الشريان الأم في تكوين neointima في نقطتين زمنيتين مختلفتين. ميزة كبيرة لهذه التقنية هي حقن مباشر من نقطة واحدة وتفسيرية في الجسم الحي مما يجعل هذا النموذج تقنية قوية وقابلة للتكرار. قبل الجراحة ، احتضن الحقائب الشريانية من الفئران المانحة في 0.1٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم لمدة 10 ساعات عند 37 درجة مئوية للحصول على تمدد الأوعية الدموية منزوع الخلايا.

اجمع هذه الحقائب من الحيوانات المانحة قبل أيام قليلة من الجراحة. للبدء ، قم بتحليل سلوك الحيوان وفحص الأغشية المخاطية والتورجور كجزء من الفحص السريري قبل الجراحة. سجل وزن كل.

لتحريض التخدير ، ضع جميع الفئران في صندوق نظيف مزود بالأكسجين حتى فقدان الوعي بعد خمس إلى 10 دقائق. تحقق من عمق التخدير من خلال عدم وجود منعكس سحب الدواسة. ضع الفئران في وضع ضعيف واحلق منطقة الصدر والبطن باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية.

باستخدام الشريط ، قم بتثبيت مخالب الفئران على لوحة مغطاة بوسادة تدفئة متصلة بمسبار مستقيمي ذاتي التنظيم. أدخل مسبار المستقيم في فتحة شرج الفئران للحفاظ على درجة الحرارة المطلوبة البالغة 37 درجة مئوية بمساعدة وسادة التدفئة. ثم قم بتثبيت مستشعر على الساق الخلفية اليمنى متصلا بنظام محوسب للتحقق من العلامات الحيوية أثناء الجراحة.

للعناية بالفترة المحيطة بالتخدير، ضع مادة تشحيم عيون معقمة على العينين، وقم بتغطيتها بقناع رقائق غير شفاف لمنع الجفاف والتلف الناتج عن المصباح الجراحي. تطهير المجال الجراحي باليود البوفيدون ، ولف المجال الجراحي بطريقة معقمة. ضع مسحة صغيرة مع حشوة أرجوانية تحت الأجزاء القريبة والبعيدة من الشريان الأورطي لتصور الشريان بشكل أفضل بمجرد فصله عن الوريد التجويفي.

ثم حماية البطن مع الشاش الأبيض. في يوم التشغيل ، قم بإذابة ميكرولترين من مقتفي الخلايا عن طريق السحب في ملليلتر واحد من PBS. انقل الخليط إلى حقنة سعة ملليلتر واحد مزودة بقنية.

أطفئ الضوء في غرفة العمليات. باستخدام المجهر ، قم بإجراء الحقن من نقطة واحدة في الجزء البطني الأوسط من الشريان الأورطي باستخدام ملقط دقيق ، وحقن بعناية ملليلتر واحد من محلول ملحي هيبارين 0.9٪. حقن مقتفي الخلايا بعناية ، وقم بإيقاف تشغيل المجهر التشغيلي على الفور أيضا.

حماية البطن مع الشاش الرطب مرة أخرى. دع الصبغة تحضن لمدة 15 دقيقة على الأقل. ثم قم بتشغيل المجهر وأضواء غرفة العمليات.

استخدم الملقط الدقيق والمقص الدقيق لإجراء بضع الشرايين الطولي بحيث يبلغ طوله متوسط قطر تمدد الأوعية الدموية المحصود. ضع تمدد الأوعية الدموية بجانب الشريان الأورطي قبل إجراء بضع الشرايين لضمان الطول الصحيح. خياطة تمدد الأوعية الدموية مع ثمانية إلى 10 غرز واحدة باستخدام خياطة 10-0 غير قابلة للامتصاص.

قبل الغرزة النهائية ، قم بتسليم الملف بكثافة تعبئة تبلغ سنتيمترا واحدا. يمكن إجراء علاج الملف أو الدعامة في هذا النموذج. ثم قم بإزالة المشابك المؤقتة بعناية ، بدءا من بعيد ، تحت الري المستمر بمحلول ملحي هيبارين.

أغلق الجرح بطريقة طبقات. في نهاية الجراحة ، عكس التخدير عن طريق الحقن تحت الجلد. دع كل يعمل يتعافى في قفص نظيف حتى يستيقظ تماما ودافئ حسب الحاجة باستخدام مصباح تدفئة.

لم تختلف أحجام تمدد الأوعية الدموية الأساسية المسحوبة لليوم السابع واليوم 21 اختلافا كبيرا بالنسبة لتمدد الأوعية الدموية الخلوي أو الحيوي بين مجموعات علاج الملف أو الدعامة. أظهرت أحجام FU المسحوبة لتمدد الأوعية الدموية المنزوعة الخلايا نموا غير كبير في تمدد الأوعية الدموية الملفوف مقارنة بتمدد الأوعية الدموية الدعامات. كان حجم FU المسحوب أكبر بكثير في الملف الحيوي منه في مجموعة الدعامات.

لم تختلف كميات الخلايا الإيجابية المتتبعة للخلايا في neointima من تمدد الأوعية الدموية منزوع الخلايا اختلافا كبيرا بين المجموعات المعالجة بالدعامات أو الملفات في اليوم السابع FU ولكنها كانت أعلى بكثير في الفئران ذات الدعامات في اليوم 21 FU.No لوحظت اختلافات كبيرة في الفئران المخيطة بتمدد الأوعية الدموية الحيوية في سبعة أيام أو 21 يوما FU.In تمدد الأوعية الدموية المنزوعة الخلايا في سبعة أيام FU، بقيت خلايا إيجابية أكثر بكثير في خثرة الدعامة المعالجة مقارنة بالمجموعة المعالجة باللفائف. لم يلاحظ هذا الاختلاف في تمدد الأوعية الدموية الحيوية في سبعة أيام FU. تذكر دائما إطفاء الأنوار في غرفة العمليات قبل حقن متتبع الخلايا لمنع التلاشي. أيضا ، دع احتضان الصبغة لمدة 15 دقيقة على الأقل.